郭兵
- 作品数：20 被引量：78H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生长分化因子5真核表达质粒转染小鼠骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化被引量：1
- 2009年
- 背景:生长分化因子5是软骨与骨组织形成、发育的重要调解因子,在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌健韧带损伤修复方面发挥重要作用。目的:小鼠骨髓基质干细胞体外转染真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5,检测与软骨形成分化相关的细胞外基质及蛋白多糖的表达。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在武汉协和医院中心实验室完成。材料:雄性昆明种小鼠20只,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。生长分化因子5真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5为自备。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞接种到6孔板,在细胞生长到90%融合时开始转染。设立3组:转染组采用LipofectamineTM2000进行脂质体介导pcDNA3.1(+)/生长分化因子5重组质粒瞬时转染;空质粒组转染空质粒pcDNA3.1(+);空白对照组只加入等量脂质体,其余步骤相同。主要观察指标:转染后72h通过RT-PCR及免疫细胞化学检测生长分化因子5基因与蛋白的表达鉴定转染是否成功,同法检测软骨基质Ⅱ型胶原的表达,转染后14d阿尔辛蓝染色检测蛋白聚糖的表达。结果:转染组有一大小为219bp的特异性扩增条带,骨髓基质干细胞胞浆内呈棕色阳性染色;而空质粒组、空白对照组均未发生生长分化因子5基因转录,无特异性扩增条带,且细胞胞浆未见明显染色。转染组可检测到Ⅱ型胶原基因的表达,基因大小225bp,Ⅱ型胶原细胞胞浆中可见棕黄色染色;空质粒组、空白对照组均未检测到Ⅱ型胶原基因的表达,SP染色均无明显染色。阿尔辛蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、空白对照组均未见明显异染性着色。结论:pcDNA3.1(+)/生长分化因子5转染骨髓基质干细胞能显著增加Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达,促进骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化。
- 刘之川邵增务邓超丁凡郭兵张宇坤
- 关键词：生长分化因子5软骨分化质粒
- 烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调节作用(英文)被引量：7
- 2008年
- 背景:研究表明,烟酰胺能够对白细胞介素1β或肿瘤坏死因子α致椎间盘退变起到保护作用,但烟酰胺对椎间盘细胞凋亡与增殖的保护机制尚不很清楚。目的:观察烟酰胺对兔髓核细胞增殖及凋亡的调控作用及其机制。设计、时间及地点:随机对照分组设计,于2007-04/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室及协和医院干细胞中心完成。材料:2～3月龄日本大白兔10只,体质量1.5～2.0kg,取L1～L6节段椎间盘内髓核细胞,体外培养髓核细胞凋亡模型。方法:实验分为6组,正常对照组:不加任何药物;烟酰胺组:加入0.5g/L烟酰胺;白细胞介素1β组:加入10μg/L白细胞介素1β;白细胞介素1β+Caspase抑制剂组:加入10μg/L白细胞介素1β及非特异性Caspase抑制剂Z-VAD-FM;白细胞介素1β+小剂量烟酰胺组:加入10μg/L白细胞介素1β及0.05g/L烟酰胺组;白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组:10μg/L白细胞介素1β及0.5g/L烟酰胺。3d后对各组细胞行AnnexinV-PI染色,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色检测及MTT检测。主要观察指标:各组细胞凋亡率、caspase-3、8、9功能染色阳性细胞率及各组细胞的吸光度。结果:①白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组较白细胞介素1β组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。②白细胞介素1β+Caspase抑制剂组、白细胞介素1β+大、小剂量烟酰胺组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9功能染色阳性细胞率较白细胞介素1β组明显下降(P<0.01或P<0.05)。③与白细胞介素1β组相比,白细胞介素1β+Caspase抑制剂组和白细胞介素1β+大剂量烟酰胺组吸光度升高(P<0.01)。结论:烟酰胺可以促进髓核细胞的增殖并抑制白细胞介素1β诱导的髓核细胞凋亡,对凋亡的抑制作用主要通过抑制凋亡的线粒体途径实现。
- 聂克杨述华熊蠡茗郭兵周建国
- 关键词：烟酰胺髓核增殖凋亡
- 腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用(英文)被引量：3
- 2009年
- [目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性。[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定。将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25μl。各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用。[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml。(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强。(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异。(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组。[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力。
