苏志坚
- 作品数：107 被引量：358H指数：10
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 人内皮细胞抑制生长素在毕赤酵母中的高效表达被引量：3
- 2004年
- 根据人胶原蛋白ⅩⅧNC结构域C末端编码内皮细胞抑制生长素 (Endostatin)的成熟多肽序列 ,人工合成了由毕赤酵母 (Pichiapastoris)中偏爱密码子组成的内皮细胞抑制生长素基因序列。该基因以N端融合的方式正确插入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电激将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1 1 68细胞中 ,筛选获得表达具有生物活性的内皮细胞生长抑制素的高产菌株。在摇瓶发酵水平上 ,产量达到 80mg L。而利用生物反应器进行高密度发酵 ,Endostatin的产量可达 1 2 5mg L。
- 苏志坚吴晓萍郑青冯雅于平野曲红艳刘太胜李校堃
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵癌症
- haFGF和nm-haFGF过表达对乳腺肿瘤细胞增殖及c-fos、c-jun mRNA表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetic human acidic fibroblast growth factor,nm-haF-GF)和人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)对恶性肿瘤细胞的增殖作用及其与对c-fos、c-jun mRNA表达的影响,探讨nm-haFGF在治疗神经系统疾病和心血管疾病等方面的临床应用安全性。方法构建细胞内真核表达载体pIRES/haF-GF、pIRES/nm-haFGF,分泌型真核表达载体pSectag/haFGF、pSectag/nm-haFGF。转染乳腺癌细胞MCF-7,Western blot鉴定细胞内及上清中aFGF的表达。用流式细胞技术分析细胞周期(G0/G1,S期,G2/M)。用半定量RT-PCR检测立早基因c-fos、c-jun mRNA的表达。结果nm-haFGF和haFGF在MCF-7细胞中能够过量表达。转染nm-haFGF组的S期和G2/M细胞比率与对照组差异无显著性,而转染haFGF组差异有显著性。转染haFGF后,c-fos、c-jun mRNA的表达明显升高,转染nm-aFGF后却与未转染组无差别。结论与haFGF相比,nm-haFGF消除了促肿瘤细胞增殖活性,基本不会诱导细胞c-fos、c-jun原癌基因的转录与表达。
- 郑青彭菲苏志坚吴晓萍许华李校堃
- 关键词：增殖活性C-FOSC-JUN
- 一种缺失核定位信号区的hbFGF的表达及纯化(英文)
- 2005年
- 目的:为了研究缺失核定位信号区的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)独特的转运机制,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达和纯化了缺失核定位信号区的hbFGF。方法:将PCR扩增得到的hbFGFcDNA片断克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性。结果:hbFGF的表达量约为全菌体蛋白的20%,纯化的缺失核定位信号区的hbFGF的促分裂活性与缺失核定位信号区的hbFGF标准品相当。结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达缺失核定位信号区的hbFGF,纯化得到的hbFGF可用于进一步的研究。
- 吴晓萍苏志坚郑青吴思娴冯雅曲红艳许华李校堃
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子核定位信号纯化
- 菌丝霉素抑菌活性鉴定及其在防治牛乳腺炎中的应用被引量：1
- 2015年
- 试验目的是通过毕赤酵母系统高效表达一种新的真菌防御素菌丝霉素,鉴定它的抑菌活性,并考察其对牛乳腺炎疾病的防治功能。将菌丝霉素基因克隆到酵母表达载体p Pic Zα中,转化并重组到毕赤酵母GS115中。经过甲醇诱导表达,分离纯化,进行体外抑菌活性鉴定。结果显示菌丝霉素在1μg/ml浓度下,对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等起到抑制作用,对耐药性金黄色葡萄球菌的MIC为10~50μg/ml。鉴于上述细菌是引起奶牛乳腺炎的重要致病菌,我们将0.05%菌丝霉素蛋白灌注到奶牛乳腺中,经过7 d的治疗期,发现奶牛乳腺炎得到有效治疗或缓解。上述结果表明菌丝霉素在0.05%剂量下,对奶牛乳腺炎具有防治作用,可望开发为一种新兽药。
