李青
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- Rab32及其相互作用蛋白的鉴定分析
- 树突状细胞/(dendritic cells,DC/)是主要的一种抗原递呈细胞,目前认为DC细胞抗原递呈的方式有三种:一种是DC细胞吞噬外来抗原,并加工处理形成表位肽,与MHCⅡ类分子结合,从而激活CD4+T细胞;另外一...
- 李青
- 关键词：抗原递呈细胞树突状细胞
- 文献传递
- 应用Profinity eXact标签在真核表达系统中纯化EGFP蛋白被引量：1
- 2011年
- 目的研究Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中的纯化效果。方法通过PCR扩增Profinity eXact标签,构建中间载体pUC18ETagEGFP,构建Profinity eXact标签绿色荧光蛋白真核表达载体FUETagEGFP,采用DNA-磷酸钙方法转染293FT细胞,收集过量表达Profinity eXact标签绿色荧光蛋白的细胞,随后提取蛋白进行纯化,采用荧光检测EGFP蛋白结合、纯化效率,最后利用SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果经PCR扩增、酶切和测序,Profinity eXact标签、中间载体pUC18ETagEGFP、Profinity eXact标签真核表达载体构建正确,经荧光显微镜镜下观察Profinity eXact标签真核表达载体转染293FT细胞效果良好,经荧光检测确定EGFP蛋白结合、纯化效率,经SDS-PAGE发现Profinity eXact标签在真核蛋白系统中纯化效果良好。结论 Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中能正常工作,并有较好的纯化效果。
- 李青张强邹丽云吴玉章万瑛
- 关键词：真核表达TAG
- 外源性IL-3cDNA导入骨髓基质细胞及对造血的调控作用
- 2001年
- 目的 探索将外源性ＩＬ－３ｃＤＮＡ导入骨髓基质细胞的可能性。方法 将小鼠ＩＬ－３ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体（ｐＬＸ－ＳＮ）上，然后将重组的ＩＬ－３ ｃＤＮＡ用脂质体转染到包装细胞ＰＡ３１７上，Ｇ４１８筛选后得到抗性克隆，将含病毒的上清液转染骨髓基质细胞。用自行设计的引物，检测ｐＬＸＳＮ上的ＮｅｏＲ基因及转入的ＩＬ－３基因。同时观察了转染ｐＬＸＳＮ／ＩＬ－３的基质细胞培养上清液对小鼠骨髓 ＣＦＵ－ＧＭ形成的影响，并测定其对造血因子依赖株 ＮＦＳ－６０细胞增殖活性的影响。结果 将含重组子 ｐＬＸＳＮ－ＩＬ－３和空载体ｐＬＸＳＮ的病毒培养上清感染 ＢＭＳ，前者用 ＰＣＲ扩增出５００ ｂｐ和１７０ ｂｐ（ＮｅｏＲ）的条带，后者仅扩增出 １７０ ｂｐ。转染ｐＬＸＳＮ／ＩＬ－３的基质细胞上清液有促进小鼠骨髓ＣＦＵ－ＧＭ增殖的作用，与空载体组及未转染组比较，有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论 外源性的ＩＬ－３基因及ｐＬＸＳＮ上的ＮｅｏＲ已整合到骨髓基质细胞基因组ＤＮＡ中，并促进造血细胞增殖。
- 袁良平粟永萍程天民刘林郑华金王延江蒲晓允艾国平刘晓红瞿红云李青
- 关键词：白细胞介素-3基质细胞造血细胞增殖骨髓
- 新型示踪MHC-I类分子方法的建立被引量：3
- 2010年
- 目的采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-I类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-I类分子的优缺点。方法构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTagTMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况。结果通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTagTMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的。结论从结合特异性上来看,Halotag标记MHC I类分子要优于TC-tag。
- 李志海邹丽云熊锐华张晋宇李景怡谢谆怡秦瑶李青赵奇万瑛林治华
- 关键词：绿色荧光蛋白MHC-I类分子TAGHALOTAG
