何苹萍 作品数:17 被引量:27 H指数:3 供职机构: 广西大学 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 广西壮族自治区科学研究与技术开发计划 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
猪圆环病毒2型广西流行株序列比较分析 被引量:1 2009年 参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列,设计引物,通过反向PCR技术,从广西部分市区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增9株PCV-2流行株的全基因,并进行了序列测定分析。结果表明,9个PCV-2分离株基因组全长为1767bp或1768bp。同源性比较发现,9个分离株之间的核苷酸同源性为94.6%~99.9%,与GenBank上已发表的国外分离株比较,同源性为94.4%~100%;9个分离株ORF2之间的核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为93.7%~99.4%和93.6%~99.1%;系统发育树显示,其中7个分离株与法国株、新西兰株关系较近,与美国株和加拿大株关系较远;另外2个分离株与澳大利亚株、美国株亲缘关系较近。 张宁 谢丽华 何苹萍 秦毅斌 陈云霞 兰家暖 廖承球 黄伟坚关键词:猪圆环病毒2型 基因克隆 猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立 被引量:1 2008年 根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成3对引物,通过PCR扩增PCV2的3个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到pET-32a载体中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,表达并纯化了重组蛋白。Western-blot分析表明,重组蛋白可以与PCV2阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白初步建立了间接酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,经方阵滴定确定最佳包被浓度为0.24μg/mL,血清最佳的稀释度为1∶40。 屈素洁 何苹萍 秦毅斌 朱芸 陈琼 黄伟坚关键词:原核表达 间接ELISA方法 猪细小病毒自然弱毒N株VP2基因的克隆及原核表达 被引量:1 2011年 为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,PPV-N株VP2基因在BL21(DE3)plysS菌中成功进行融合表达,表达出约85.4 KDa的VP2融合蛋白,且表达的VP2融合蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应。PPV-N株VP2基因的成功克隆及原核表达为今后研究PPV-N株的自然弱毒的分子生物学机理和研制PPV诊断抗原奠定了基础。 李斌 苏乾莲 赵武 梁家幸 梁保忠 何颖 秦毅斌 何苹萍关键词:VP2基因 原核表达 广西猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及基因分型分析 PCV是一种小的、二十面体对称、无囊膜、共价闭合、单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为17nm,是目前发现的最小的动物病毒。根据PCV的致病性、抗原性及核酸序列,将PCV分为PCV1和PCV2两个血清型,将无致病性的PCV... 何苹萍 秦毅斌 兰家暖 陈云霞 黄伟坚 刘芳 韦英益关键词:猪圆环病毒2型 ORF2基因 基因分型 文献传递 广西猪圆环病毒2型的遗传进化分析 2011年 【目的】了解广西各地当前流行的猪圆环病毒2型(PCV2)基因型差异、出现的时间、致病性及其今后流行趋势。【方法】根据GenBank中已发表的PCV2核苷酸全序列设计1对引物,从广西不同市(县)采集的猪组织样本(脾脏、肺脏、淋巴结、流产胎儿)中成功克隆获得34株PCV2 ORF2基因序列,并对其进行遗传进化分析。【结果】获得的34株PCV2中有9株ORF2基因全长为705bp,1株为696bp,其余的为702bp;经遗传进化分析,发现PCV2可以分为PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、PCV2e5个基因型,在34株PCV2ORF2基因中,有7株属于PCV2d型,1株属于PCV2e型,25株属于PCV2b型,未发现PCV2a和PCV2c型,而新发现的GXHP-2不归属于任何一个基因型。【结论】广西目前流行的PCV2有PCV2b、PCV2d、PCV2e3个基因型,其中以PCV2b为主。 廖承球 何苹萍 郭旋 兰家暖 张民秀 黄福标 卢冰霞 刘磊 刘芳 黄伟坚关键词:猪圆环病毒2型 ORF2基因 基因型 遗传进化分析 猪胞内劳森氏菌PCR检测方法的优化及广西猪增生性肠炎流行情况的初步调查 猪增生性肠炎(PPE),是由胞内劳森氏菌引起的接触性传染病,以来成熟肠细胞发生腺瘤样增生为特征.呈全球性流行,引起顽固性腹泻,严重降低饲料报酬率,时养猪业遣成巨大经济损失.本研究建立并优化了PCR诊断方法,能用于活体检测... 谢丽华 兰家暖 黄伟坚 肖爱欢 张宁 秦毅斌 何苹萍 侯韶毅 李桂宣关键词:胞内劳森氏菌 PCR检测 猪增生性肠炎 猪胞内劳森菌16SrRNA基因的克隆及序列分析 被引量:3 2009年 胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)是猪增生性肠炎的病原,本试验设计3条引物,采用半巢式PCR,从猪的回肠粘膜中扩增出长为1 457 bp的胞内劳森氏菌16SrRNA基因,并进行序列比较分析。结果表明,与不同动物源性(鼠、仓鼠、鹿、马、鸵鸟等)的增生性肠炎胞内菌核苷酸同源性在98.4%-100%之间,与脱硫弧菌同源性达到88.6%,与一般弯曲杆菌和螺旋体同源性较低(71.8%-73.9%)。 谢丽华 张宁 何苹萍 李茂宁 尹业师 韦英益 肖爱欢 黄伟坚关键词:胞内劳森氏菌 猪细小病毒自然弱毒N株非结构蛋白NS1基因原核表达 被引量:5 2010年 为进一步探讨猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)的分子病原学机理,根据GenBank上已发表的PPV全基因组序列(登录号NC_001718)设计1对引物,通过PCR方法扩增获得PPV-N株NS1全长基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进而构建原核表达重组质粒pET32a-NS1,并在BL21(DE3)pLysS中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳显示NS1在大肠杆菌中得到成功表达,重组蛋白大小约为90.0 kDa;Western blotting分析表明,该蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有良好生物学活性。NS1在大肠杆菌中成功表达,且具有免疫原性,可作为PPV临床鉴别诊断抗原。 苏乾莲 李斌 赵武 梁家幸 梁保忠 何颖 秦毅斌 何苹萍关键词:猪细小病毒 NS1 原核表达 广西猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及基因分型分析 PCV是一种小的、二十面体对称、无囊膜、共价闭合、单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为17nm,是目前发现的最小的动物病毒。根据PCV的致病性、抗原性及核酸序列,将PCV分为PCV1和PCV2两个血清型,将无致病性的PCV... 何苹萍 秦毅斌 兰家暖 陈云霞 黄伟坚 刘芳 韦英益文献传递 奥奶净对猪瘟疫苗免疫效果的影响 2011年 近年来,养猪业向着规模化和集约化的方向发展,猪场普遍采用高密度地接种猪瘟疫苗来预防猪瘟。但是,由于疫苗保护率低及免疫抑制等因素,猪瘟疫苗免疫失败时有发生,经常出现猪瘟散发病例甚至群发。研究证实,免疫增强剂可以有效解决畜禽免疫失败的问题,提高动物机体特异性和非特异性免疫。奥奶净(OmniGen-AF誖)是一种新型免疫增强剂,为美国俄勒冈州立大学的科学家Forsberg和Puntenney多年的研究成果。 秦毅斌 何苹萍 黄伟坚 赵武 张宁 文崇利 宁军理关键词:猪瘟疫苗 免疫效果 非特异性免疫 免疫增强剂 免疫失败