刘兰琦
- 作品数：10 被引量：30H指数：4
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家教育部“211”工程河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内折香茶菜素D的抗致畸致突变作用被引量：2
- 2003年
- 李继成杨丽嘉刘兰琦苏金玲宋健伟常爱武叶启霞
- 关键词：黄酮苷动物实验
- 雷帕霉素靶蛋白信号通路在食管癌细胞系中激活状态的研究被引量：5
- 2007年
- [目的]研究雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号传导通路在食管鳞癌细胞系EC9706和Eca109中的激活状态。[方法]采用细胞免疫组化检测mTOR及其下游靶分子(p70S6K)在两细胞系中的表达,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA水平及蛋白水平测定此通路的活性。[结果]mTOR在两种细胞系中均有表达,且在EC9706中的表达水平明显高于Eca109,mTOR下游靶点(p706S6K)的磷酸化水平也是EC9706明显高。[结论]mTOR信号通路在两种细胞系中都是特异性激活。激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度越低,通路的激活水平越高。
- 侯桂琴鲁照明穆欣刘洪涛刘兰琦许培荣薛乐勋王建人
- 关键词：食管肿瘤雷帕霉素靶蛋白细胞株
- PTEN表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706
- 2007年
- 目的筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706。方法提取胎盘总RNA,设计引物,PCR扩增人野生型PTEN基因,经测序鉴定后,连接于pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1-PTEN,用脂质体介导的方法将其转染EC9706。而后加抗生素G418筛选稳定表达株,用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平,通过绘制生长曲线观察细胞生长情况。结果PCR产物的电泳结果显示,在1500bp左右有一明显亮带,测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致;稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示,PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高;生长曲线结果显示,转染后的细胞生长速度明显减慢。结论所扩基因为野生型PTEN基因,所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体,并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株。
- 侯桂琴鲁照明薛乐勋田芳范天黎刘兰琦许培荣
- 关键词：PTEN食管鳞癌MTOR转染
- Tet-on调控TAp63γ基因表达EC9706细胞系的建立及对细胞增殖的影响
- 2007年
- 目的:利用Tet-on基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础。方法:将调控质粒pTet-on转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆。最后用不同浓度Dox诱导,Westernblot法确定Dox的最佳诱导浓度。采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率。结果:Dox浓度为3mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P<0.05或0.01)。结论:成功构建了Tet-on调控TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台。TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制。
- 范天黎侯桂琴许培荣袁保梅杨静刘兰琦杨观瑞
- 关键词：基因表达系统食管癌EC9706细胞
- 杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白。方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中。酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果。结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白。Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%。结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白。
- 冯英才王天云王鹏举刘红涛刘兰琦薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻核基质附着区原核表达
- 雷帕霉素对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR/p70S6K信号通路的影响被引量：7
- 2007年
- 目的:观察雷帕霉素(rapamycin,rapa)对食管鳞癌细胞系EC9706的m TOR/p70S6K信号通路的影响。方法:采用免疫细胞化学证实mTOR/p70S6K信号通路的存在,然后通过DNA Ladder、RT-PCR、Western blot及流式细胞术分别从DNA、RNA、蛋白及细胞水平研究rapa对细胞凋亡和信号通路的影响。结果:免疫细胞化学结果显示,在细胞核及细胞质中mTOR均呈阳性;rapa处理后有明显DNA Ladder产生,且mTOR的mRNA水平及蛋白水平下调。但是,mTOR下游的直接靶点p70S6K的mRNA水平及蛋白水平则升高,二者的变化程度均与rapa剂量的相关;流式细胞术检测结果表明,rapa可使细胞停滞于G_1期。结论:食管鳞癌细胞系EC9706中存在mTOR/p70S6K信号通路并且处于激活状态,rapa能明显促进细胞凋亡并抑制该通路激活,从而间接抑制翻译的进行。
- 侯桂琴刘明月薛乐勋鲁照明范天黎高媛许培荣刘兰琦
- 关键词：食管肿瘤肿瘤鳞状细胞雷帕霉素
- EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察被引量：11
- 2007年
- 目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性。结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P<0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高。
- 侯桂琴范天黎鲁照明刘兰琦许培荣薛乐勋王建人
- 关键词：食管癌雷帕霉素靶蛋白EC9706细胞ECA109细胞
- 内折香茶菜化学成分和抗肿瘤作用的实验研究
- 李继成张启堂叶启霞魏育今杨丽嘉雷巧丽刘兰琦林继臻
- 该课题为香茶菜属植物成分化学研究。改进了以往的工艺流程，经过改进的工艺流程速度快、成本低、效果好、分得的有效成分高适合于大量生产；从该属植物中首次发现具有抗癌作用的黄酮苷类化合物，含量高；从植物中不仅分得了两种国内、外见...
- 关键词：
- 关键词：抗肿瘤
- 食管鳞状细胞癌中Wnt2、β-catenin、c-myc和cyclinD1的表达及临床意义被引量：5
- 2009年
- 目的研究Wnt2、β-catenin及其下游的靶基因c-myc、cyclin D1在食管鳞癌中的表达情况,以期探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用及意义。方法用免疫组织化学SP法检测40例食管鳞癌患者石蜡包埋的癌组织、癌旁组织及正常组织中Wnt2、β-catenin、c-myc、cyclin D1表达情况,分析Wnt2、β-cate-nin和c-myc、cyclin D1表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果Wnt2、β-catenin和c-myc、cyclin D1在食管癌组织、癌旁组织及食管正常组织中表达阳性率逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.01),β-catenin和c-myc与肿瘤浸润和有无淋巴结转移相关(P<0.05)。结论Wnt2/β-catenin/Tcf4通路在食管鳞状细胞癌发生发展中起重要作用,该通路有可能成为基因治疗的潜在靶点。
- 王伟刘红涛柴玉荣许培荣王鹏举刘兰琦薛乐勋
- 关键词：Β-CATENIN免疫组织化学
- 转基因盐藻生物反应器的建立
- 薛乐勋李杰侯卫红潘卫东许培荣张贵星吕玉民谢华王天云柴玉荣姜国忠郑合明王建民侯桂琴刘兰琦
- 1、任务来源： 河南省重大科技攻关项目：转基因盐藻生物反应器（编号：0122032500），起止年月： 2001.01～2004.12。 2、应用领域和技术原理： 转基因生物反应器是将外源基因转入特定的宿主细胞内，...
- 关键词：
- 关键词：生物反应器
