车会学
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立被引量：3
- 2013年
- 应用差速离心和Percoll不连续密度梯度法分离纯化小麦三核期小花线粒体.在裂解液选择、IPG胶条pH值范围、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对线粒体蛋白质双向电泳体系进行探索和优化,确立了一套适用于小麦小花高纯度完整线粒体的分离方法及其蛋白质双向电泳的技术体系.结果表明,采用20%、24%和40%Percoll密度梯度和28%Percoll自形成密度高速离心体系,获得了有活性、高纯度且较完整的线粒体;经TCA-丙酮法提取蛋白,以7 mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS(W/V),65 mmol/L DTT,0.5%IPG缓冲液(V/V),0.001%溴酚蓝(W/V)裂解液溶解蛋白,采用17 cm,pH 4～7 IPG胶条和11%SDS-PAGE分离胶,上样量为160μg,硝酸银染色法,更适合小麦小花线粒体蛋白质组双向电泳分离.经PDQuest 2DE 8.0.1软件包统计分析,在2-DE图谱上分辨出约150个蛋白点,蛋白点清晰呈圆形,无横条纹干扰,这为利用双向电泳技术在亚细胞水平对线粒体进行蛋白质组学研究与分析奠定了基础,更为进一步分析研究线粒体与雄性不育的关系提供了理论与技术支撑.
- 陈征王书平张改生宋齐鲁郭佳林车会学
- 关键词：小麦小花密度梯度离心双向电泳
- 三例小麦细胞质雄性不育系线粒体DNA的扩增片段长度多态性分析被引量：2
- 2013年
- 细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速离心法提取纯化小麦线粒体。结果表明:通过该提取方法获得的mtDNA,其质量和纯度能够满足PCR反应和遗传学分析。在64对选扩引物中,筛选到了4对特异性引物,其中引物E1/M7在ms(Kots)-90-110不育系扩增出3条特异条带;引物E4/M2在ms(Ven)-90-110不育系扩增出2条特异条带;引物E7/M6在ms(S)-90-110不育系中扩增出2条特异条带;引物E6/M4在ms(Kots)-90-110不育系中扩增出2条特异条带。这些特异引物可以用来作为鉴定具有粘果山羊草Aegilops kotschyi、偏凸山羊草Ae.ventricosa、斯卑尔脱小麦Triticum spelta 3类不育细胞质型小麦雄性不育系的细胞质分子标记,为研究小麦细胞质雄性不育机理奠定了分子基础。
- 朱启迪张新钵Ejaz M张改生车会学王书平宋齐鲁杨书玲张龙雨
- 关键词：小麦细胞质雄性不育线粒体DNA扩增片段长度多态性分子标记
- 小麦旗叶高纯度质膜的提取及蛋白质组学双向电泳体系的建立被引量：3
- 2013年
- 以生长到Feekes 8.5时期小麦旗叶为试验材料,通过差速离心结合两相法提取并纯化质膜蛋白,进而在裂解液选择、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对质膜蛋白质双向电泳体系进行了优化.结果表明,采用6.4%PEG 3 350/Dextran T-500(W/W)两相体系可以获得纯度高达87.9%质膜微囊.经TCA-丙酮法裂解蛋白,以12%SDS-PAGE分离胶对900μg质膜蛋白进行双向电泳,在2-DE图谱上可分辨出173个蛋白点.建立了一套用于小麦旗叶高纯度质膜的提取方法及其蛋白质组学双向电泳体系.
- 宋齐鲁王书平张改生陈征郭佳林车会学
- 关键词：小麦旗叶两相法双向电泳
- 基因HAT1在小麦生理型雄性不育系中的表达分析被引量：1
- 2013年
- 组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋白乙酰转移酶基因HAT1的表达水平。结果表明,与同期可育花药相比,生理型雄性不育小麦花药的HAT1基因表达水平在单核期显著升高,二核期变化趋势基本相同,三核期显著降低。DNA Ladder显示,不育花药在单核期出现明显的DNA片段化,比正常花药提前凋亡。这表明SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育可能与HAT1基因表达异常和花药细胞提前凋亡有关。
- 车会学巴青松张改生陈征宋齐鲁刘红占桑青
- 关键词：小麦DNA损伤修复
