马艳萍
- 作品数：16 被引量：37H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脐血造血干/祖细胞人类端粒酶逆转录酶基因的表达及意义被引量：4
- 2001年
- 目的 探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因在脐血造血干 /祖细胞中的表达及意义。方法 采用核酸原位杂交法对不同培养时间和不同培养条件下脐血CD+34 细胞中hTERT基因的表达进行了测定。结果 新鲜分离的脐血中CD+34 细胞低表达hTERT ,阳性率为 13 %,体外培养 5～ 7dhTERT表达增高 ,以干细胞因子、白细胞介素 3 (IL 3 )、IL 6和Flt 3配体组合条件下增高最显著 ,阳性率为 4 8%,转化生长因子 β1和全反式维甲酸可抑制hTERT表达。结论 hTERT基因在脐血CD+34 细胞中低水平表达 ,在体外扩增体系中 ,优化细胞因子组合能显著上调hTERT基因 ,负调控因子和诱导分化剂则下调hTERT基因。
- 马艳萍邹萍
- 关键词：胎血端粒末端转移酶CD34
- 脐血造血干/祖细胞端粒酶相关蛋白基因hTERT和TEP1的表达及意义被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨造血干 祖细胞端粒酶相关蛋白基因hTERT和TEP1在造血过程中对端粒酶活性的调节作用。方法 用RT PCR和TRAP法分别测定脐血干 祖细胞中hTERT、TEP1mRNA及端粒酶的活性。结果 在新分离的脐血单个核细胞 (MNC)和CD3 4 - 细胞中检测不到端粒酶的活性 ,hTERTmRNA表达阴性 ;CD3 4+细胞中端粒酶活性低 ,hTERTmRNA阳性 ;而TEP1mRNA在MNC、CD3 4- 细胞和CD3 4+细胞中均为阳性 ,表达水平差异无显著性。在不同细胞因子组合条件下 ,CD3 4+细胞体外培养 7d ,细胞端粒酶活性和hTERTmRNA表达增高 ,之后随着细胞的分化成熟 ,二者表达降低 ,在整个培养过程中 ,TEP1mRNA表达无明显变化。结论 在脐血造血干 祖细胞中 ,hTERT基因表达水平与端粒酶活性一致 ,hTERT基因表达水平对端粒酶的活性起关键作用 。
- 马艳萍邹萍肖娟黄士昂
- 关键词：端粒酶HTERT基因
- 血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用被引量：9
- 2003年
- 血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )是肾素 血管紧张素系统的一种主要生物活性物质。为了研究它在造血系统中的影响 ,本实验通过体外细胞培养的方法 ,探讨AngⅡ与不同的细胞因子联合刺激脐血CD34+ 细胞生长和分化的作用。研究结果发现 ,悬浮培养体系中的AngⅡ可同时刺激BFU E和CFU GM的扩增 ,BFU E和CFU GM的数量在一定范围内随AngⅡ浓度 (0 0 1- 0 1μmol/L)的升高而增多 ;在半固体培养基中的AngⅡ则仅刺激CFU GM的形成 ,却不影响BFU E ;悬浮培养体系中AngⅡ与细胞因子SCF +G CSF +GM CSF +IL 3联合可使CFU GM的扩增倍数由 2 3± 0 8升高到 7 8± 1 9倍 ,与SCF +EPO +TPO +IL 3联合 ,BFU E的扩增倍数由 3 1± 1 8提高到 9 2± 2 3倍。结论 :AngⅡ与其他细胞因子联合可刺激脐血造血干 /祖细胞体外扩增。
- 彭程黎纬民马艳萍胡中波程范军刘凌波邹萍
- 关键词：脐血体外扩增
- Caspase-3在脐血CD34^+细胞中的表达及意义(英文)被引量：1
- 2002年
