龚永强
- 作品数：15 被引量：19H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省教育厅重点项目四川省重点科学建设项目更多>>
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- 不同剂量鸭IFN-α真核表达质粒基因枪免疫对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞和体液免疫调节作用研究
- 为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-sDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的免疫调节作用,本研究将 pcDNA-SDIFN-α以1、3和6μg/只3个剂量用基因枪轰击法分别免疫28日龄鸭, 以 PBS ...
- 程志萍程安春汪铭书陈斌刘闯段坤周雪龚永强陈孝跃
- 关键词：基因枪鸭瘟弱毒疫苗分子佐剂
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟片段基因的克隆、原核表达及抗鸭瘟病毒活性初步研究
- 利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T 载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达。表...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟蛋白基因原核表达、产物纯化和复性关键技术及其抗病毒活性
- 为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体 pET32a连接后转化到 BL21(DE3)获得工程菌 BL21(DE3)/pET32a-DuIFN-α...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：成熟肽基因色谱复性质粒稳定性
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中鸭瘟强毒研究
- 利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达稀释复性
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟肽基因的原核表达、复性及其抗病毒活性研究被引量：4
- 2008年
- 为获得鸭α-干扰素(DuIFN-α)并研究其生物学功能,将DuIFN-α成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)、鸭瘟强毒(DPV)活性进行研究。结果表明:BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α经0.4mmol/L IPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白相对分子质量约37 ku,以包涵体形式存在;重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12 800 U/mg;利用定量PCR检测到15 U/mL的重组DuIFN-α对鸭瘟强毒表现出抑制作用,为重组DuIFN-α的临床应用提供试验数据。
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌钟小容
- 关键词：成熟肽基因原核表达色谱复性抗病毒活性
- 鸭IFN-α成熟片段基因的克隆、原核表达及抗鸭瘟病毒活性初步研究
- 利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达鸭瘟病毒
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中鸭瘟强毒研究
- 利用 PCR 从重组质粒 PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到 PMD18-T 载体,测序鉴定后将其连接到原核表达栽体 pET32a+,转化宿主茵 BL21(DE3),经 IPTG ...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达稀释复性
- 文献传递
- 不同条件对鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳分析结果的影响被引量：1
- 2009年
- 本研究以鸭瘟病毒感染鸭胚成纤维细胞为材料,围绕影响二维电泳因素进行全面探讨,以建立和优化鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型。结果表明,样品经过冷丙酮处理,水化液DTT浓度为30 mmol/L都有利于等电聚焦;采用pH5～8 IPG窄胶条和混合两性载体电解质pH3～10/pH5～8为2/1比pH3～10 IPG宽胶条和单一两性载体电解质pH3～10分离蛋白时,各蛋白点间距较大,分辨率高,更有利于显示低丰度蛋白点;1.5 mg的蛋白上样量偏大,2～DE图像出现拖尾和水平条纹,部分相邻高丰度的蛋白重叠,且还掩盖了低丰度蛋白点。PDQuest7.40软件分析显示:17 cmpH5～8 IPG胶条电泳鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组,银染可获得1 253个蛋白点,而考染却检测到388个蛋白点;重复试验仍获得清晰、稳定的2-DE图像,同一样本不同时期,考染可获得约348、331个蛋白点,蛋白点匹配率达88%,表明了鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,为鸭瘟病毒蛋白组的进一步研究和新蛋白的发现提供了重要的研究方法。
- 贾仁勇程安春汪铭书郭宇飞徐超齐雪峰袁桂萍朱德康丁轲龚永强杨梅陈孝跃
- 关键词：蛋白质组二维电泳鸭瘟病毒成纤维细胞
- 鸭瘟病毒CHv株UL34基因的克隆及分子特性分析被引量：1
- 2010年
- 通过生物信息学分析、斑点杂交实验、克隆和测序证实了本实验室构建鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)CHv株基因文库时新分离的基因(GenBank登录号EF643562)为DPV UL34基因,进一步运用有关分子生物学软件对该基因进行了分子特性分析。结果表明,该基因大小为831bp,编码276个氨基酸的多肽,含有疱疹病毒UL34类似蛋白家族保守区。系统进化树分析显示,其与α疱疹病毒亚科中马立克病毒属的GaHV-2,GaHV-3,MeHV-1,EHV-1和水痘病毒属的CeHV-9,HHV-3的亲缘关系最近,揭示DPV-CHv株应该被划为α疱疹病毒亚科中的单独一类。该编码蛋白在252～274位氨基酸有一个明显的跨膜区,C末端有一微体靶向序列(ARL),但无信号肽;含有4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,3个蛋白激酶C磷酸化位点,5个N-豆蔻酰化位点和1个N-糖基化位点;亚细胞定位主要位于细胞核;密码子偏爱性分析显示其偏爱的密码子第3位碱基多以A和T结尾,属于低表达基因;不同密码子使用频率与酵母、大肠杆菌和人的密码子使用频率比较表明,其与大肠杆菌和酵母较接近,与人差异较大。该分析结果揭示DPV UL34基因为一C端锚定的Ⅱ型膜蛋白基因,体外表达选择大肠杆菌和酵母表达系统较为合适,同时该结果也为进一步开展DPV UL34基因的生物学功能研究具有一定的参考作用。
- 钟小容程安春汪铭书朱德康龚永强贾仁勇罗启慧刘菲陈孝跃
- 关键词：鸭瘟病毒分子特性
- 鸭IFN-α成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中鸭瘟强毒研究
- 利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达细胞培养鸭瘟强毒
- 文献传递
