袁建明
- 作品数：20 被引量：10H指数：2
- 供职机构：第二军医大学生物医学工程研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导碱性成纤维细胞生长因子在大鼠羊膜上皮细胞中的表达和分泌被引量：2
- 2010年
- 目的探讨以慢病毒作为载体,将带有分泌肽的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因片段转入大鼠羊膜上皮细胞(AECs)中,构建能稳定表达并分泌bFGF多肽的细胞载体。方法取妊娠晚期SD大鼠的羊膜组织进行AECs原代培养,用免疫荧光细胞化学和RT-PCR法鉴定;构建包含人神经生长因子(NGF)分泌肽-bFGF编码基因的慢病毒载体,并行慢病毒包装,用病毒上清对传代大鼠AECs进行感染并筛选,经免疫荧光细胞化学、RT-PCR及酶联免疫吸附法(ELISA)检测基因转染效果,体外培养观察基因转染后的细胞生长活性;用基因转染细胞的培养上清对PC12细胞进行培养,检测所分泌bFGF多肽的生物学活性。结果所培养的大鼠AECs经鉴定能表达上皮特异性标志物CK-19、神经类细胞标志物巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及细胞多能性标志分子SSEA-4、Oct-4、Nanog、Sox2、波形蛋白(vimentin)等;经感染并筛选后扩增培养的大鼠AECs在mRNA水平及多肽水平均能检测到目的基因bFGF的表达,筛选后的转染细胞生长活性较未转染细胞明显提高,其培养上清能明显促进PC12细胞的生长和分化。结论用慢病毒作为载体能成功将bFGF基因转染入大鼠AECs中,所建立的基因修饰AECs能表达并分泌bFGF多肽,具有较强的生长活性及神经营养活性。
- 谢佳芯袁建明郭金萍由振东路长林许家军
- 关键词：羊膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子慢病毒基因转染酶联免疫吸附
- 羊膜上皮细胞修复大鼠视神经损伤
- 本文利用动物实验，在成年大鼠视神经横断伤后，伤区分别移植羊膜上皮细胞、羊膜上皮细胞诱导的神经干细胞、碱性成纤维细胞生长因子转染羊膜上皮细胞、胶原海绵羊膜上皮细胞复合体，能提高视网膜节细胞存活率，引导再生轴突长入伤区，促使...
- 许家军刘芳谢佳芯何俊山齐爱青郭兵袁建明
- 关键词：视神经损伤羊膜上皮细胞神经修复动物实验
- 文献传递
- MAPCs//EPCs性组织工程化静脉瓣的在体研究
- 研究背景和意义:原发性瓣膜功能不全、血栓形成完全再通后的瓣膜破坏以及先天性瓣膜缺乏等静脉疾患,静脉瓣移植常常是最后的选择。但是,自体静脉瓣移植除来源有限、损伤较大外,尚有瓣膜强度不足和带瓣静脉的管径往往难以符合要求等问题...
- 袁建明
- 关键词：脱细胞支架静脉瓣慢性静脉功能不全静脉瓣
- 文献传递
- 绵羊骨髓来源内皮祖细胞的培养与鉴定被引量：2
- 2010年
- 背景:当今,组织工程化静脉瓣的研究刚刚起步,种子细胞的选择是其关键,内皮祖细胞可以作为组织工程化静脉瓣体外构建理想的种子细胞。目的:通过体外培养与鉴定绵羊骨髓来源内皮祖细胞,探讨绵羊骨髓来源内皮祖细胞培养方法,为绵羊组织工程静脉瓣种子细胞选择提供实验基础。方法:绵羊骨髓经条件培养基进行选择培养获取骨髓单个核细胞,传代扩增后用磁珠分选出CD133+细胞再培养,流式细胞检测确认分前细胞CD133的表达情况;分选传代后绘制细胞生长曲线观察细胞生长能力,用免疫细胞化学检测细胞特异性分子CD133,D34,VWF的表达情况;FITC标记BS-1-lectin和DiI标记ac-LDL标记细胞检测细胞吞噬功能。结果与结论:绵羊骨髓单个核细胞原代培养2d细胞开始贴壁,7d细胞完全融合,传代后第2天进入对数生长期,传代3～5d形成为典型的铺路石样,传代后第7d细胞进入增殖平台期;细胞传代后磁珠分选率为12.6%,流式细胞仪检测显示CD133阳性率为12.64%;免疫细胞化学检测显示细胞呈CD133、CD34、血管性血友病因子阳性表达。细胞能同时吞噬FITC-labeledBS-1-lectin,DiI-ac-LDL阳性率达85.3%。证实实验成功地从绵羊骨髓单个核细胞中分离培养出内皮祖细胞。
- 袁建明管松晖党瑞山杨向群沈曼茹张传森
- 关键词：绵羊骨髓内皮祖细胞
- 羊膜上皮细胞移植修复大鼠视神经损伤
- 许家军谢佳芯郭兵袁建明由振东路长林
- 移植神经或bFGF转染神经干细胞对受损视神经细胞增殖的作用及机制
- 目的：视神经损伤后虽然有再生的潜力,但由于整个微环境不支持神经再生,所以到目前为止因视神经损伤或疾病造成的失明还没有较好的治疗方法。特别是视神经损伤后,神经中的细胞数量逐渐减少,最终致视神经萎缩,更不利于再生轴突的生长和...
