刘永庆
- 作品数：32 被引量：87H指数：6
- 供职机构：南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 生长抑素(SS)基因在大肠杆菌pT7ZZ表达系统中的克隆与表达被引量：1
- 2002年
- 目的 构建和筛选既能稳定、高效表达SS融合蛋白，又能使这种融合蛋白保持良好的SS抗原性和高水溶性等特点的重组质粒。方法 用 BamH I/Xho I (B/X）和 BamH I/EcoR I（B/E）双酶切，将含有SS基因的片段由pThioHis A中切出，然后分别克隆到 pT7ZZa中的相应酶切位点，得到pSSB/X（短尾）和pSS-B/E(长尾)两个重组质粒，用常规表达技术在大肠杆菌中对其进行表达。结果 pSS-B/X和pSS-B/E两个重组质粒在宿主菌BL21（DE3）中均获得表达，pSS-B/X获得高效表达后融合蛋白占菌体总蛋白的30．6％。两个表达菌经超声裂解后电泳发现，SS－B/X－ZZ和SS－B/E－ZZ这两种融合蛋白基本为可溶性蛋白，沉淀中含量极低。二者均具有良好的抗原性，结论pSS-B/X重组质粒很有希望成为SS基因疫苗的候选质粒。
- 陈溥言杜念兴赵国屏邓芳乌宇音杨胜利刘永庆
- 关键词：生长抑素基因克隆融合蛋白大肠杆菌
- 在大肠杆菌K99(中国QH株)菌毛形成亚单位基因(fanC)的克隆和测序中发现IS1 插入序列被引量：1
- 2002年
- 目的 构建大肠杆菌K99菌毛表达载体。方法 通过逐级亚克隆的方法克隆k99菌毛形成亚单位基因（fanC），并进行序列测定和fanC亚单位的抗原决定簇模拟，以确定突变部位。结果 克隆了包括K99菌毛形成亚单位基因（fanC）和部分fanD基因在内的一段基因，该基因与国外报道相比明显偏大。序列测定表明：在fanC尾部多出 24bp，在fanC与 fanD，的结合部有一 800bp左右的新基因。经与基因库中大肠杆菌基因作同源性比较发现，该新基因为768bp的插入序列IS1。其他基因为K99自身fonC与fanD片段之间的过渡基因。IS1的插入未改变fanD，基因的阅读框架，只是使fanD片段末端增加了 8个氨基酸。fanC亚单位的抗原决定簇模拟结果显示，K99 fanC片段具有一个非常突出的亲水区域，根据经验它应是抗原决定簇所在的部位。结论 首次发现大肠杆菌K99基因中含有插入序列IS1。
- 陈溥言杜念兴赵国屏成志恒邓芳杨胜利刘永庆
- 关键词：大肠杆菌K99抗原决定簇菌毛测序
- 从禽病门诊外检病、死鸡情况谈目前山东省鸡病流行的动态及应采取的措施
- 1994年
- 从禽病门诊外检病、死鸡情况谈目前山东省鸡病流行的动态及应采取的措施刘永庆，张秀美（山东省农科院家禽所济南２５００２３）为了准确了解山东目前鸡病流行的动态，以便确定我们研究的主攻方向及正确指导养鸡场（户）采取相应的重点防治措施，作者对１９９４年１～４月...
- 刘永庆张秀美
- 关键词：鸡病流行病学
- 非激素类免疫制剂促动物生长的研究进展被引量：10
- 2002年
- 刘永庆陈溥言杜念兴赵国屏
- 关键词：促生长剂免疫调节动物促生长作用
- 生长抑素(SS)基因在pET-32表达系统中的高效表达被引量：7
- 2003年
- 分别将SS基因克隆至pET 32a和pET 32c表达系统中 ,得到重组质粒SS N/X和SS N/S。实验结果表明 ,SS N/X Thioredoxin (硫氧还原蛋白 )和SS N/S Thioredoxin融合蛋白在IPTG (异丙基硫代 β D半乳糖苷 )诱导 3h后(37℃ )表达产量最高 ,约占菌体总蛋白的 30 %左右。 0 0 5～ 1mmol·L-1IPTG对SS融合蛋白表达产量的影响并不太大 ,0 0 5mmol·L-1IPTG即可达到有效的诱导效果 ,但单位体积内的表达产量以 0 5mmol·L-1时为最高。乳糖诱导 4h(37℃ )的效果明显低于IPTG ,但当培养时间延长至 8h时 ,2 0mg·mL-1的乳糖可达到与IPTG同样的诱导效果 ,10和 5mg·mL-1的乳糖也可接近IPTG的诱导效果。SS N/X融合蛋白在 2 6℃表达时 ,主要以可溶性形式存在 ,占75 8% ,包涵体仅占 2 4 2 % ;而SS N/S融合蛋白则主要以包涵体形式存在 ,占 6 0 2 % ,可溶性蛋白仅占 39 8%。SS可溶性融合蛋白具有良好的SS抗原性。
- 刘永庆刘文波潘杰彦杜念兴陈溥言赵国屏
- 关键词：生长抑素基因IPTG动物生长