- 熊蠡茗郭兵邵增务杨述华谢卯王河忠
- 关键词：椎间盘聚集蛋白聚糖
- 显微镜与显微内窥镜下微创手术治疗腰椎间盘突出症的疗效比较被引量：16
- 2009年
- 目的:比较显微镜下腰椎间盘切除术(MSLD)与显微内窥镜下椎间盘切除术(MED)治疗单节段腰椎间盘突出症(LDH)的疗效。方法:2006年4月～2007年10月收治单节段LDH患者278例,随机分为两组,其中148例采用MSLD治疗,130例采用MED治疗。比较两种手术的切口长度、手术时间、并发症、住院天数,手术后VAS、SF-36量表躯体疼痛评分、ODI改善率和改良MacNab评分情况。结果:MSLD组及MED组的切口长度分别为4.5±1.5cm和2.5±0.8cm,手术时间分别为40.0±13.8min和56.0±15.9min,两组间均有显著性差异(P<0.05);术中出血量分别为96±77ml和111±45ml、住院天数分别为9.4±2.6d和9.8±2.8d,两组间均无显著性差异(P>0.05)。MSLD组及MED组随访时间分别为平均18.3个月和18个月,末次随访时MSLD组及MED组的VAS改善率分别为(85.3±1.8)%和(84.5±2.1)%,SF-36量表躯体疼痛评分改善率分别为(81.3±5.6)%和(80.1±6.1)%,ODI改善率分别为(85.3±1.8)%和(82.3±2.0)%,改良MacNab评分优良率分别为94.0%和93.7%,两组间比较均无显著性差异(P>0.05)。MSLD组及MED组并发症分别为:腹部不适14例(9.46%)和12例(9.23%)、急性尿潴留21例(14.19%)和18例(13.84%),两组比较均无显著性差异(P>0.05);硬脊膜撕裂0例和2例(1.54%)、急性竖脊肌血肿2例(1.36%)和5例(3.85%),MSLD组明显少于MED组(P<0.01)。结论:MSLD与MED治疗单节段腰椎间盘突出症均可取得满意疗效,但MSLD操作简便、并发症少,是目前更为理想的微创手术方法。
- 郭兵邵增务熊蠡茗徐蔚蔚刘之川
- 关键词：腰椎间盘突出症椎间盘切除术微创显微镜显微内窥镜
- 烟酰胺对压力诱发兔腰椎间盘退变的保护作用(英文)被引量：5
- 2009年
- 背景:最近研究已经证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对椎间盘退变有改善作用。目的:验证烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成。材料:4月龄日本大白兔24只,体质量2.0kg;烟酰胺为天津市大茂化学试剂厂产品。方法:取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力,以98N压力诱发椎间盘退变建立兔腰椎间盘退变模型,并按分组要求给予兔口服烟酰胺:第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50mg/kg烟酰胺口服1周;第3组5只,以98N压力加压1周;第4组5只,以98N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周同时给予50mg/kg烟酰胺口服1周;第6组5只,自加压开始时持续给予50mg/kg烟酰胺,加压1周,然后去除压力后恢复1周。主要观察指标:以Thompson分级法及腰椎间盘磁共振评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及藏红O-快绿染色考察其组织学改变;P16INK4A免疫组织化学染色检测细胞增殖和衰老状态的变化。结果:①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级。MRI也显示,服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻。②第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P<0.01)。③第2组藏红O染色强度较第1组有所上升;第5,6组髓核和纤维环染色强度均高于第4组的相对应部位,其中以第6组髓核上升最为明显(P<0.01,P<0.01),第6组较第5组有轻微上升。④P16INK4A阳性率随烟酰胺给药时间延长而降低。结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎间盘的损伤,能够促进压力损伤后的椎间盘恢复。
- 周建国杨述华杨操邵增务徐蔚蔚郭兵俞旭东熊蠡茗
- 关键词：椎间盘烟酰胺
- 可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型的建立及评价(英文)被引量：12
- 2009年
- [目的]建立可控轴向压力诱发的椎间盘退变动物模型并考察其特性。[方法]取4个月龄日本大白兔40只,将其随机分为5组(每组8只)。采用基于横穿椎体的克氏针的自制加压装置,分别对2～4组动物腰椎间盘施加10 kg压力1、2、4周及8周,第1组作为假手术对照组。Thompson分级法及兔腰椎间盘磁共振(MRI)评价退变程度,HE染色及Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化染色考察其组织学改变。另外构建纤维环损伤致兔腰椎间盘退变模型,并对标本行HE染色以供比较。[结果]①Thompson分级:第2组7只均为Ⅱ级,第3组6只Ⅲ级,第4组5只为Ⅳ级,第5组4只动物退变程度达到V级。②MRI评分显示,第2组椎间盘以轻度退变为主;第3组椎间盘主要为中度退变。第4组、第5组则以重度退变为主。③HE染色显示,该模型椎间盘各区域的退变情况较纤维环损伤模型更为均匀。④免疫组化染色显示,退变过程中椎间盘基质成分退化的趋势与人体相符。[结论]可控轴向压力致兔腰椎间盘退变模型可以高效诱发椎间盘退变,尤其在轻、中度椎间盘退变方面具有优势。该模型可供深入研究,并用于椎间盘退变的治疗研究。
- 熊蠡茗邵增务郭兵杨述华裴洪詹子睿俞旭东王河忠
- 关键词：椎间盘退变动物
- 显微镜与显微内窥镜下下微创手术治疗腰椎间盘突出症的疗效比较
- 目的：比较显微镜下腰椎间盘切除术(MSLD)与显微内窥镜下椎间盘切除术下椎间盘切除术(MED)治疗单节段腰椎间盘突出症(LDH)的疗效。方法：2006年4月～2007年10月收治单节段LDH患者278例,随机分为两组,其...
