温博海
- 作品数：161 被引量：330H指数：13
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 贝氏柯克斯体新桥株激活人树突状细胞的表型分析
- 目的意义：树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体新桥株(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多...
- 王颖吴德平王锡乐尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞单核细胞流式细胞分析
- 结核分枝杆菌随机扩增多态性DNA指纹分型技术及应用研究被引量：13
- 2002年
- 目的 探讨重庆地区结核病分子流行病学的发展趋势。方法 建立随机扩增多态性DNA聚丙酰胺凝胶电泳 (RAPD PAGE)指纹分型法 ;采用 1对随机引物对重庆地区 2 87例肺结核患者41 6株结核分枝杆菌进行DNA指纹分型。结果 41 6株分离菌株其DNA指纹可分为 7种类型 ,以Ⅰ型 (35 .5 % )、Ⅱ型 (2 9 3 % )和Ⅲ型 (2 2 .6 % )为主 ,其中 2 0～ 39岁和 40～ 49岁年龄组的初治患者在 3型中分别占 58.0 %和 46 .2 %。在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中初治患者分别占 52 .0 %、46 .4%和 58.5 % ,至少耐利福平和异烟肼 (MDR)的初治患者又分别占的 1 1 .3 %、35 .9%和 2 4 .3 % ,至少耐利福平和其他药物的多重耐药株在 3型中占 2 1 .7% (初治 )。结论 RAPD PAGE指纹分型法 ,是一种简便、特异、敏感、重复性好的菌株分型方法 ,可用于结核病分子流行学的研究 ;以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型为主的结核分枝杆菌正在重庆及周边地区的人群中传播 ;
- 钟敏王安容钟明娄乐山温博海陈炜陈荣蹇锐
- 关键词：结核分支杆菌DNA指纹法随机扩增多态性结核病
- 实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体被引量：3
- 2007年
- 目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法，对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析，并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．997）；与普通PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，除军团菌检出微弱信号（2个拷贝）外，其余检出结果均为0；对重复性进行了评价，批内和批间的变异系数在0．2％～1．9％之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本，在感染后第2天、第3天、第5天，检出少量的汉赛巴通体，在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性，可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。
- 张晶波温博海陈梅玲李丽莉邱玲牛东升
- 关键词：实时定量PCR
- 蛋白Com1在对贝氏柯克斯体的免疫保护中的应用
- 本发明公开了蛋白Com1在对贝氏柯克斯体的免疫保护中的应用。该应用为SEQ ID NO：1所示蛋白在制备Q热疫苗中的应用。本发明证明贝氏柯克斯体重组膜蛋白Com1可以作为一种抗原蛋白，能够刺激机体产生免疫应答对抗贝氏柯克...
- 熊小路温博海王锡乐
- 文献传递
- Q热立克次体中国株的16S-23SrDNA间区序列分析被引量：3
- 2001年
- 用PCR扩增了 7株中国分离株 (七医、新桥、雅安、李、YS 8、YS 9和YH 1 1 )和2株国际参考株 (Henzerling和Grita)的 1 6S 2 3SrDNA基因间区 ,对扩增产物进行了序列分析。结果发现它们仅在少数几个碱基位上有不同。在第 6 0位上 3个云南分离株YS 8、YS 9、YH 1 1和Grita株与Stein等报道的序列 (包括九里、其它国际参考株和一些法国临床分离株 )的碱基序列一致 ,为“C” ;其他 5株为“A” ,此位点的不同可能与适应不同的地理环境相关。另外 ,YS 9株在第 8和 2 0 8位、新桥株在第 43 2位也分别出现缺失 ,可能与适应不同的动物宿主或在实验室传代情况不同有关。
- 胡廷徽温博海万泽生俞树荣张雪
- 关键词：贝氏柯克斯体16S-23SQ热立克次体
- 查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达被引量：1
- 2001年
