王献伟
- 作品数：13 被引量：28H指数：3
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院动物繁殖研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项广西大学科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择
- 2012年
- 本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的(1.1%∶12.1%,P<0.05),而融合率(83.7%∶79.4%,P>0.05)和卵裂率(55.8%∶58.2%,P>0.05)无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎(43.7%∶89.8%,P<0.05),但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著(85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P>0.05)。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。
- 刘红波吕培茹王献伟杨小淦秦小娥宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：水牛人神经母细胞瘤细胞异种核移植
- 广西巴马小型猪成纤维细胞体外培养体系的建立被引量：3
- 2011年
- 为建立广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞体外培养体系,以新生巴马小型猪为试验材料,使用微量液体组织块贴壁法原代培养分离几种成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;根据细胞的形态、生长特性等观察其体外生长能力和增殖寿命。结果显示,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞获得成功分离,体外可以传代和冷冻;冷冻复苏后仍可以正常培养和传代;腹部成纤维细胞免疫荧光检测结果显示波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性。研究成果可为显微操作核移植、手工核移植和转基因相关操作等提供不同类型的供体材料。
- 王献伟卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪成纤维细胞细胞体外培养
- 转红色荧光蛋白基因细胞非侵入式人工智能检测与预测体系的建立
- 本研究利用激光光镊拉曼光谱结合基于主成分分析的BP人工神经网络(feed-forward backpropagation network)对新生巴马小型猪肾脏转红色荧光蛋白成纤维细胞进行了光谱分析、模式识别和预测。本实验...
- 刘红波杨小淦吕培茹左二伟王献伟胡林林宁淑芳陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：转基因红色荧光蛋白主成分分析BP人工神经网络
- 文献传递
- 广西巴马小型猪附睾成纤维细胞的分离培养和鉴定被引量：2
- 2010年
- 为了建立广西巴马小型猪附睾成纤维细胞体外培养体系,利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离附睾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏,并通过接触抑制和解除抑制研究细胞的增殖能力,以及通过免疫荧光对其进行鉴定。结果表明,该法成功分离获得广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,并可以大量传代和冷冻,目前已经传至55代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性。可见,通过微量液体组织块贴壁法能成功分离得到广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,在体外能稳定培养和传代。
- 王献伟王宪梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪附睾成纤维细胞
- 稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响被引量：13
- 2010年
- 为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例(20%、25%、30%)的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率(VAP)、轨迹速率(VCL)、直线运动速率(VSL)等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异(P>0.05)。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%(v/v)为宜。
- 胡传活孙艳艳胡传水王献伟李林郭堂玉卢克焕
- 关键词：精液卵黄冷冻保存
- 一种非冷冻长期保存细胞的方法
- 本发明公开了一种非冷冻长期保存细胞的方法。该方法的操作步骤包括：1)原代培养；2)传代培养；3)非冷冻长期细胞保存-接触抑制。本发明的有益效果是：使用本发明方法相对常规液氮罐保存细胞成本更低、污染更少、操作简便可靠。特别...
- 卢晟盛卢克焕王献伟
- 文献传递
- 新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞体外培养体系的建立被引量：3
- 2011年
- 利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;通过接触抑制和解除抑制研究该类细胞的增殖潜力,免疫荧光进行鉴定;并通过脂质体介导对分离到的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞分别进行EGFP-N1和DsRed-N1基因转染。结果成功分离到新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,体外可以大量传代和冷冻,目前已经传至50代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性;转染48h后荧光显微镜下可以观察到绿色荧光和红色荧光,表明瞬时转染新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞可以获得成功,其中转染DsRed-N1基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞已经传至60代以上。结果表明,本试验成功建立了新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞的体外培养体系,在体外能稳定培养和传代,并可以成功获得转基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞。
- 王献伟卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪肾成纤维细胞细胞培养
- 广西巴马小型猪体细胞核移植体系的建立被引量：3
- 2011年
- 通过建立广西巴马小型猪体细胞核移植培养体系,为后续转基因克隆猪生产及其相关研究提供最佳条件。试验探讨了盲吸法对猪卵母细胞的去核效率;利用分离到的广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,探讨6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和细胞松弛素B(CB)对其后续胚胎发育的影响;利用分离到的广西巴马小型猪腹部成纤维作供体,探讨其对核移植胚胎的发育效率。结果表明:猪卵母细胞盲吸法去核的效率为73.75%;广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,6-DMAP和CB对其后续胚胎发育没有显著差异(分裂率和囊胚率分别为:89.89%and 6.74%vs.82.95%and 5.68%,P>0.05);腹部成纤维细胞作供体,重构胚胎的融合率、分裂率和囊胚率分别为55.40%、67.53%和6.49%。采用盲吸法可以对体外成熟猪卵母细胞成功去核,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞和附睾成纤维细胞均可作供体成功构建体细胞核移植胚胎,并可以发育到囊胚。
- 王献伟卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪体细胞核
- 猪精液冷冻保存程序的优化被引量：7
- 2011年
- 研究共4个试验:①按入氮温度分为-5、-30、-60、-90、-120℃5个组;②按鲜精液预处理方式分为未预稀释和预稀释2个组;③按解冻温度设37、50、70℃3个组;④按稀释后精子密度分为1.25×108、2.50×108、5.00×108spz/mL 3个组。结果表明:①不同入氮温度下精子冻后活力差异不显著,但随着入氮温度的降低,精子冻后活力呈升高趋势;②预稀释不能显著提高平衡后精子活力,但可以显著或极显著提高精子稀释后活力、冻后活力、VAP、VSL及VCL等运动指标;③3种解冻温度在精子冻后活力、VAP、VSL、VCL等4个冻后运动指标上没有显著差异,但是,随着解冻温度的上升,冻后活力呈上升趋势;④3种稀释后精子密度在猪精子冻后活力、VAP、VSL上没有显著差异,但随着密度的上升,冻后精子活力及VAP呈下降趋势,而且最高密度组精子的VCL显著慢于其它两组。总之,5种入氮温度中,以-120℃组精子的冻后活力最高;预稀释对于新鲜猪精液的冷冻保存很有必要;3种解冻温度中,70℃组精子冻后活力最高;而高密度不利于猪精子的冷冻保存。
- 胡传活王献伟胡传水凌泽继卢晟盛卢克焕
- 关键词：精液冷冻保存
- 广西巴马小型猪转红色荧光蛋白克隆胚胎体内外发育潜能测定
- 猪转基因体细胞克隆技术在异种器官移植、构建疾病模型、改进生产性状等方面有广泛的用途。本研究旨在建立巴马小型猪转基因体细胞克隆技术体系。体外培养新生巴马小型猪的肾脏成纤维细胞,利用脂质体法获得转绿色和红色荧光蛋白的转基因细...
- 刘红波吕培茹王献伟杨小淦胡林林宁淑芳陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪红色荧光蛋白
- 文献传递