- 邵增务郭兵杨述华肖宝钧郭晓东熊蠡茗徐蔚蔚刘之川
- 关键词：腰椎间盘突出症椎间盘切除术微创显微镜显微内窥镜
- TNF-冄激活大鼠胆管上皮细胞Jagged-1的表达并诱导其上皮-间质转化
- 2016年
- 目的:检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)对体外培养的原代大鼠肝内胆管上皮细胞Jagged-1表达的影响以及诱导其间质-上皮转化的作用.方法:原代胆管上皮细胞分为对照组,TNF-α处理组(10 ng/mL),TNF-α加核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)(50冚mol/L)处理组及PDTC单独处理组,72 h后Western blot法检测各组细胞Jagged-1蛋白、间质细胞标记成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein 1,FSP-1)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)和胆管细胞特异性标记角蛋白19片段(cytokeratin 19,CK19)的蛋白的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB蛋白结合活性.倒置显微镜观察各组胆管细胞的形态变化,Transwell小室法检测细胞的迁移能力.结果:TNF-α处理组胆管上皮细胞NF-κB的活性增强,Jagged-1、FSP-1、Vimentin和α-SMA蛋白的表达水平上调,CK19的表达下调,细胞迁移能力增强,细胞形态由鹅卵石样向梭形样转化.TNF-α+PDTC与TNF-α组相比其NF-κB活性明显减弱,Jagged-1,FSP-1,Vimentin和α-SMA蛋白水平降低,CK19表达升高,细胞迁移能力减弱,细胞形态向鹅卵石样转化.结论:TNF-α可通过激活NF-κB信号上调Jagged-1蛋白表达的同时诱导大鼠胆管上皮细胞向间质细胞转化.
- 李潼郭兵高杨于奇宏李锦锦鲜文静蒋帅郑启昌张勇
- 关键词：胆管上皮细胞上皮-间质转化
- 一氧化氮对兔纤维环细胞线粒体功能的影响及机制研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究一氧化氮(NO)对兔纤维环细胞线粒体功能的影响及其与纤维环细胞生物学行为的相关性。方法:平板培养的兔腰椎间盘纤维环细胞,将其分为6组加入不同剂量的NO供体硝普钠(SNP)及烟酰胺:A组,不加入药物;B组,10μmol/LSNP;C组,100μmol/LSNP;D组200μmol/LSNP;E组,100μmol/LSNP和0.05mg/ml烟酰胺;F组,100μmol/LSNP和0.5mg/ml烟酰胺。作用72h后检测细胞增殖活力、细胞内ATP含量、细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性以及线粒体膜电位。结果:兔纤维环细胞经不同浓度的SNP作用72h后,细胞内NOS量随SNP加大而增加、ATP量则随着减小,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);SNP组可引起纤维环细胞膜电位下降,烟酰胺组可减轻因SNP引起的膜电位下降(P<0.05);与SNP组比较烟酰胺组呈浓度依赖性促进纤维环细胞增殖(P<0.05)及改善纤维环细胞的增殖能力,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过量的NO可损害兔纤维环细胞的线粒体代谢功能,通过抑制NO的合成以及保护椎间盘细胞线粒体的功能,有助于预防椎间盘退变。
- 郭兵邵增务熊蠡茗聂克周建国
- 关键词：纤维环细胞线粒体一氧化氮烟酰胺
- 一氧化氮对兔纤维环细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:研究一氧化氮(NO)对兔纤维环细胞生物学行为的影响及其相关机制。方法:构建兔纤维环细胞凝胶培养模型并将其为7组,分别向培养基内加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP)及iNOS抑制剂烟酰胺和1400W进行干预:第1组为正常对照组,不加入药物;第2组加入10μmol/LSNP;第3组加入100μmol/LSNP;第4组加入200μmol/LSNP;第5组加入100μmol/LSNP和1μmol/L1400W;第6组加入100μmol/LSNP和0.05mg/mL烟酰胺;第7组加入100μmol/LSNP和0.5mg/mL烟酰胺。干预3d后分别采用MTT法、AnnexinV-PI染色和RT-PCR检测各组纤维环细胞增殖活力、细胞凋亡状况及细胞聚集蛋白多糖(aggrecan)、Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达。结果:①MTT检测显示:第3、4组吸光度值(A)较正常对照组明显下降(均P<0.05),而第5、6、7组均高于第3组(均P<0.05)。②流式细胞仪分析显示:第2、3、4组凋亡细胞比例远高于正常对照组,其中第4组高达32.98%;第5、6、7组凋亡细胞比例较第3组均有所下降,但仍高于正常对照组。③RT-PCR显示:第2、3、4组aggrecan、Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达较正常对照组均明显降低(均P<0.05),而第5、6、7组较第3组均明显增加(均P<0.05)。结论::NO对兔纤维环细胞生物学行为有较强的干扰作用,可能在纤维环损伤机制中扮演着重要角色。iNOS抑制剂可以有效抑制NO对兔纤维环细胞生物学行为的干扰,具备用于椎间盘退变防治的良好潜力。
- 周建国杨操杨述华谢卯黄吉军郭兵熊蠡茗
- 关键词：纤维环细胞一氧化氮烟酰胺凋亡增殖
