靳丽妍
- 作品数:20 被引量:55H指数:4
- 供职机构:首都医科大学附属北京安贞医院更多>>
- 发文基金:北京市教育委员会科技发展计划面上项目北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 靶向小鼠核因子κB P65逆转录病毒的构建与鉴定
- 靳丽妍朱光发
- 己酮可可碱对脓毒症致急性肺损伤核因子-κB和明胶酶的干预作用
- 2012年
- 目的研究己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对急性肺损伤(acutelunginjury,Au)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)、明胶酶(gelatinase,MMP-2,MMP-9)的干预作用。方法将112只小鼠随机分为盐水对照组(NS组)、己酮可可碱对照组(PTX组)、手术组(CLP组)和己酮可可碱干预组(C+P组)。采用盲肠结扎穿孔(cecalligationandpuncture,CLP)法复制脓毒症ALI模型,C+P组在手术基础上尾静脉注射己酮可可碱40mg/kg干预。各组小鼠在对应时间段处死,观察肺病理改变;免疫组化染色检测肺NF-κB染色强度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺NF-κB、MMP-2、MMP-9的mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中MMP-2、MMP-9的蛋白含量。结果盲肠结扎穿孑L能够引起Au。CLP组ALI病理表现明显,C+P组较CLP组明显减轻。C+P组肺组织NF-κB的染色强度、面积低于CLP组(P〈0.05或P〈0.01)。CLP组肺组织NF-κB、MMP-2、MMP-9的mRNA表达以及BALF中的MMP-2、MMP-9蛋白含量均高于C+P组(P〈0.05)。结论急性肺损伤时,PTX能够抑制NF-κB活化及MMP-2、MMP-9蛋白的过量表达。抑制炎症反应,减轻肺损伤。
- 闫树凤朱光发张向峰靳丽妍吴春婷
- 关键词:己酮可可碱明胶酶
- 针对核因子-κB小干扰RNA防治脓毒症急性肺损伤的实验研究被引量:1
- 2012年
- 目的:探讨针对核因子-κB(NF-κB)P65的小干扰RNA(siRNA)在脓毒症急性肺损伤防治中的保护作用。方法:将体质量18 g~20 g,雄性,昆明小鼠70只,随机分为健康组、脓毒症组、特异干扰组及乱序对照组,后3组均设置术后6 h、12 h 2个亚组(每组10只)。术前1 h特异干扰组尾静脉注射NF-κB P65 siRNA反转录病毒,乱序对照组注射scrambled siRNA反转录病毒,健康组及脓毒症组注射等量0.9%氯化钠液;分别对脓毒症组、特异干扰组及乱序对照组小鼠行盲肠结扎穿孔(CLP)手术构建急性肺损伤模型;术后6 h、12 h留取肺组织标本,观察肺病理改变;湿干质量比值(W/D);肺NF-κB染色强度;NF-κB mRNA、基质金属蛋白酶-9 mRNA(MMP-9 mRNA)及蛋白的活性水平。结果:采用CLP法成功构建小鼠急性肺损伤模型。与脓毒症组和乱序对照组比较,特异干扰组术后6 h、12 h肺组织较同时段脓毒症及乱序对照组肺组织病理损害及W/D值,NF-κB P65 mRNA,MMP-9 mRNA及蛋白活性减低,其中在6 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对NF-κB P65的siRNA抑制NF-κB的表达后,能够抑制脓毒症所致的早期的过度炎症反应,减轻急性肺损伤。
- 李丛锋朱光发王君靳丽妍闫树凤吴春婷
- 关键词:小干扰RNA核因子-ΚB基质金属蛋白酶-9急性肺损伤
- 靶向小鼠核因子κB P65逆转录病毒的构建与鉴定
- 靳丽妍朱光发
- 靶向小鼠NF-kB P65进行RNA干扰对减轻哮喘时炎症因子作用的研究
- 靳丽妍朱光发吴春婷闫树凤
- 靶向小鼠核因子κB P65的小干扰RNA逆转录病毒载体的构建与鉴定被引量:6
- 2011年
- 目的构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体,鉴定其生物学效应。方法采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体,转染293E细胞,包装成逆转录病毒,以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1,用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达,并用RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制,2 h即明显低于Scramble病毒组(0.91±0.03比1.02±0.02,P<0.01),此后持续降低;在LPS刺激后的24、36、48和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组(0.97±0.02比1.01±0.01,0.94±0.01比1.02±0.01,0.94±0.02比1.02±0.01,0.93±0.01比1.00±0.02,P<0.05)。LPS刺激后2、6、12和24 h,siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(P<0.01),而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组(P<0.01)。结论将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后,可以减少其下游炎症因子的释放,提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。
- 靳丽妍朱光发吴春婷闫树凤
- 关键词:急性肺损伤核因子ΚBRNA干扰逆转录病毒载体
- 靶向小鼠NF-kB P65进行RNA干扰对减轻哮喘时炎症因子作用的研究
- 目的本研究采用RNA干扰(RNAi)技术抑制核因子8κB(NF-κB)P65基因的表达,动态观察其对小鼠单核巨噬细胞株(J774A.1)NF-κB p65及各种主要炎症因子(如肿瘤坏死因子-a(TNF-a)和白介素-1b...
- 靳丽妍朱光发吴春婷闫树凤
- 文献传递
- 中性粒细胞活化和上皮细胞凋亡在急性肺损伤发生中的作用被引量:6
- 2010年
- 致病因子一方面诱导肺泡巨噬细胞和上皮细胞产生多种细胞因子和趋化因子,激活中性粒细胞并使其向损伤部位聚集,从而产生炎症因子的瀑布式反应 另一方面激活死亡受体通路Fas-FasL等诱发肺上二皮细胞凋亡,从而引起肺组织损伤.另外,Fas活化后可通过介导肺内炎症介质释放和中性粒细胞聚集进一步加重肺损伤.中性粒细胞活化和上皮细胞凋亡在急性肺损伤的发生过程中起重要作用.
- 靳丽妍朱光发
- 关键词:中性粒细胞上皮细胞凋亡急性肺损伤
- 黄杆菌裂解产物对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用及机制研究
- 2016年
- 目的:探讨黄杆菌裂解产物对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用及可能的机制。方法:将黄杆菌裂解产物与THP-1细胞进行共培养,观察其对THP-1巨噬细胞及泡沫细胞形成的影响,并检测CD14、TLR4、LDLr三个受体mRNA的表达水平。结果:黄杆菌裂解产物促进THP-1单核细胞向巨噬细胞分化,并促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,上调CD14、TLR4、LDLr三个受体mRNA的表达水平。结论:黄杆菌裂解产物促进单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,这可能与其上调LDLr表达有关。
- 李坑黄艳夏静鸿张雪冬靳丽妍朱光发
- 关键词:单核细胞巨噬细胞泡沫细胞
- 小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响被引量:1
- 2010年
- 目的 探讨小于扰RNA(siRNA)抑制核因子κB(NF-κB)信号通路对细菌脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒(siRNA病毒组)及乱序(Scramble)对照序列逆转录病毒质粒(Scramble病毒组).用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-α mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量.结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平(0.97±0.02,0.89±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.01±0.03,0.97±0.01,均P<0.05);LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平(0.95±0.04,0.94±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.07±0.06,1.03±0.05,均P<0.05).LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-α mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(0.92±0.02比0.98 ±-0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P<0.05).LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组(均P<0.01).结论 针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值.
- 吴春婷朱光发赵佳晖张向峰靳丽妍闫树凤
- 关键词:肿瘤坏死因子Α巨噬细胞脂多糖类