王红钢
- 作品数：14 被引量：7H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 22R序列loop和泡突变对GFP报告基因表达的作用
- 2011年
- 目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用。我们研究22R突变对GFP报告基因表达的作用。方法:将22R及其突变片段插入pEGFP-C1质粒,构建表达载体,瞬时转染HeLa细胞,荧光显微镜下计数观察GFP荧光阳性细胞数。结果:AAG、AGA、TGT、TTG和TGC(22R,野生型)5个质粒促进基因表达作用比较明显。VECT、VEGT、VETA、VETC、VETG和VETT明显促进GFP基因表达。结论:22Rloop和泡的突变对其活化GFP报告基因作用有重要影响。
- 王红钢王予东
- 关键词：GFP茎环结构转染
- SV40PolyA活化基因元件突变影响GFP报告基因表达
- 目的：大量非编码序列(non-coding DNA)存在于人和哺乳动物基因组中，大部分非编码序列的功能还不清楚，研究非编码序列对了解基因表达调节的机制、进而探寻非编码序列新的生物学功能对于认识人和哺乳动物的生物学行为，包...
- 王红钢
- 关键词：基因转染非编码序列
- SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究被引量：1
- 2011年
- 研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。
- 王红钢马欢李珠张彬景向阳张媛吕占军
- 关键词：非编码序列GFP茎环结构ALU
- SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响被引量：1
- 2012年
- SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。
- 李书平冯晶晶王红钢王秀芳吕占军
- 关键词：ALUSV40POLYAGFP转录终止
- 医学生物化学实验教学中学生创新思维能力的培养被引量：1
- 2012年
- 提高科研思维能力是高校成功培养高素质人才的重要因素。生物化学实验是培养的途径之一,因此,探讨生化实验课教学方法尤为重要。该文结合生化学科的特点,从实践中培养学生的动手能力和缜密的科研思维能力,强调能力培养,提高了医学生的培养质量,取得较好的效果。
- 王红钢林波
- 关键词：生物化学科研思维教学
- 超氧化物歧化酶同工酶活性及含量在食管癌和癌前增生患者中的变化
- 2005年
- 王明臣王红钢董子明杨鲲鹏赵勤王俊萍蔡祥生
- 关键词：增生食管癌癌肿生物分子生物体内
- 前列腺癌与增生组织中PTEN、Ha-ras和MnSOD的表达及MnSOD克隆分析
- 本文利用前列腺癌及良性前列腺增生组织标本从mRNA水平探讨了抑癌基因PTEN、MnSOD及癌基因Ha-ras的表达和相互关系，并对MnSOD基因进行了克隆、测序分析，为在基因水平寻求前列腺癌有效防治的线索和途径提供了理论...
- 王红钢
- 关键词：前列腺癌病理细胞学
- 文献传递
- 前列腺癌组织中SOD_2的cDNA克隆及其序列分析
- 2009年
- 目的构建前列腺癌组织中SOD2的cDNA克隆,并进行序列分析。方法从人前列腺癌组织细胞中提取总RNA并逆转录成cD-NA,PCR扩增cDNA片段,将cDNA克隆入载体pGEM-T中构建T-A克隆,对阳性克隆进行序列测定分析。结果在1例前列腺癌组织标本中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt T→G颠换和373ntG→T颠换。蛋白序列比较分析显示:对应SOD2编码蛋白的第89位氨基酸由亮氨酸变为精氨酸。结论SOD2基因突变在前列腺癌的发生中可能起重要作用。
- 王明臣王好东张善锋王红钢臧明玺赵国强
- 关键词：锰超氧化物歧化酶逆转录分子克隆
- 前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测
- 2005年
- 目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达。方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况。结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均<0.01)。Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P<0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均<0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件。
- 王明臣唐琳赵国强赵勤王红钢董子明
- 关键词：前列腺癌DNA聚合酶ΒPTEN
- 前列腺癌与增生组织中MnSOD基因片段的克隆分析
- 2007年
- 目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中MnSOD基因的突变情况。方法:用RT-PCR的方法分别检测30例Pca组织中和20例BPH组织中SOD2基因片段的突变情况。结果:在6例前列腺癌组织标本和4例良性前列腺增生(BPH)组织中发现SOD2基因的点突变位点,其中前列腺癌组织标本(P3)中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt G---T颠换和373nt T---G颠换。结论:MnSOD基因的突变在前列腺癌的发生和发展过程中可能具有重要意义。
- 王红钢刘彬石渊渊汪文利张维娟
- 关键词：前列腺癌锰超氧化物歧化酶克隆
