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VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定被引量：1: 2006年; PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实,VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2。Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L。特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础。; 余榕捷高媛戴云谭毅力曾志宏周天鸿洪岸; 关键词：中国仓鼠卵巢细胞

垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定被引量：3: 2004年; 为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide ,PACAP) ,根据大肠杆菌的密码偏好性 ,设计并人工合成编码 38个氨基酸的PACAP基因 .克隆到表达载体pET 35b(+) ,构建重组质粒pET PACAP ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)pLysS+ .实现纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)与PACAP融合蛋白的表达 ,并在两者之间引入 (凝血 )因子Ⅹa识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ ) .融合蛋白CBD PACAP经纤维素亲和层析纯化后 ,因子Ⅹa酶切释放PACAP .在因子Ⅹa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)明显提高了融合蛋白对因子Ⅹa的敏感性 .HPLC进一步纯化得到纯度大于 95 %PACAP多肽 .所得的PACAP多肽的Western印迹鉴定为阳性 ;激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符 .生物活性分析表明 ,所制备的PACAP具有促进胰腺癌细胞株SW 1; 余榕捷洪岸张玲周天鸿戴云高媛; 关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成

新型重组环状胸腺五肽结构类似物cyclo-（Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-）的研制: 胸腺五肽(thymopoietin pentapcptide，TP-5)是胸腺生成素Ⅱ(Thymopoieti-n Ⅱ)上的活性中心第32位～36位氨基酸序列(-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)，具有胸腺生成素...; 高媛; 文献传递

重组环状胸腺五肽结构类似物Cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-)的制备、鉴定和活性检测被引量：2: 2006年; 为了实现蛋白内含肽(Intein)介导的重组环状胸腺五肽结构类似物[cyclo-(Cys-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-),cTP]的高效制备,设计并合成编码6个氨基酸的cTP基因,克隆到表达载体pTWIN1,重组表达质粒pTW-cTp转化E.coliER2566构建工程菌,IPTG诱导由几丁质结合域纯化标签(chitinbindingdomain,CBD)、2个蛋白内含肽和目的多肽组成的“多元”融合蛋白(CBD-intein1-cTP-intein2-CBD)的高效表达.几丁质柱亲合层析纯化融合蛋白后,改变pH值和温度诱导intein1C端切割,硫醇MESNA诱导intein2N端切割,释放N端为Cys,C端为硫酯的重组cTP线性前体,通过非保护多肽硫酯环合法实现环肽生成.激光飞行质谱结果显示,纯化产物的分子量为764·4,与环肽的理论值相符.免疫活性检测结果显示,环肽cTP较线性多肽TP-5具有更显著的促进巨噬细胞吞噬能力的活性(P<0·01)和促进B细胞抗体生成的活性(P<0·01).; 余榕捷高媛林剑谢秋玲谭毅力洪岸周天鸿

提高Xa因子酶切效率的策略被引量：5: 2004年; 为提高Xa因子对融合蛋白CBD IGF和CBD PACAP的酶切效率 ,以便高效释放非融合的重组多肽 ,利用基因工程技术在两个融合蛋白中Xa因子识别位点 (Ile Glu Gly Arg↓ )前均引入 7个氨基酸组成的富含甘氨酸柔性短肽 (Gly Thr Gly Gly Gly Ser Gly)。纤维素亲和层析纯化各个融合蛋白 ,比较Xa因子对引入短肽前、后融合蛋白的酶切效率。比较结果表明 :短肽的引入不同程度地提高了融合蛋白CBD IGF和CBD PACAP对Xa因子的敏感性 ;但总体上CBD IGF对Xa因子的敏感性比CBD PACAP低。此研究结果提供了一种提高Xa因子酶切效率的策略。; 余榕捷高媛洪岸; 关键词：XA因子短肽融合蛋白 IGF 酶切氨基酸组成

CRMPs与海马神经元生长锥微管和微丝相互作用的研究: 目的：探讨大鼠海马神经元CRMPs与生长锥微管和微丝的相互作用。材料和方法：取孕17d的SPF级SD孕鼠，采用梯度蔗糖离心的方法提取生长锥，透射电镜和扫描电镜观察分离物的形态，免疫荧光和免疫印迹检测GAP-43的表达。采...; 高媛; 关键词：生长锥微管微丝免疫印迹免疫共沉淀; 文献传递

人类胰岛素生长因子Ⅰ基因的合成、表达与纯化: 2005年; 目的 :实现含人类胰岛素生长因子I(hIGF - 1)融合蛋白的高水平可溶性表达和纯化 ,应用factorXa获得非融合的hIGF - 1,并对提高目的融合蛋白对factorXa的敏感性进行探索。方法 :根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成编码 70个氨基酸的hIGF - 1基因 ,克隆到表达载体pET - 35b(+) ,实现hIGF - 1与纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)的融合表达 ,并在两者之间引入factorXa的识别位点 ,同时尝试在factorXa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly -Thr-Gly -Gly-Gly -Ser -Gly) ,比较factorXa酶切效率。纤维素亲和层析纯化融合蛋白CBD -IGF ,经Westernblotting检测后 ,利用MTT法测定其促进NIH3T3细胞增殖的活性。结果 :可溶性融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中高效表达 ;活性测定结果显示所纯化的融合蛋白具有促进 3T3细胞增殖的活性。在factorXa识别位点前引入柔性短肽后提高了融合蛋白对factorXa的敏感性。结论 :实现有活性的融合蛋白CBD -IGF在大肠杆菌中可溶性的高效表达 ,为高效制备hIGF - 1基因工程产品奠定了基础。此外 ,在factorXa识别位点前引入柔性短肽有效提高融合蛋白CBD -IGF对factorXa的敏感性。; 高媛余榕捷洪岸李志英; 关键词：胰岛素样生长因子1 基因基因表达

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高媛