陈海迪
- 作品数：8 被引量：13H指数：3
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- 发文基金：吉林省自然科学基金国家自然科学基金吉林省牧业管理局资助项目更多>>
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- 表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建及鉴定
- 鹅细小病毒（goose parvovirus,GPV）的VP3蛋白是病毒核衣壳的主要成分，约占GPV总蛋白含量的80％，具有较高的保守性，能够诱导机体产生中和抗体，使其成为GPV的主要保护性抗原。为了开展GPV-VP3基...
- 陈海迪
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因原核表达重组腺病毒多克隆抗体
- 延边白鹅IFN-γ基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2015年
- 为制备抗延边白鹅IFN-γ蛋白的多克隆抗体,以已制备的pMD-IFN-γ质粒为模板,通过PCR扩增到延边白鹅IFN-γ基因,经TA克隆和BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将目的基因亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,将经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确的重组蛋白用GST标签纯化试剂盒纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行ELISA检测。结果显示,成功构建了原核表达载体p GEXIFN-γ,表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为43 ku,制备的小鼠抗IFN-γ多克隆抗体效价为1∶16 000。
- 张颖刘恩平陈海迪高旭张立媛于清洋鲁承梁晚枫
- 关键词：IFN-Γ基因原核表达多克隆抗体
- 犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析被引量：4
- 2014年
- [目的]为分离犬细小病毒（CPV）.[方法]采集疑似CPV感染病死犬的组织病料,用胎猫肾细胞（F81）进行病毒分离,并对分离的病毒进行回归动物试验、间接免疫荧光（IFA）及VP2基因PCR扩增鉴定.[结果]经盲传3代后FS1出现明显细胞病变（CPE）,分离病毒可导致2～3月龄犬出现典型犬细小病毒病（CP）的临床症状和特征性病理变化,通过IFA观察到特异性的绿色荧光,PCR扩增到VP2基因全长为1 755 bp,编码584个氨基酸.它与国内外具有代表性的18株CPVVP2基因的核苷酸同源性为98.0％ ～ 99.8％,氨基酸同源性为96.1％ ～99.8％.[结论]用F81细胞成功分离到1株强毒CPV,命名为YBYJ株.
- 张立媛高旭陈海迪于清洋方爽
- 关键词：犬细小病毒VP2基因
- 表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2014年
- [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。
- 陈海迪高旭张颖许应天张立媛于清洋鲁承
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒真核表达
- 表达鹅α干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制鹅细小病毒活性的初步研究被引量：1
- 2012年
- 为研究表达鹅α干扰素(GoIFN-α)基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性,本实验从植物血凝素刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增gIFN-α基因,其大小为576 bp。将其与LacZ表达盒串联克隆于pSY681质粒中构建pSY681-IFN-α-LacZ转移重组质粒。采用脂质体将重组质粒转染于预感染禽痘病毒(FPV)017株的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝/白斑筛选获得重组禽痘病毒rFPV-IFN-α。采用间接免疫荧光和western blot方法对重组毒鉴定结果显示,GoIFN-α基因在CEF中获得表达,分子质量约为29 ku。表达的CoIFN-α对鹅细小病毒在鹅胚成纤维细胞中的复制具有抑制作用。本研究为进一步开展GoIFN-α基因重组FPV活载体疫苗的体内试验奠定了基础。
- 张颖高旭陈海迪鲁承
- 关键词：IFN-Α重组禽痘病毒抗病毒
- 延边白鹅γ干扰素基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为了研究延边白鹅γ干扰素的生物学特性,本试验采用刀豆素(ConA)刺激延边白鹅外周血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR方法扩增鹅γ干扰素基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列和序列分析。结果显示,延边白鹅γ干扰素基因全长495bp,经序列比对发现,克隆到的延边γ白鹅干扰素基因(JX966250)与哈尔滨鹅γ干扰素基因(AY524421)核苷酸序列同源性高达100%,与广东狮头鹅(EU030377)核苷酸序列同源性达99.6%,而三者的氨基酸同源性为100%。本试验成功克隆到延边白鹅γ干扰素基因,为进一步研究鹅干扰素的分子生物学特性和抗病毒作用机理奠定了基础。
- 张颖高旭汪雨婷陈海迪鲁承黄闯武宇辉
- 关键词：Γ干扰素克隆
- 延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究被引量：1
- 2014年
- 以本实验室构建的鹅pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上。将构建的重组质粒pET-30aIFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定。结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-α并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32。本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础。
- 彭永刚陈海迪高旭张颖鲁承张丽媛于清洋宋铭忻
- 关键词：Α干扰素原核表达多克隆抗体
- 鹅细小病毒YBLJ株VP3基因的真核表达被引量：4
- 2012年
- 为了研究鹅细小病毒(GPV)YBLJ株VP3基因的生物学特性,根据已克隆的GPV YBLJ株VP3基因序列(GenBank:JN836326),设计并合成一对特异性引物,经PCR扩增、克隆、转化、酶切与亚克隆,构建真核表达载体pcDNA-VP3,将鉴定正确的质粒转染至Vero细胞,经RT-PCR检测VP3基因转录水平,通过间接免疫荧光试验(IFA)观察VP3基因表达水平。结果显示,克隆的VP3基因全长约1 605bp,构建了真核表达载体pcDNA-VP3,经RT-PCR对转染细胞总RNA扩增得到特异性目的片段,IFA检测显示VP3基因在Vero细胞中获得了稳定表达。本研究为GPV核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 张颖鲁承赵文婧陈海迪高旭
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因真核表达