- 成年SPF鸡胃肠道中芽胞杆菌的分离与部分生物学特性鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 鉴定从SPF鸡分离出的芽胞杆菌的生物学特性。方法 从成年SPF鸡胃肠道的不同部位选择性分离 13株芽胞杆菌 ,并进行生物学特性检测。结果 ( 1)所有菌株均能在含 5 %、10 %和 15 %NaCl的LB平板上生长 ,其中 11株能在含 6 %NaCl的LB平板上生长 ,7株能在含 7%NaCl的LB平板上生长。 ( 2 ) 2株能在pH 4 0的LB平板上生长 ,8株菌能在pH 5 0生长 ;所有菌株均能在pH 6 0～ 10生长 ,其中 12株能在pH 11生长 ,11株能在pH 12生长 ,而不能在pH 13～ 14生长。 ( 3)所有菌株在 75℃水浴中均能活存 2～ 5h ;11株能活存 10h ,9株能活存2 7h。所有菌株在 10 0℃水浴中加温 ,均能活存 0 5～ 2h ,其中 11株能活存长达 3h。 ( 4 )所有菌株在pH 4 0和pH11 0的LB培养基中均能存活半年以上 ,在pH 2 0和 13 0环境中能存活 1周和 3周以上。 ( 5 )菌体以沸石粉做载体常温保存 ,1年之内含量基本不变。 ( 6 )所有菌株均具有蜡样芽胞杆菌的特性。 ( 7)所有菌株对链霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素均敏感 ,对青霉素、土霉素和黄胺药均有抗性。结论 所有菌株均有望成为制备微生态制剂的候选菌株。
- 刘永庆郭继英
- 关键词：SPF鸡胃肠道芽胞杆菌抗药性
- 生长抑素(SS)与硫氧还原蛋白(Thioredoxin)相融合生成的2种基因工程化融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达特性被引量：4
- 2003年
- 对基因工程化生长抑素 (som atostatin,SS) -硫氧还原蛋白 (Thioredoxin)融合蛋白 SS- N/ X和 SS- N/ S的表达产量、水溶性、Triton X- 10 0对 SS融合蛋白水溶性的影响、包涵体的溶解和复性特点以及 SS的抗原性与免疫原性等特性进行了研究。结果显示 ,在 30℃的低温下用 IPTG诱导表达 ,SS- N/ X融合蛋白主要以可溶性形式存在 ,占 75 .8% ,包涵体仅占 2 4 .2 % ;而 SS- N/ S融合蛋白则主要以包涵体的形式存在 ,占 81.1% ,可溶性蛋白仅占 18.9% ;32 C载体(p ET- 32 C)蛋白则居二者之间 ,可溶性蛋白与包涵体大约等比例出现。SS- N/ S在低温下诱导可超量表达 SS融合蛋白 ,其表达量约占菌体总蛋白的 4 0 .94 %。 0 .5 % Triton X- 10 0对融合蛋白的水溶性有非常显著的影响 ,几乎可使所有的 SS- N/ X融合蛋白和大部分 SS- N/ S融合蛋白及 32 C硫氧还原蛋白变成水溶性的。 32 C硫氧还原蛋白包涵体在尿素中的溶解度明显高于 SS- N/ S包涵体 ,2 mol/ L尿素可使近一半的 32 C硫氧还原蛋白包涵体溶解 ,而 SS- N/ S包涵体只有 2 7.5 %溶解 ;但在 5 mol/ L 尿素时 ,两者均可基本全部变为可溶性的。在 SS融合蛋白包涵体溶解时加入还原剂二硫苏糖醇 ,可明显降低 SS的抗原性。 SS融合蛋白
- 刘永庆陈溥言杜念兴赵国屏
- 关键词：生长抑素SS基因工程疫苗抗原性
- 生长抑素基因工程疫苗促进动物生长研究的介绍被引量：1
- 1999年
- 杜念兴刘永庆
- 关键词：生长抑素基因工程疫苗动物
- 家禽氟中毒被引量：10
- 1997年
- 家禽氟中毒刘永庆（南京农业大学动物医学院２１００９５）郭继英（山东省农业科学院家禽所２５００２３）随着集约化养殖业和饲料工业的发展，人们在追求高效益的过程中为降低成本，提高饲料效率，不断地进行饲料配方的优化。配合饲料中添加骨粉和磷酸钙盐（磷酸氢钙和磷...
- 刘永庆郭继英
- 关键词：家禽氟中毒中毒
- 热应激对肉鸡免疫器官形态学影响的研究被引量：21
- 1998年
- 热应激对肉鸡免疫器官形态学影响的研究张乐萃刘世华王述柏（莱阳农学院，山东２６５２００）侯世忠（胜利油田农业公司肉鸡场，山东２５７１０２）刘永庆（山东省农科院家禽所，济南２５０１００）在我国大部分地区夏季出现持续性高温、高湿天气，在温度超过３０℃时，鸡...
- 张乐萃刘世华王述柏侯世忠刘永庆
- 关键词：鸡病热应激免疫器官形态学
