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刘大庆: 作品数：46 被引量：97H指数：6; 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划陕西省社会发展科技攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法: 本发明公开了一种体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法。该方法将单个核细胞培养于细胞培养袋中，并置于跷跷板式生物反应器上进行培养，其中，所述跷跷板式生物反应器的振荡角度为2-13°，转速为3-40rpm。采用该三维细胞培...; 裴雪涛陈琳谢小燕刘大庆岳文吕洋李思霆王思涵姚海雷贾雅丽; 文献传递

细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗肿瘤研究进展被引量：3: 2012年; 近年来,全球恶性肿瘤患者人数逐渐上升,新发病例数从2002年的1090万上升到2008年的1270万,因肿瘤导致死亡人数从670万上升到760万,成为人类死亡的首位原因[1]。手术、放疗和化疗的单一或联合应用对早发现恶性肿瘤的治疗能取得较好的疗效,但肿瘤复发、转移及肿瘤晚期患者由于体质差或治疗不敏感等原因导致上述疗法无法实施或疗效不佳。因此，寻找能有效抑制肿瘤生长和转移且副作用小的治疗方法成为临床肿瘤治疗的迫切需要。; 吉海杰王黎明李会刘大庆史高娜李娜裴雪涛吴明远; 关键词：细胞免疫治疗细胞因子诱导杀伤抑制肿瘤生长疗效不佳

胰蛋白酶差速脱壁法分离纯化人表皮干细胞被引量：2: 2008年; 背景:表皮干细胞对于修复皮肤缺损具有重要意义,但如何方便、快捷地对所获取的表皮干细胞进行纯化培养一直没有比较好的技术方法。目的:拟应用胰蛋白酶差速脱壁法去除表皮干细胞中混杂的成纤维细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-06/2007-06在解放军军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室完成。材料:实验所用皮肤来源于20～30岁女性乳房缩小整形术患者,由北京协和医院整形外科提供。方法:无菌条件下切取皮肤,剪除皮下脂肪组织,采用胶原酶/Dispase酶和胰蛋白酶两步法体外分离培养表皮干细胞。待细胞生长达70%～80%融合时,加入胰蛋白酶消化尚未脱壁的细胞,30s～1min后吸出脱壁细胞,同法传代培养至第5代细胞。主要观察指标:第1,5代表皮干细胞表面标志CD29、CD49f、CD71的表达。流式细胞仪检测第5代细胞生长周期。免疫荧光检测第5代表皮干细胞和传代时胰蛋白酶消化30s～1min即脱壁细胞角蛋白19及波形蛋白的表达。透射电镜观察表皮干细胞超微结构。结果:第1代表皮干细胞CD29阳性率94.32%,CD49f阳性率86.24%,CD71呈弱阳性,经过4次胰蛋白酶差速脱壁去除混杂细胞后,第5代表皮干细胞CD29阳性率96.77%,CD49f阳性率96.31,CD71呈弱阳性,82.58%表皮干细胞处于G0～G1期。第5代表皮干细胞角蛋白19呈阳性,波形蛋白呈阴性,而传代时胰蛋白酶消化脱壁的细胞角蛋白19呈阴性,波形蛋白呈阳性,证实为成纤维细胞。表皮干细胞呈克隆样生长,透射电镜下胞质中可见呈束状排列的角蛋白丝。结论:应用胰蛋白酶差速脱壁法能够简单、有效地获取纯化的表皮干细胞。; 闫迎军刘大庆何丽娟管利东施双双乔群裴雪涛; 关键词：表皮干细胞纯化胰蛋白酶

基于树突状细胞的肿瘤疫苗研究进展: 2013年; 1973年，Steinman和Cohn在小鼠脾脏发现具有树枝状突起的独特形态细胞，并将之命名为树突状细胞（dendritic cell，DC）。DC作为连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁，是机体识别和摄取病原体和肿瘤抗原的关键细胞，具有抗原提呈能力强和激活初始型T细胞的特点。; 吉海杰王黎明刘洋史高娜李会刘大庆李娜刘丽敏裴雪涛吴明远; 关键词：树突状细胞肿瘤疫苗抗原提呈能力获得性免疫先天性免疫小鼠脾脏

黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化皮肤被引量：4: 2011年; 目的探讨构建含有黑色素细胞组织工程化皮肤的方法。方法从人包皮组织中获取黑色素细胞,从人骨髓中获取骨髓间充质干细胞(BMSCs),以二者为种子细胞,按照1∶10的比例混和培养,并与I型胶原膜复合体外构建组织工程化皮肤,对裸鼠创面进行修复。通过大体标本观察、4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)体内示踪标记、HE染色、免疫组织化学检测及透射电镜观察等方法,观察组织工程化皮肤修复裸鼠皮肤创面缺损及黑色素细胞的分布情况。结果裸鼠创面皮肤生长良好,DAPI体内示踪标记、免疫组织化学检测S-100蛋白及透射电镜观察可以发现黑色素细胞以正常的组织结构形式分布于创面皮肤。结论黑色素细胞与BMSCs通过适当的比例及体外条件培养,与I型胶原膜复合可以在体外构建出具有黑色素细胞的组织工程化皮肤。; 宋可新乔群刘大庆王晓军赵茹刘志飞裴雪涛; 关键词：黑色素细胞骨髓间充质干细胞胶原膜组织工程化皮肤

红系祖细胞冻存液及其应用: 本发明公开了红系祖细胞冻存液及其应用，其中，该红系祖细胞冻存液包含：DMSO；HSA；以及血浆。该冻存液能够有效保存红系祖细胞，并且保存时间长，细胞复苏后增殖能力强，细胞回收率高。; 陈琳裴雪涛习佳飞谢小燕周军年李艳华岳文房芳南雪刘大庆; 文献传递

胎儿骨髓间充质干细胞中SSEA-4阳性表达细胞的分离和检测被引量：7: 2006年; 为了验证成体干细胞中全能性干细胞存在的可能性,以SSEA-4抗原为筛选标志,利用免疫磁珠筛选技术从胎儿来源的骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,fMSCs)中筛选并培养得到SSEA-4表达阳性的fMSC-SSEA-4细胞,从形态学、生长曲线、表面标志及细胞周期、核型分析等方面检测其生物学性状,并通过Oct-4及SSEA-4抗体的表达及致瘤性等方面分析其全能性状．同时观察了fMSC-SSEA-4细胞的诱导分化能力．结果发现,fMSC-SSEA-4细胞的形态学表现、细胞周期和生长曲线检测与fMSCs无明显差异;fMSC-SSEA-4细胞Oct-4和SSEA-4抗体表达阳性,并且表现为正常的二倍体核型,无明显的致瘤性状．在不同的诱导条件下,fMSC-SSEA-4细胞可向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化．实验结果提示,fMSCs中存在有全能干细胞性状的一群细胞,从而为进一步深入研究和更好地应用fMSCs提供了理论依据．; 刘大庆杨印祥高艳红袁红丰秦立蓬王韫芳南雪施双双岳文裴雪涛; 关键词：胎儿骨髓间充质干细胞全能性生物学性状