- 为探讨脐血CD34+ 细胞在不同细胞因子支持下体外扩增过程中caspase 3表达及意义 ,采用RT PCR ,Westernblot和流式细胞术对脐血CD34+ 细胞在体外扩增过程中的细胞增殖、细胞凋亡及caspase 3的表达进行了测定。检测结果显示 ,caspase 3mRNA在新鲜分离的脐血CD34+ 细胞中低水平表达 ,在细胞因子支持下体外培养3天 ,扩增的CD34+ 细胞中caspase 3mRNA和蛋白质水平表达上调 ,但在这两种细胞中仅能检测到分子量为 32kD的非活性酶原形式的caspase 3 ,随着体外培养时间的延长 ,在无早期效应细胞因子SCF或FL存在的条件下 ,caspase 3被激活 ,可检测到分子量为 2 0kD的裂解片段 ,细胞凋亡率增加。结论 :虽然造血干 /祖细胞的凋亡是个复杂的过程 ,但在脐血CD34+ 干 /祖细胞体外扩增过程中 ,caspase 3参与了细胞凋亡事件并发挥着重要的作用 ,早期效应细胞因子SCF和FL可减少造血干 /祖细胞的凋亡 ,对造血干
- 马艳萍邹萍肖娟黄士昂
- 关键词：CD34^+细胞脐血蛋白质表达
- Flt3和c-kit在脐血CD34^+干/祖细胞中功能性表达及意义被引量：1
- 2002年
- 为了解作用于早期造血的细胞因子受体Flt3和c-kit在脐血CD34^+造血干/祖细胞中的表达及功能,从蛋白和基因水平对其进行了研究。采用常规双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞术测定新鲜分离的和体外不同培养时间的脐血CD34^+造血干/祖细胞中Flt3和c-kit蛋白水平的表达,用RT-PCR法测定Flt3和c-kit的mRNA水平表达,并在体外对受体功能进行了探讨。研究结果显示,新鲜脐血CD34^+细胞中(68.8±15.4)％为Flt3^+,(50.6±12.7)％为c-kit^+,随着体外培养时间的延长,二者表达逐渐下降。结论:脐血CD34^+造血干/祖细胞在体外液体培养条件下Flt3和c-kit阳性表达可维持2-3周,其配体FL和SCF在培养的第1周内对细胞扩增效果最显著。
- 马艳萍邹萍肖娟黄世昂
- 关键词：CD34^+细胞FLT3C-KIT细胞分子
- 造血干细胞基因治疗的研究进展被引量：1
- 2001年
- 马艳萍邹萍
- 关键词：造血干细胞逆转录病毒载体基因治疗
- 中晚孕期与足月胎儿脐血干/祖细胞功能特性研究被引量：6
- 2002年
- 目的 对比研究中、晚孕期和足月胎儿脐血造血干 /祖细胞的表型及功能特性 ,为造血干细胞宫内移植和基因治疗先天性疾病提供新的思路。方法 采用免疫磁珠分离法、流式细胞术、液体培养、半固体甲基纤维素培养等对中、晚妊期及足月胎儿脐血造血干 /祖细胞比例、对细胞因子的反应性、体外增殖及自我更新能力进行了测定。结果 未足月脐血中CD34+ 、CD34+ CD38- 细胞及CD34+ 细胞中CD34+ HLL DR+ 、CD34+ CD38- 细胞比例较足月脐血高 (平均 3 1 4 %、0 76 %比 0 78%、0 1 8%及 9 8%、2 0 4%比 3 9%、1 4 6 % ) ,产生的集落形成单位量 (CFU)较足月脐血高 ,且与CD34+ 细胞比例成正相关 (r =0 83) ,长期培养启动细胞 (LTC IC)约是足月脐血的 3倍 (5 7± 1 2 / 1 0 5细胞比1 7± 0 8/ 1 0 5细胞 ,P <0 0 5)。在短期液体培养体系中 ,不同胎龄脐血干 /祖细胞具有相似的扩增潜能 ,体外细胞因子支持下培养 7天 ,CFU C、细胞总数、CD34+ 细胞数、CD34+ CD38- 细胞数达高峰 ,之后逐渐下降 ,其中以SCF +FL +TPO +IL 3 +IL 6组合条件下效果最显著。结论 未足月胎儿 (尤其是中妊期 )脐血与足月胎儿脐血相比 ,含有较高的造血干 /祖细胞 ,有较强的集落形成能力 ,对细胞生长因子刺激敏感 。
- 马艳萍邹萍肖娟黄士昂
- 关键词：胎儿胎儿祖细胞靶细胞
- mFasL基因转移诱导异基因骨髓移植受者获得免疫赦免的实验研究
- 2003年
