沈文涛
- 作品数：159 被引量：436H指数：10
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 番木瓜不同性别基因表达cDNA-AFLP分析被引量：2
- 2009年
- 在番木瓜幼苗期,利用cDNA-AFLP技术鉴定植株性别并分析不同植株性别基因表达的差异;通过对差异表达基因进行序列和功能分析,探讨调控番木瓜性别分化的分子机理。结果表明,每次反应扩增获得的稳定条带总数为25～75条,番木瓜3种植株性别基因表达存在明显差异,每种性别植株都有特异性条带,其中雄性株14条、雌性株13条、两性株9条。将获得的部分差异TDFs序列与GenBank数据库中的所有序列进行Blastx和Blastn比对,其中一部分差异片段为未知功能基因序列,另一部分差异片段序列与谷胱甘肽转移酶基因、植物甾醇类激素合成相关基因、分裂原活化蛋白酶基因、与端粒相连的核酸序列、杨树叶中克隆的未知功能基因及拟南芥花和花蕾中克隆的未知功能基因等具有较高的同源性。因此,cDNA-AFLP技术可在幼苗期鉴定番木瓜的植株性别,不同番木瓜植株性别基因的差异表达可能是其植物体一系列功能基因调控植株性别发育及生长发育的综合反应。
- 李亚丽沈文涛熊建平周鹏
- 关键词：番木瓜多重PCR基因差异表达
- 番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析被引量：3
- 2007年
- 从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%～93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%～89.1%。P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%～80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高。运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性。
- 卢雅薇沈文涛唐清杰牛艳梅周鹏
- 关键词：番木瓜环斑病毒全基因组同源性系统进化树
- 甘薯羽状斑驳病毒海南分离物全基因组序列克隆及分析被引量：1
- 2020年
- 为了明确海南本地甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)种群的遗传进化关系及致病机理,本研究利用Small RNA测序技术对采自海南的甘薯样品进行鉴定,获得与SPFMV序列具有相似性的85个contigs,与NC_001841相似性较高。试验设计了5对共8条引物,分别为SPFMV-1F/1R、SPFMV-11F/1R、SPFMV-2F/2R、SPFMV-3F/3R和SPFMV-3F/33R PCR,扩增获得3987 bp、3710 bp、1996 bp、3369 bp和4730 bp目的片段。在此基础上再分段设计引物,进行基因全序列PCR扩增,序列拼接获得SPFMV-HN基因组全序列,其包含完整编码阅读框。本研究结果首次报道SPFMV海南分离物基因组全长,并且在P1区预测到另一个外框元件(pretty interesting sweet potato potyviral ORF,PISPO),聚合酶滑移机制可以产生带有额外核苷酸的转录变体,这些核苷酸可以翻译为P1N-PISPO和P3N-PIPO。本研究结果为进一步探究SPFMV致病分子机理和培育抗病甘薯品种奠定研究基础。
- 李嘉莹沈文涛庹德财朱国鹏黎小瑛言普周鹏
- 关键词：甘薯羽状斑驳病毒SMALL
- 番木瓜畸形花叶病毒hc-pro基因保守基序FRNK点突变对病症表现的影响被引量：1
- 2018年
- 为研究番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)hc-pro基因保守基序FRNK对病症表现的影响,本研究采用定点突变的方法,获得了PLDMV-DF的hc-pro基因保守基序FRNK的精氨酸(R)突变为异亮氨酸(I)的突变体克隆p35SPLDMV-GFP-R_(183)/I,该位点突变显著减轻了PLDMV在番木瓜上的病症表现,表明是影响其致病性的关键位点。本研究结果为利用交叉保护防控番木瓜畸形花叶病毒病提供了重要参考和材料。
- 谭东庹德财沈文涛言普黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜侵染性克隆症状表现
- 利用酵母同源重组系统快速构建potyvirus病毒侵染性克隆方法
- 前一个时期,虽然分子生物学技术有了相当大的进步,但在构建基因全长较大的RNA病毒时,例如马铃薯Y病毒属全长侵染性cDNA克隆或者是RNA体外转录物时,会遇到很大的困难,其cDNA转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞时,...
- 赵光远庹德财沈文涛黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜环斑病毒马铃薯Y病毒属侵染性克隆
- 文献传递
- DNA分子克隆方法
- 本发明涉及一种DNA分子克隆方法，其包括：获得含有ccdB基因的目标载体，所述ccdB基因两端带有SfiI酶切位点、第一接头序列及第二接头序列，所述接头序列为15‑30bp，所述接头序列在SfiI酶切位点外围；获得目标基...
- 言普周鹏沈文涛黎小瑛
- 文献传递
- 番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建被引量：2
- 2011年
- 重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。
- 陈瑶沈文涛言普黎小瑛周鹏
- 关键词：DSRNARNA沉默原核表达载体
- 三种复合侵染‘心香’甘薯的病毒种类鉴定与分析被引量：3
- 2022年
- ‘心香’是中国选育的一种优质鲜食早熟甘薯品种。利用小RNA深度测序技术和RT-PCR方法,对采集于海南省东方市1例表现为明显花叶斑驳及叶严重卷曲皱缩症状的‘心香’甘薯叶片进行感染病毒种类鉴定,发现样本中含有马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯病毒C(sweet potato virus C,SPVC)和乙型线形病毒科(Betaflexiviridae)、麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)甘薯褪绿斑病毒(sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV)。进一步基于病毒CP基因全长进化树分析结果表明,这3种病毒分离物分属于SPFMV RC株系、SPVCII株系和SPCFV非洲-秘鲁株系组。本研究鉴定出的复合侵染‘心香’甘薯的这三种病毒,将为该品种的病毒防控及脱毒种苗繁育提供理论基础。
- 王赫沈文涛庹德财杨秀坤言普黎小瑛朱国鹏周鹏
- 关键词：复合侵染
- 一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA
- 为了研究番木瓜环斑病病毒海南分离物(PRSV HN-2)的全部核苷酸序列，应用植物总RNA提取试剂盒获得了高纯度的总RNA，使用Oligo dT-Adaptor和Random9引物合成了cDNA的第一链，基于已报道的PR...
- 庹德财沈文涛高乐言普鹏
- 关键词：基因组基因克隆分离物
- 文献传递
- 利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况被引量：1
- 2015年
- 利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,Pa MV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体p ET-28a上,获得重组质粒p ET28-PRSV-CP、p ET28-PLDMV-CP和p ET28-Pa MV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,Pa MV CP以可溶蛋白形式存在。利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体。Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应。再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA(Indirect enzymelinked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据。
- 杨勇庹德财沈文涛言普黎小瑛周鹏王锐萍
- 关键词：外壳蛋白抗血清