骨髓间充质干细胞亲和肽MMP底物肽复合物的构建及其作为小分子药物载体的初步研究: 2009年; 为了探讨骨髓间充质干细胞亲和肽与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)底物肽复合后作为小分子药物载体的可行性,采用噬菌体肽库技术,用分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,MSCs)筛选噬菌体环七肽库,获得MSCs高亲和性多肽.合成FITC(FITC-CSTNPKVLC,FITC-P1)和生物素(Biotin-CSTNPKVLC,Bio-P1)标记的亲和肽,流式细胞术和ELISA方法检测其与MSCs的亲和性;将DAPI标记的MSC-Bio-P1复合物植入裸鼠肿瘤组织周围,检测复合物在体内的稳定性.将亲和肽与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)特异性底物肽(GPLGIAGQ)连接,合成FITC标记的亲和肽-底物肽复合物(FITC-Ahx-CSTNPKVLCGPLGIAGQ,FITC-P1-P2),通过流式细胞术检测其对MSCs的亲和性,毛细管电泳方法检测MMP对FITC-P1-P2的酶切效果.结果表明,通过噬菌体肽库筛选获得的MSCs亲和肽,在体内外对MSCs均具有良好的亲和性和稳定性;亲和肽与底物肽的复合物(FITC-P1-P2)对MSCs仍有较好的亲和性,并且能够被MMPs酶切.以上研究表明,MSCs亲和肽-MMP底物肽复合物(CSTNPKVLCGP-LGIAGQ,P1-P2)可以作为MSCs与小分子药物相连的连接子,从而对MSCs作为小分子药物(如化学药物)载体的可行性提供了实验依据.; 赵敬湘杨立平刘大庆岳文裴雪涛; 关键词：骨髓间充质干细胞噬菌体肽库

Oct-4基因过表达对胎儿骨髓间充质干细胞性状的影响: ＜正＞目的：通过逆转录病毒感染的方法将 Oct-4 基因稳定转染入胎儿骨髓间充质干细胞系（fM- SCs）中,观察 Oct-4基因过表达对胎儿骨髓间充质干细胞（fetal mesenchymal stem cells,f...; 刘大庆杨印祥袁红丰高艳红南雪施双双岳文裴雪涛; 关键词：胎儿骨髓间充质干细胞逆转录病毒载体基因转染诱导分化; 文献传递

生物支架材料胶原膜交联前后的特性分析被引量：15: 2008年; 目的比较胶原膜交联前后的生物特性,为胶原膜的应用奠定基础。方法取市售新鲜牛尾,分离肌腱,制备胶原蛋白,以紫外分光光度计测定胶原蛋白含量;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)波长扫描,氨基酸含量检测分析胶原蛋白特性。将制备的胶原蛋白,真空冷冻干燥,制备胶原膜,采用戊二醛交联。大体观察及扫描电镜观察交联前后胶原膜形态,并测定胶原酶溶解时间、pH值、吸水性能及抗撕强度。取自愿捐赠的骨髓制备BMSCs,按2×103/100μL浓度接种于交联前后胶原膜上培养7d,测量细胞吸光度(A)值及扫描电镜观察。结果制备的胶原蛋白含量约为2mg/mL,最大吸收波长约为230nm。胶原蛋白氨基酸分析显示,甘氨酸含量约为21.47%,脯氨酸12.04%,羟脯氨酸10.18%,未检出色氨酸。交联前胶原膜为白色海绵状,孔径较大且不均匀,pH值为4.5～5.0;扫描电镜观察为孔网状结构,孔径大;吸水力为其重量的61倍,抗撕强度为210g/cm3,胶原酶溶解时间为30min。交联后胶原膜变薄,无色,半透明,致密,柔韧性好;镜下可见致密排列的胶原纤维成网状;pH值为6.5～7.0,吸水力降低,抗撕强度约为3400g/cm3,胶原酶溶解时间为90min。细胞增殖实验表明,细胞在交联前后的胶原膜上均能良好生长,A值差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜见BMSCs在交联后的胶原膜上生长良好。结论从牛肌腱中成功提取胶原蛋白,并制备胶原蛋白膜。经化学交联剂交联后,胶原膜仍具有良好的生物学特性,且理化性质优于交联前,可作为生物支架材料,用于皮肤创伤修复等研究领域。; 陈琳吕洋管利东王韫芳何丽娟李艳华白慈贤刘大庆裴雪涛; 关键词：胶原胶原膜交联 BMSCS

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