李雨桐
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性被引量：4
- 2008年
- 目的构建人Cu,Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性。方法根据酵母密码子偏好性,合成人Cu,Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115。甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性。结果经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定。结论在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu,Zn-SOD基因。
- 迟春萍隋红李雨桐薛向光王志武牛灵刘畅王艳芳吴晓娟郭立君盛军李校堃
- 关键词：真核表达毕赤酵母稳定性
- HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果被引量：1
- 2008年
- 目的构建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)与GM-CSF基因的双表达载体,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点处,构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中,检测瞬时表达情况,并用双表达质粒pHIG免疫BALB/c小鼠,检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达,pHIG双表达质粒组比pVAX/HBs组抗体产生时间提前2周,抗体阳转率提高2倍,小鼠脾脏T细胞表面CD4+分子数量及CD4+/CD8+值均高于pVAX/HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答,并可提高免疫效果。
- 冷梅闫刚迟春萍韩顺子吴晓娟赵大鹏汪春义郑全莉李鑫李雨桐张秀霞姜崴
- 关键词：乙型肝炎表面抗原DNA疫苗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子内部核糖体进入位点
- 百日咳毒素S1亚基片段在大肠杆菌中的表达
- 2009年
- 目的构建百日咳毒素(PT)S1亚基片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法根据GenBank中登录的百日咳毒素S1亚基基因序列,人工合成密码子优化的S1基因,利用重叠PCR技术将S1基因上的两段DNA序列拼接在一起,形成一个新的基因序列S1′。将该序列与7ZTS表达载体连接,构建重组原核表达质粒7ZTS-S1′,转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果S1′基因经PCR鉴定及测序证明与预期相符;重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达蛋白的相对分子质量约17400,表达量约占菌体总蛋白的8%,且具有良好的反应原性。结论已成功构建百日咳毒素S1亚基片段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为PT单抗及其检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 时成波曹玉锋张秀霞吴晓娟李雨桐徐光磊尹晓东
- 关键词：百日咳毒素原核表达重叠PCR
- 重组戊型肝炎疫苗的生殖毒性试验
- 2014年
- 目的探讨重组戊型肝炎疫苗对大鼠的生殖毒性。方法将Wistar雌性大鼠分为4组:低剂量组(每只20μg HEV)、高剂量组(每只40μg HEV)、生理盐水对照组及佐剂对照组,每组30只。雌鼠于交配前给药2次,初次给药后2周进行2次给药,2次给药后1周,进行雌雄鼠合笼交配,于妊娠7和14 d进行3、4次给药。每天观察雌鼠一般临床症状;交配前每周称雌鼠体重1次,交配后每周称体重2次,每周定期测定1次摄食量;于妊娠21 d安乐死孕鼠,分离出胎仔,检测疫苗对雌鼠生殖能力、胎仔发育、胎仔骨化程度、胎仔内脏畸形的影响,取孕鼠和胎仔血液,分离血清,ELISA法检测抗HEV Ig G抗体水平。结果各组大鼠精神状态未见异常,皮毛光亮,灵敏,大小便色正成形,注射局部未见充血、肿胀、溃烂、硬结等;疫苗对孕鼠体重、摄食量均无明显影响(P<0.05);各剂量组窝平均着床数、窝平均黄体数、窝平均活胎数、受孕率、活胎率、吸收胎率、死胎率、畸胎率与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);各剂量组胎仔身长、尾长、体重、胎盘重和性别比与生理盐水对照组和佐剂对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);各剂量组胎仔上枕骨的骨化程度均在0级和Ⅰ级正常范围以内,胸骨骨化不全率与生理盐水及佐剂对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组胎仔内脏均未见畸形;孕鼠及胎仔血清中均检测到抗HEV Ig G抗体。结论重组戊型肝炎疫苗对孕鼠及胎仔安全、有效。