- 袁建明
- 关键词：视神经损伤移植神经成纤维细胞生长因子神经干细胞
- 文献传递
- 组织工程化静脉瓣的研究现状与发展趋势(英文)被引量：2
- 2010年
- 目的:综述国内外组织工程静脉瓣的研究现状,分析组织工程化静脉瓣在临床应用的发展趋势。方法:应用计算机检索2000-01/2009-08PubMed、ProQuest Health& Medical Complete数据库、Springer英文期刊全文数据库、Elsevier全文数据库相关文章,检索词为"tissue engineering venousvalve",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索2000-01/2009-08重庆维普科技期刊数据库、清华同方学术期刊数据库、中国生物医学文献数据库相关文章,检索词为"组织工程静脉瓣",并限定文章语言种类为中文。此外还手工查阅相关专著数部。结果:综合分析,可归纳总结出一种比较理想的组织工程化静脉瓣构建方法是将内皮祖细胞和多能成体祖细胞联合应用,分批种植在同种异体来源的脱细胞静脉支架上,在三维立体培养系统上不断加压灌注,最大程度模拟体内环境,使种子细胞能很好的在支架材料上生长成有功能的组织工程化静脉瓣。为组织工程化静脉瓣的临床应用提供实验基础。结论:目前组织工程化静脉瓣的研究取得了相当大的进展和令人鼓舞的成绩,为深静脉功能不全患者带来了曙光,在深静脉功能不全治疗领域有广泛的应用前景。
- 袁建明党瑞山沈曼茹张传森
- 关键词：种子细胞生物反应器
- 脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备及其免疫原性评价
- 2011年
- 目的：制备脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料,通过探讨其对BALB/c小鼠体液免疫和细胞免疫的影响,以此评价该脱细胞基质的免疫原性,进而为脱细胞组织工程支架的安全性提供实验依据.方法：正常成年绵羊带瓣股静脉2cm长的片段,联合使用弱碱、非离子去垢剂及核酶进行脱细胞处理.H-E染色观察细胞组分残留及细胞外基质完整性.免疫组织化学检测其HLA-1的表达.将脱细胞基质植入BALB/c小鼠背部皮下,ELISA法检测植入前、植入后24h内、1周、3周、9周小鼠血清IgG.此外,采用刀豆素A诱导的脾体外淋巴细胞增殖实验检测脱细胞支架材料浸提液对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖的影响.结果：经弱碱、非离子去垢剂及核酶处理后的绵羊带瓣静脉,未见细胞组织,纤维未见断裂;HLA-1未见阳性表达.植入脱细胞基质后,小鼠体内IgG水平与植入前相比,各时相点差异均无统计学意义.施加脱细胞基质浸提液后,BALB/c小鼠淋巴细胞还原率与阴性对照相比,差异无统计学意义.而与施加刀豆素A相比,差异有统计学意义.结论：联合弱碱、非离子去垢剂及核酶处理可制备良好的脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料;该支架对BALB/c小鼠体液免疫和细胞免疫无明显影响.
- 沈曼茹熊绍虎袁建明张永珍党瑞山张传森景在平
- 关键词：脱细胞体液免疫细胞免疫
- 大鼠视神经损伤后大胶质细胞去分化及预变性腓总神经的诱导被引量：1
- 2008年
- 目的研究视神经损伤后神经胶质细胞的去分化及其诱导。方法成年雄性SD大鼠,分为正常对照组、损伤组、移植组和压榨移植组,在视神经伤后3d、7d、14d和28d 4个不同时相点取视神经,用HE方法计数细胞数量,用免疫组织化学、免疫印迹、原位杂交组织化学结合计算机图像分析检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝(NF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Nogo-A及Nogo-A mRNA的表达,用免疫荧光双标组织化学法检测Nestin-GFAP和Nestin-MBP的共表达。结果损伤组细胞数量仅在伤后7d明显增多,Nestin、MBP、Nogo-A及其mRNA表达上调,GFAP、NF、BDNF下调,出现一些Nestin-GFAP双标细胞和少量Nestin-MBP双标细胞;与损伤组相比,移植组和压榨移植组一些时相点的细胞数量不同程度地增多,Nestin、GFAP、BDNF和NF表达上调,MBP、Nogo-A及其mRNA表达下调,Nestin-GFAP双标细胞有所增加,且28d组高于14d组。结论视神经损伤后,主要是星形胶质细胞发生去分化,大胶质细胞呈现一些不利于神经再生的基因表达变化;移植预变性周围神经能进一步诱导星形胶质细胞去分化,大胶质细胞的一些基因表达变化有利于神经再生。
- 蔺海燕许家军刘芳郭金萍袁建明
- 关键词：视神经神经移植神经胶质细胞去分化
- 碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠受损视神经胶质细胞去分化被引量：1
- 2010年
- 目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进大鼠受损视神经修复及诱导胶质细胞去分化的机制。方法成年SD大鼠55只随机分为正常对照组、损伤组、bFGF组。术后7d取眶内段视神经行Agilent基因芯片、实时荧光定量PCR检测;术后7d、14d取眶内段视神经行HE、免疫组织化学等检测。结果术后7d,bFGF组与损伤组相比有645条基因上调,458条下调,其中包括与神经干细胞或前体细胞及神经发育、增殖凋亡、染色质构型、转录调节、信号转导、神经生长相关基因等。与损伤组相比,bFGF组受损视神经远侧段细胞核增大,细胞数量增加,巢蛋白、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性物质增加,近侧段神经丝(NF)阳性物质增加。结论外加bFGF能促进受损视神经细胞增殖,增强神经胶质细胞去分化变化,同时改善神经再生的抑制性微环境,促进视神经再生。
- 郭金萍许家军刘芳袁建明
- 关键词：视神经碱性成纤维细胞生长因子神经胶质细胞去分化基因芯片