- 孙丹丹周玉岩温黎俊逯佩凤苏志坚黄亚东
- 关键词：毕赤酵母抑菌活性乳腺炎
- 病毒毒饵法初探
- 2000年
- 杨沛苏志坚
- 关键词：斜纹夜蛾多角体病毒食性毒饵暴食多食
- 全文增补中
- 非促分裂酸性成纤维细胞生长因子抑制由放线菌素D诱导的Balb/c3T3细胞的凋亡
- 2006年
- 目的探讨非促分裂酸性成纤维细胞生长因子(nmaFGF)对放线菌素D(ActD)诱导Balb/c3T3成纤维细胞凋亡的保护作用。方法利用放线菌素D诱导3T3细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、ActD处理组和nmaFGF处理组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法测定nmaFGF对3T3细胞凋亡的影响。并利用Western免疫印迹检测nmaFGF作用于3T3细胞后Akt信号通路中p-Akt分子的表达。结果空白对照组的凋亡率为1.53%;ActD处理组3T3细胞发生明显的细胞凋亡,凋亡率为33.83%;而nmaFGF处理组的细胞凋亡受到显著抑制,凋亡率分别下降到18.97%,15.17%和12.83%,凋亡下降率分别为14.86%,18.66和21.00%。Western半定量检测结果显示,在0.1～10μg/ml的浓度下,随着nmaFGF剂量的增加,p-Akt的表达水平有所增加,3T3细胞的凋亡率随之下降。结论nmaFGF可以通过AKT途径显著抑制由放线菌素D诱导的Balb/c成纤维细胞的凋亡。
- 吴志玲苏志坚李校堃宋江南李文君肖健丁长才
- 关键词：BALB/C3T3成纤维细胞AKT凋亡
- 利用荧光定量PCR技术快速检测转基因产品的研究被引量：7
- 2006年
- 针对转基因植物普遍含有的35S启动子进行了通用引物和Tapman荧光探针的设计合成,利用荧光定量PCRfluorescencequantitativepolymerasechainreactionFQ-PCR技术对转基因大豆、玉米和辣椒进行非特异性检测,结果显示出转基因样本有阳性扩增条带,非转基因样本呈现阴性。实验表明,荧光定量PCR检测较普通的检测方法具有高效、准确的特点,在转基因产品的分析检测方面提供了一个实用的方法。
- 白卫滨黄亚东柳忠玉赵文苏志坚
- 关键词：转基因植物荧光定量PCR
- 抗草甘膦转基因豆粕PCR检测研究被引量：1
- 2006年
- 以美国、阿根廷、印度和中国豆粕为材料,利用设计的特异性引物,建立了PCR技术定性检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因Lectin、Ca MV35S/CTP ofEPSPS边界序列和NOS终止子;从印度豆粕、中国豆粕中仅检出内源参照基因Lectin,确定了PCR技术检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0·5%,稳定性良好。
- 黄亚东白卫滨孙建霞柳忠玉赵文苏志坚姜丽娟王蒙郭建红
- 关键词：PCR灵敏度稳定性
- 甜菜夜蛾卵的超低温冷冻保存
- 李广宏庞义陈其津苏志坚
- 人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立
- 2012年
- 建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法。将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示,在1×10-9～1×10-5mol/L的浓度范围内,普兰林肽能显著增加分化后的L6细胞的糖吸收量,在16 h达到最大值。普兰林肽浓度的负对数(x)与细胞糖吸收增加量(y)间呈现出良好的线性关系(y=-4.750x+59.54,R2=0.991 9)。应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射剂的活性,结果显示1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L的普兰林肽注射剂作用于分化的L6细胞16 h,细胞的糖吸收增加率为(61.89±9.54)%,(43.68±10.06)%和(33.30±13.03)%(P<0.01);与单用胰岛素组对比,普兰林肽与胰岛素联合使用能显著提高分化后的L6细胞的糖吸收量(P<0.05),与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致。本实验为普兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型。
- 王欢歌肖雪胡浩苏志坚项琪张齐好黄亚东
- 关键词：普兰林肽活性测定
