游园
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 检测坦布苏病毒病抗体 NS1-ELISA方法的建立与初步应用被引量：8
- 2014年
- 为建立快速检测鸭坦布苏病毒病抗体的血清学方法,本研究利用鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列将其克隆至原核表达载体pET32a上,建立重组表达pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中。经IPTG诱导得到NS1融合蛋白,融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性,纯化的坦布苏病毒NS1蛋白作为包被抗原,在最佳检测条件基础上,建立了检测坦布苏病毒病(Tembusu virus disease,简称TVD)抗体的间接ELISA方法。结果在条件优化后抗原最适包被量为1.925μg·孔-1,抗原最佳包被条件为37℃放置1 h后4℃过夜,血清的最佳稀释度为1∶200,最佳封闭时间为1 h,酶标二抗最适稀释度为1∶1 000,显色时间10 min。阴阳性临界值判定标准为0.346。用建立的间接ELISA方法检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎、TVD阳性血清样品均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。板内和板间重复试验的最大变异系数分别为6.7%和8.2%,显示该方法具有很好的稳定性。用间接NS1-ELISA方法对81份疑似鸭坦布苏病毒病血清样品进行检测,有43份样品呈现阳性,E-ELISA有48份呈阳性结果,证明该方法具有较高的敏感性。NS1-ELISA方法的建立为TVB的诊断和流行病学调查提供了一种新的方法。
- 谢星星李祥瑞李银赵冬敏黄欣梅韩凯凯刘宇卓游园
- 关键词：NS1蛋白间接ELISA抗体
- 苏、鲁、川地区禽坦布苏病毒病的流行情况调查及三重抗体ELISA方法的建立
- 为了解坦布苏病毒病在我国家禽类中的流行情况，应用间接ELISA方法对江苏、山东、四川的鸭、鸡和鹅进行了抗坦布苏病毒抗体测定，并对可疑病例的病料进行了病毒分离。2012年5月至2013年1月江苏省抗体阳性率为78.5％(1...
- 游园
- 关键词：ELISA法抗体检测
- 文献传递
- 鹅新型坦布苏病毒囊膜蛋白的二级结构与B细胞表位预测被引量：2
- 2014年
- 以鹅坦布苏病毒（ goose Tembusu virus ， GTMUV ）的囊膜蛋白基因序列为基础，采用 Chou -Fasman 法、Garnier-Robson法和Karplus-Schulz法预测蛋白质的二级结构，采用Kyte -Doolittle 方案、Emini 方案和Jameson -Wolf方案预测鹅坦布苏病毒囊膜蛋白的B细胞表位。结果表明，鹅坦布苏病毒囊膜蛋白肽链的35～41、80～89、148～159、245～251、314～320、392～402和475～482区段为预测的B细胞表位优势区。综合研究结果，利用多参数方案综合预测E蛋白的B细胞抗原表位为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础。
- 韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓谢星星游园
- 关键词：囊膜蛋白B细胞表位
- 鹅新型坦布苏病毒囊膜蛋白的二级机构与及其B细胞表位预测
- 本研究以鹅坦布苏病毒(goose Tembusu virus,GTMUV)囊膜蛋白(Envelope,E)基因序列为基础,采用Garnier_Robson 方法、Chou_Farplus 方法和Karplus_Schul...
- 韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓谢星星游园
- 禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验被引量：2
- 2012年
- 采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。
- 张敬峰李银韩凯凯刘宇卓赵冬敏黄欣梅游园周小波谢星星
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌H9亚型禽流感灭活疫苗
- 鹅源坦布苏病毒 RT-LAMP快速检测方法的建立被引量：8
- 2014年
- 坦布苏病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。根据GenBank中登录的鹅源坦布苏病毒NS5基因序列,利用Primer Explorer V4软件在序列保守区域设计1套特异识别NS5基因序列中6个不同区段的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物,并以此套引物建立一种基于LAMP技术的鹅源坦布苏病毒检测方法。结果表明,该方法灵敏度极高,是普通PCR方法的100倍,只能特异性扩增坦布苏病毒的RNA,对于其他常见禽RNA病毒均无特异性扩增。在反应体系中加入SYBR GreenⅠ染料后,通过肉眼观察有无绿色荧光可直接判定结果。该方法特异性强,灵敏度高,无需特殊仪器,简便,快速,适用于鹅源坦布苏病毒的临床快速检测。
- 韩凯凯李银黄欣梅赵冬敏刘宇卓谢星星游园
- 关键词：环介导等温扩增
