董志刚
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 固氮酶铬铁蛋白的晶体生长(英文)被引量：1
- 2002年
- 在合适的结晶条件下 ,从含Cr无氨培养基中生长的固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 中纯化出的CrFe蛋白可从溶液中析出深棕色斜四棱柱晶体 ,晶体最大的两条对角线长度分别可达 0 .2 5mm和 0 .12mm。PEG 80 0 0、MgCl2 、NaCl、Tris和Hepes缓冲液的浓度及结晶方法等对该蛋白的出晶率、晶核数目、晶体大小和质量都有明显影响。CrFe蛋白结晶所需的上述化合物的最适浓度与在Mn中生长的固氮菌突变种UW3 的MnFe蛋白和缺失nifZ固氮菌突变种的ΔnifZMoFe蛋白结晶所需的最适浓度有所不同。结果表明 。
- 张华峰王耀萍吕玉兵赵颖代小虎董志刚黄巨富
- 关键词：固氮菌突变种晶体生长
- 含锰固氮酶组分Ⅰ蛋白的纯化和特性(英文)被引量：2
- 2001年
- 棕色固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 能在无Mo而含Mn的无氨培养基中固氮生长。低浓度的Mn对UW3 突变种生长有促进作用。从在Mn中生长的UW3 菌体中分离得到的部分纯固氮酶组分Ⅰ蛋白含有Mn和Fe原子 (Fe/Mo/Mn为 10 .41∶0 .19∶1.0 0 )并具有OPMoFe蛋白一半的还原乙炔和质子的活性。这种蛋白的吸收光谱和圆二色谱与MoFe蛋白存在明显的差异 ,含Mn蛋白的亚基分子量都与MoFe蛋白的α亚基相近。初步结果表明 ,这种含Mn蛋白可能是一种固氮酶组分Ⅰ蛋白。
- 黄巨富汪道涌董志刚汪志平张华峰吕玉兵许祥明赵颖
- 关键词：蛋白纯化
- 几种固氮菌突变种固氮酶的特性及晶体生长
- 董志刚
- 关键词：固氮菌固氮酶晶体生长
- 文献传递
- 固氮酶锰铁蛋白的晶体生长(英文)被引量：1
- 2001年
- 从以Mn代钼的固氮培养基中固氮生长的固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 中分离纯化的MnFe蛋白 ,在一定的结晶条件下 ,可从溶液中析出深棕色的短斜四棱柱晶体。Tris和Hepes缓冲液、NaCl、MgCl2 和PEG的浓度及结晶方法等 ,对该蛋白的出晶率、晶核数目、晶体大小和质量均有明显的影响 ,PEG浓度的改变还可使该蛋白晶体的晶型发生变化。MnFe蛋白结晶所需的上述化合物的最适浓度与缺失nifZ固氮菌突变种ΔnifZMoFe蛋白结晶所需的最适浓度有所不同。SDS凝胶电泳表明 ,晶体溶解后的蛋白与结晶前的MnFe蛋白基本相同。结果表明 。
- 黄巨富董志刚汪道涌吕玉兵张华峰王耀萍韩毅代小虎
- 关键词：晶体生长
- 缺失nifZ的棕色固氮菌突变种钼铁蛋白的晶体生长研究(英文)被引量：2
- 2000年
- 在一定的结晶条件下 ,缺失nifZ的棕色固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种钼铁蛋白将从溶液中结晶出深棕色的短斜四棱柱晶体。PEG 80 0 0、MgCl2 、NaCl、Tris的浓度及缓冲液的pH对该蛋白的结晶及晶体生长影响的系统研究表明 ,浓度和pH较低时 ,不出晶体 ;随着浓度逐渐提高及pH高于 8.0 ,在一周内出现大量小晶体 ;再提高浓度 ,便延长结晶时间但出质好、体积大而数少的晶体 ;然后晶体随浓度的提高而又变小、变多、甚至晶质变差 ,直至不再出晶体。影响晶体生长的各因子的最适浓度随其他条件的改变而有所不同。当缓冲液的pH为 8.2而PEG 80 0 0、MgCl2 、NaCl、Tris和蛋白质的浓度分别为 1.86 %、30 0mmol/L、40 0mmol/L、5 3mmol/L和 4.6 4g/L ,在一滴悬滴液中只有一颗较大的优质晶体 (最大两边线均为 0 .16mm)。
