王珍珍
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：徐州医学院基础学院神经生物学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省青年科技基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 中国荷斯坦牛Toll样受体4基因的遗传多态性与体细胞评分的关联分析被引量：8
- 2013年
- 试验旨在研究中国荷斯坦牛Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因的遗传多态性及其与体细胞评分(somatic cell score,SCS)的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种。利用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛TLR4基因进行多态性检测,用最小二乘均数法对TLR4基因的多态位点与SCS进行相关分析。结果发现,试验共检测到2个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs),TLR4基因5′侧翼区存在SNP-226G>C突变,经PCR-RFLP检测发现3种基因型:GG、GC和CC,基因型频率分别为0.208、0.482和0.310;外显子3存在SNP 1760C>T突变,经PCR-SSCP检测发现3种基因型:CC、TC和TT,基因型频率分别为0.738、0.225和0.007,以上2位点均偏离Hardy-Weinberg平衡。对于SNP-226G>C位点,基因型个体的SCS差异不显著;对于SNP 1760C>T位点,CC基因型个体的SCS最小二乘均值极显著低于TT和TC基因型个体(P<0.01)。SNP 1760C>T的CC基因型对于中国荷斯坦牛的SCS有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于奶牛乳房炎抗性筛选。
- 陈仁金王珍珍杨章平朱孝荣冀德君毛永江
- 关键词：中国荷斯坦牛体细胞评分
- 中国荷斯坦牛IL8基因SNP-233(G>A)不同基因型的表达差异研究
- 2013年
- [目的]本研究旨在研究中国荷斯坦牛IL8基因-233(G>A)位点不同基因的表达差异水平,为探讨该位点在抗奶牛乳房炎作用提供理论依据。[方法]本试验运用SYBR Green实时荧光定量PCR技术进行定量测定。[结果]GG基因型个体mRNA的表达量显示高于GA和AA基因型个体的表达量。[结论]IL8基因-233(G>A)位点对中国荷斯坦牛乳房炎抗性有一定影响,可用于中国荷斯坦牛的抗乳房炎的分子标记辅助选择。
- 陈仁金王珍珍杨章平毛永江冀德君朱孝荣
- 关键词：中国荷斯坦牛基因型实时PCR
- 针对HO-2基因的四种RNA干扰序列构建和效应观察
- 2015年
- 目的:构建和筛选出血红素氧合酶-2(HO-2)基因的RNA干扰载体,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。方法:根据小鼠HO-2基因的c DNA序列设计了4个HO-2基因干扰序列,克隆到干扰载体p GPU6-GFP-Neo上,利用电穿孔法将干扰载体对小鼠脑血管内皮细胞进行转染。Real-time PCR和Western Blot检测小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达。结果:干扰载体显著抑制小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达,其中干扰载体p GPU6-GFP-Neo-HO-2-mus-768对HO-2 mRNA的表达抑制达显著水平(P<0.01),蛋白的表达抑制达显著水平(P<0.05)。结论:成功构建并筛选了HO-2表达干扰载体,为下一步的HO-2基因的功能鉴定奠定了基础。
- 王珍珍张腾业陈仁金袁红花胡安康吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：RNA干扰载体基因表达
- 中国荷斯坦牛乳铁蛋白基因外显子1多态性与泌乳性状及体细胞评分的关联分析被引量：5
- 2013年
- 利用PCR-SSCP技术对中国荷斯坦牛的乳铁蛋白(lactoferrin,LF)基因外显子1的遗传多态性进行了检测,利用最小二乘均数对LF基因外显子1多态位点与测定日产奶量、测定日乳脂率、测定日乳蛋白率和305 d校正产奶量及测定日体细胞评分5个性状进行了关联分析。结果显示:外显子1存在133 G>C突变,共检测到了3种基因型GG、GC和CC,频率分别为0.571、0.129和0.300。该突变位点对测定日产奶量影响达到极显著水平(P<0.01),对体细胞评分(SCS)的影响达到显著水平(P<0.05)。多重比较发现,GG型测定日产奶量极显著高于CC型(P<0.01),SCS显著高于GG型和CC型(P<0.05)。因此,LF基因的133 G>C位点的GG基因型为乳房炎抗性的优良基因型,可作为分子标记应用于中国荷斯坦牛乳房炎抗性筛选。
- 陈仁金王珍珍毛永江冀德君朱孝荣杨章平
- 关键词：中国荷斯坦牛乳房性状体细胞评分
- 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体构建
- 为了构建牛皮蝇的皮蝇A (hyderminA,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA序列的上游加一...
- 陈仁金胡安康王珍珍袁红花张腾业吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：真核表达载体HA基因基因表达
- HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定
- 2013年
- 利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究。根据GenBank中报道的皮蝇素A(Hydermin A,HA)一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91.2%、目的多肽分子量为28kD。将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体。采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28kD,与预测分子量相符。该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具。
- 袁红花王珍珍陈仁金胡安康张腾业吴连连冀德君朱孝荣
- 关键词：HA多肽多克隆抗体
- 血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建
- 2014年
- 为构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高(P<0.01),在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高(P<0.05)。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。
- 张腾业王珍珍陈仁金袁红花胡安康吴连连朱裕华冀德君朱孝荣
- 关键词：真核表达载体基因表达
- 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体的构建
- 2014年
- 为了构建牛皮蝇的皮蝇素A(hypodermin A,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1α-HAAcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA基因序列的上游加1段信号肽序列;通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP中,得到分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP;再利用脂质体法转染Cos7细胞,并以RT-PCR和Western-blot技术在RNA和蛋白水平上检测HA基因是否在Cos7细胞中表达。结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功;转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上能检测到HA基因的表达。说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体PEF1α-HA-AcGFP。
- 陈仁金胡安康王珍珍袁红花张腾业吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：牛皮蝇宿主真核表达载体HA基因基因表达
- HO-2基因真核表达载体的构建与鉴定
- 构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1 α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况.利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将HO-2基...
- 张腾业王珍珍陈仁金袁红花胡安康吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：脑血管内皮细胞血红素氧合酶-2真核表达载体基因序列