- 目的 :通过导入外源FasL cDNA ,诱导异基因骨髓移植物中针对受者MHC的淋巴细胞凋亡 ,从而防止移植物抗宿主病 (GVHD)的发生。方法 :pBillneo mFasL质粒经酶切鉴定后 ,采用脂质体转移法导入Balb c鼠骨髓单个核细胞 (BMNC) ,体外与BAC鼠骨髓移植物混合培养后 ,输注给经致死量照射的Balb c小鼠 ,通过观察受者存活率、GVHD的表现、肠、肝、皮肤病理组织学检查 ,以观察受者鼠GVHD的发生情况 ,同时观察受者鼠的脾结节以了解其造血功能重建。受者鼠骨髓细胞Y染色体分析 ,以查明供者来源的造血干细胞是否植入。结果 :pBillneo mFasL内mFasL cDNA酶切鉴定提示可以按顺序合成出功能蛋白质 ,采用脂质体法传导入BMNC后 ,Westen Blot显示出抗FasL抗体识别的条带。转基因BMNC与BAC鼠脾单个核细胞 (SMNC)混合培养后 ,经流式细胞仪检测 ,SMNC凋亡率明显高于对照组 [(14 .76 %± 0 .36 ) %vs(1.8± 0 .4 2 ) % ,t=3.0 1,P <0 .0 0 1]。骨髓移植 (BMT)后 ,受者GVHD的发生率实验组明显低于对照组 (4 0 %vs10 0 % ,χ2 =6 .0 0P <0 .0 5 )。Y染色体分析 ,提示有供者来源的造血干细胞植入并增殖活化。移植 10d后受者即有脾结节形成 ,2 0d达正常水平。结论 :采用脂质体转移法 ,能将mFasL cDNA转入鼠BMNC并能有效地表达 。
- 江端黄星原徐之良刘凌波邹萍李爱香马艳萍
- 关键词：基因转移异基因骨髓移植免疫赦免
- 脐血造血干/祖细胞表面CD95/Fas抗原和Bcl-2的表达和功能研究被引量：1
- 2002年
- 对人脐血干 /祖细胞表面CD95 /Fas抗原及Bcl 2的表达和功能特征进行了研究。新鲜分离的脐血CD34+细胞表达低水平CD95 ,体外培养中联合应用细胞因子如SCF和FL可上调CD95表达 ,负调控因子例如肿瘤坏死因子 α(TNF α)和干扰素 γ(IFN γ)可进一步增加其表达量。将CD34+ 细胞与抗 CD95单克隆抗体共同孵育 ,通过活细胞记数、流式细胞术、集落形成细胞 (CFU C)及长期培养启动细胞 (LTC IC)的分析 ,研究了CD95介导的功能特性。抗 CD95单抗与TNF α或IFN γ组合条件下 ,活细胞记数和CFU C计数分别为 31.9± 11.2和 4 3± 2 .0 ,LTC IC生成受到抑制 ,细胞凋亡率为 4 2 .9± 12 .4。而抗 CD95单抗在无细胞因子存在条件下或抗 CD95单抗与早期效应细胞因子SCF和FL组合条件下诱导的凋亡率很低。细胞浆内增加的Bcl 2水平和脐血CD34+ 细胞表面CD95的关系表明Bcl 2可能对CD95介导的CD34+ 细胞的凋亡起保护作用。
- 马艳萍邹萍肖娟
- 关键词：BCL-2脐血CD34^+细胞
- Fas/FasL途径在造血干细胞移植免疫中的实验研究被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨转染FasL的CD34+ 细胞对同种抗原特异性T细胞和白血病细胞凋亡的影响。方法 丝裂霉素C预处理表达外源FasL的骨髓CD34+ 细胞 ,分别与经过富集的T细胞 (刺激细胞 /效应细胞比例为 5∶1)和白血病细胞U937混合培养 ,借助原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞仪 (FCM )检测T细胞和白血病细胞的凋亡率。结果 分别以未转染和转染外源FasL的CD34+ 细胞为刺激细胞 ,5d后 ,T细胞凋亡率分别为 :3.2 %± 1.1%、12 .1%± 1.5 % (P <0 .0 1) ,经IL 2作用后 ,凋亡率上升至 17.6 %± 1.3% (P <0 .0 1) ;与白血病细胞U937混合培养 18h后 ,白血病细胞凋亡率分别为 :5 .0 %± 1.3%、10 .8%± 0 .6 % (P <0 .0 1) ,加入阿糖胞苷后 ,凋亡率上升至 17.9%±1.3% (P <0 .0 1)。结论 转染外源FasL的骨髓CD34+ 细胞 ,可诱导同种抗原特异性T细胞和白血病细胞凋亡。提示通过Fas/FasL途径可选择性清除移植物中同种抗原特异性T细胞 ,有望为造血干细胞移植中防治移植物抗宿主病 (GVHD) ,保留移植物抗白血病效应 (GVL)提供新的策略。
- 肖娟邹萍刘忠文马艳萍胡中波刘凌波
- 关键词：造血干细胞移植FAS配体移植物抗宿主病