- 王甲男曹玉锋陈子杨李雨桐刘玉林
- 关键词：戊型病毒性肝炎疫苗生殖毒性
- 抗卵巢癌相关抗原CA125单抗及其磁酶诊断试剂的制备
- 2014年
- 目的制备卵巢癌相关抗原CA125（cancer antigen 125）磁酶检测试剂,并进行验证及初步应用。方法应用CA125抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,筛选效价高、稳定性分泌抗体的杂交瘤细胞株后,接种小鼠腹腔,收集腹水,制备抗CA125单抗,并对其亚型、特异性、相对亲和力、抗原结合位点及抗原决定簇进行鉴定。通优化反应条件制备CA125抗原磁酶检测试剂,并进行验证后,将其应用于50份女性健康体检者及100份卵巢癌患者血清的检测。结果共获得3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4B6、2G10、1C2;1C2、4B6和2G10单抗的抗体亚型分别为Ig G2a、Ig G1和Ig G1,轻链均为κ链,相对亲和力依次为2G10〉4B6〉1C2,与AFP、CA50、CEA、CA199、CRP、CA242和小牛血清未发生交叉反应,1C2单抗识别位点与2G10和4B6不同,且3株单抗的抗原决定簇均在CA125蛋白部分上。确定该磁酶检测的反应条件为：包被抗体按100μg/ml,37℃包被1 h;20%小牛血清37℃封闭1 h或4℃封闭过夜;酶标抗体最佳反应时间为45 min。当CA125浓度在10~500 U/ml时,与对应的A450值线性关系良好,R2=0.992;该检测试剂最低检测极限约10 U/ml,灵敏度高;与人血清白蛋白、小牛血清、CA50、CEA、AFP、CRP、CA199和CA242均未发生反应,特异性高;于37℃放置4 d的CA125 A450值与2~8℃相比,差异无统计学意义（P〈0.05）;批内及批间变异系数均〈10%,重复性较好;高、中、低3个浓度的CA125抗原的回收率在94.45%~105.21%之间,准确性高。50份健康体检者血清中CA125阳性率为4%,100份卵巢癌患者血清中CA125阳性率为88%。结论已成功制备了卵巢癌相关抗原CA125磁酶检测试剂,该试剂具有应用于卵巢癌患者的诊断价值。
- 李雨桐王甲男韩顺子于爱东吴业红张秀霞
- 关键词：CA125抗原单克隆抗体磁珠
- 毕赤酵母表达铜锌超氧化物歧化酶中试工艺研究被引量：3
- 2012年
- 正交设计优化铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母在摇瓶及30L发酵罐的诱导表达条件,用两步层析法纯化表达的目的蛋白,在不同温度下进行原液稳定性试验。用考马斯亮蓝检测蛋白含量,活性检测试剂盒检测目的蛋白活性。纯化后原液参照中华人民共和国药典三部2005版进行检测,用SDS-PAGE、HPLC检测纯度,免疫印迹法检测rhCu,Zn-SOD特异性,等点聚焦测定该酶等电点,地高辛法检测残余DNA含量,酶联免疫法测定残余蛋白含量。结果显示正交试验的大罐高密度发酵最适条件比摇瓶的最适条所获得的目的蛋白活性高8倍,纯化后,HPLC纯度为99.7%,原液比活性大于6.0×103 U/mg,各项检测指标达到生物制品检定标准。该酶在45、65、85、100℃的半衰期分别为240、120、30、15。具有良好的酶稳定性。本研究建立了发酵、纯化的中试工艺,获得高表达、高纯度及高比活的铜锌超氧化物歧化酶,为规模化生产奠定了基础。
- 迟春萍陈子杨徐军时成波曹玉峰李铮贾媛李雨桐郭立君田海山王小杰孙彪翟东冀长发李校堃
- 关键词：铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母高密度发酵纯化
- 脂质体对HBV DNA疫苗免疫效果的影响
- 目的：将脂质体作为乙肝病毒DNA疫苗的载体和佐剂，对其免疫效果进行观察。
方法：将乙肝病毒DNA疫苗pVAX/HBS用脂质体梭华-SoftastnTM包裹后肌肉注射BALB/c小鼠的后侧肢，定期对小鼠眼眶静脉丛...
- 吴晓娟赵大鹏张岩李雨桐于爱东张秀霞韩顺子时成波
- 关键词：脂质体DNA疫苗免疫效果乙肝病毒
- 文献传递
- 脂质体对HBV DNA疫苗免疫效果的影响
- 目的：将脂质体作为乙肝病毒DNA疫苗的载体和佐剂，对其免疫效果进行观察。
方法：将乙肝病毒DNA疫苗pVAX/HBS用脂质体梭华-SoftastTM包裹后肌肉注射BALB/c小鼠的后侧肢，定期对小鼠眼眶静脉丛采...
- 吴晓娟赵大鹏张岩李雨桐于爱东张秀霞韩顺子时成波
- 关键词：乙肝病毒DNA疫苗疫苗佐剂免疫效果
- 文献传递