- 目的 构建查菲埃立克体特异性表面抗原 Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在 Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法 依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）。结果 从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的 Ｅ．ｃｏｌｉ在 ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的 ２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论 查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。
- 蹇锐温博海
- 关键词：表面抗原病原体克隆埃立克体病
- 随机扩增DNA指纹分型分析耐利福平结核分支杆菌的传播
- 2001年
- 目的 对临床分离菌株进行鉴定，分析耐利福平结核分支杆菌是否在人群中传播。方法 采用一对随机引物（Ｐ１５’－ＣＣＧＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣ；Ｐ２ ５’－ＣＣＧＣＣＣＡＣＣＧＡＣ），对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的１００株耐利福平结核分支杆菌的 ＤＮＡ进行随机ＰＣＲ扩增，根据扩增产物的ＤＮＡ电泳指纹进行分型。结果１００株耐利福平结核分枝杆菌的ＤＮＡ指纹可分为６种类型，以Ⅱ、Ⅰ和Ⅲ型为主，它们分别占４０％、３１％和２５％；这３型菌株有１／４是从初治结核病人的痰标本中分离，而在２０－３９岁年龄段则有１／３是从初治结核病人的痰标本中分离。结论 随机扩增ＤＮＡ指纹是一种简便、敏感、重复性好的菌株分型方法，可用于耐药性结核病流行监测。重庆地区结核病的流行很可能与耐利福平结核分支杆菌的传播有关。
- 陈炜钟敏温博海陈荣钟明娄乐山王安容蹇锐
- 关键词：结核分支杆菌利福平耐药DNA指纹结核病
- 用16SrRNA基因序列分析从西藏的微小牛蜱中检出的埃立克体被引量：13
- 2003年
- 用埃立克体属特异性套式PCR和DNA序列测定从西藏微小牛蜱检出边缘无形体和埃立克体 ;用半套式PCR扩得该埃立克体的 16SrRNA基因 ,并测定了它的序列 ;将该埃立克体的 16SrRNA基因序列与其它埃立克体的 16SrRNA基因序列进行对比分析 ,结果证明它的 16SrRNA基因与埃立克体属的犬埃立克体群 16SrRNA基因相似水平最高 (97%～ 98% ) ;用 16SrRNA基因序列做系统发育分析 。
- 温博海蹇锐张有植
- 关键词：基因序列分析埃立克体系统发育分析
- 一种用于诊断或辅助诊断远东斑点热病的蛋白组合物
- 本发明公开了一种用于诊断或辅助诊断远东斑点热病的蛋白组合物。本发明提供了提供的蛋白组合物，由如下5种蛋白组成：RplA蛋白、RplY蛋白、OmpA蛋白、OmpB蛋白和GroEL蛋白；本发明的实验证明，本发明发现了由5种蛋...
- 齐永温博海王锡乐熊小路段长松李佳明贾引军龚文平焦俊
- 检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究被引量：16
- 2002年
- 目的 建立聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法 ,并评价其临床应用的价值。方法 依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物 ,用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段 ;对扩得的rpoB基因片段做DNASSCP分析 ,并随机测定rpoB片段的序列。结果 PCR从所有 2 12株结核分枝杆菌中均扩得 2 3 0bp片段 ,13 5份抗酸染色阳性的痰标本中 ,有 113份扩得阳性片段 ( 83 .7% )。在SSCP分析中 ,14 0份经L J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌 ,有 13 0份有rpoB基因突变 (符合率为 92 .9% ) ,72份经L J药敏试验检测为利福平敏感的菌 ,有 67份的rpoB基因无突变 (符合率为 93 .1% )。测序分析发现 5 7份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变 ,10份经SSCP分析为无突变的有 8份无序列改变 ,SSCP与测序结果的符合率为 94 .0 %。在本研究的菌株中 ,耐多药结核病 (MDR TB)占 76.4 % ( 10 7/14 0 ) ,有 92 .5 % ( 99/ 10 7)耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论 建立的PCR SSCP分析方法 ,是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法 ,可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性 ,并可作为MDR
- 钟敏温博海陈荣王安容蹇锐王易伟
- 关键词：结核分枝杆菌利福平聚合酶链反应RPOB基因PCR-SSCP