- 黄巨富王耀萍董志刚黄孝明汪道涌吕玉兵汪志平
- 关键词：棕色固氮菌晶体生长
- 棕色固氮菌nifZ与固氮酶钼铁蛋白P-cluster合成的关系被引量：3
- 1999年
- 与野生型固氮菌（OP）MoFe蛋白相比，缺失nifZ的棕色固氮菌（AzotobactervinelandiiLipann）突变种的△nifZMoFe蛋白对乙炔的还原活性和Fe／Mo比值都显著降低。在相同实验条件下从这两种MoFe蛋白中抽提出的FeMoco在催化活性和金属组成方面都很相似，而这两种蛋白的圆二色（CD）谱则有显著差异，除在540－750nm外，△nifZMoFe蛋白在可见光区域380－540nm的△ε明显降低并在430nm附近处出现一个奇特的尖负峰；而在紫外区域的208nm和222nm负峰的高度却明显增加。△nifZMoFe蛋白可在合适浓度的PEG8000和MgCl2溶液中结晶出来，而晶体大小和出现沉淀多少与上述CD谱的负峰有关。这表明：棕色固氮菌nifZ与MoFe蛋白P-cluster的合成有关，并由此影响蛋白质的构象、稳定性和结晶过程。
- 黄巨富汪道涌董志刚汪志平李佳格王耀萍
- 关键词：棕色固氮菌钼铁蛋白固氮酶
- 氧敏感蛋白空间晶体生长的研究(英文)
- 2001年
- 为适应固氮酶蛋白等厌氧蛋白质空间晶体生长的要求 ,应在地面用简易而适用的厌氧加样装置以优化这类蛋白的结晶条件。用塑料袋或简易箱代替固氮酶实验室常用的笨重厌氧箱 ,获得了缺失nifZ固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种的MoFe蛋白和含锰固氮培养基中生长的UW3 的MnFe蛋白晶体。并在远离固氮酶实验室的地方 ,使用由小食品塑料袋和急救用的氩气袋组成的更轻便的厌氧装置 ,用坐滴法也能使这两种蛋白结晶出来。结果表明 ,利用上述简易厌氧装置有望达到以上
- 董志刚王耀萍韩毅龚海韵汪道涌陆建华黄巨富
- 关键词：植物生物固氮
- 含铬固氮酶组分Ⅰ蛋白的纯化和特性(英文)被引量：1
- 2002年
- 在含Mo固氮培养基中不能生长而在无Mo条件下可固氮生长的固氮菌 (AzotobactervinelandiiLipmann)突变种UW3 ,能在无Mo而含Cr的无氮培养基中生长。从菌体中分离得到的部分纯固氮酶组分Ⅰ蛋白含有Cr和Fe原子 (Fe/Mo/Cr为 11.6 0∶0 .41∶1.0 0 ) ,并能表达相当于棕色固氮菌野生型固氮菌MoFe蛋白对乙炔和质子还原的 70 %的活性。与从Mn中生长的UW3 菌体中所提取纯化的MnFe蛋白不同 ,这种含铬蛋白与MoFe蛋白 (α2 β2 )一样 ,是由两种亚基组成的四聚体。初步结果表明 ,这种含Cr蛋白可能是一种固氮酶组分Ⅰ蛋白。
- 黄巨富董志刚张华峰吕玉兵赵颖汪志平
- 关键词：固氮酶固氮菌
- 含铼重组液对部分缺失金属原子簇的钼铁蛋白的激活作用被引量：5
- 1999年
- 棕色固氮菌(AzotobactervinelandiiLipmann)固氮酶MoFe蛋白经邻菲啉和空气处理后,成为部分缺失P_cluster和FeMoco的失活蛋白。与由Re2O7、高柠檬酸铁、Na2S和二硫苏糖醇(DTT)组成的无圆二色(CD)谱信号的重组液保温后,保温蛋白对乙炔和质子还原的活性都得以显著恢复;紫外和可见光CD谱虽有明显恢复,但仍与还原MoFe蛋白有所差异。这表明:1)保温的蛋白液中除含有未被邻菲啉等处理而破坏的完整MoFe蛋白外,还可能存在新组装的含Re的固氮酶;2)新组装的ReFe蛋白和MoFe蛋白可能在固氮能力上相似。
- 黄巨富汪志平汪道涌董志刚李佳格
- 关键词：失活钼铁蛋白体外组装
