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李玉奎: 作品数：32 被引量：48H指数：4; 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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人结直肠肿瘤干细胞的分离培养与生物学特性: 2014年; 目的从人结直肠肿瘤细胞中分离培养结直肠肿瘤干细胞(Colon cancer stem cells)并研究其生物学特性。方法采用有限稀释法筛选分离具有连续克隆能力的单细胞,通过MTT比色法对其体外增殖能力进行鉴定,流式细胞仪分析细胞表面标记CD133、CD166、CD24、CD47、CD200、CD90、CD44、EPCAM的表达情况;PCR检测Oct4、Sox2、Nanog、C-myc等相关基因的表达,实时荧光定量PCR检测其表达量。结果三例能够形成肿瘤球的原代培养细胞CD166阳性细胞所占比例分别为61.9%、52.4%、47.8%,CD47阳性细胞所占比例分别为99.8%、97.2%、99.9%;不能形成肿瘤球的原代培养细胞中CD166阳性细胞为10.8%,CD47阳性细胞为0.1%;CD133、EPCAM、CD24、CD200四个表面标记在两种细胞中的表达均低于0.5%,CD44、CD90在两种细胞中的表达均高于95%;与原代细胞相比,克隆细胞具有较强的体外增殖能力并且高表达Oct4(P<0.05)、C-myc(P<0.01)及Sox2基因,不表达Nanog基因。结论人结直肠肿瘤中存在具有自我更新和增殖潜能的结直肠肿瘤干细胞,在体外可将其分离、培养和纯化。; 马丽君王立斌李海叶萍谢晓亮李玉奎杨银学; 关键词：结直肠肿瘤肿瘤干细胞克隆细胞

人胎盘MSCs对异基因小鼠皮肤移植排斥的免疫调节作用被引量：3: 2013年; 目的观察人胎盘MSCs(placental-derived MSCs,PMSCs)对异基因小鼠皮肤移植的影响。方法取自愿捐赠人胎盘胎儿侧组织,分离培养PMSCs,并以第3代细胞进行实验。选择30只6～8周龄C57BL/6小鼠作为受体,背部制作直径12 mm圆形皮肤缺损;以1～2日龄Vr∶CD1(ICR)乳鼠皮肤作为供体,建立小鼠异基因皮肤移植排斥模型。将30只受体小鼠随机分为3组,每组10只。A组为自体皮肤移植组,B组为同种异体皮肤移植+PBS尾静脉注射组,C组为同种异体皮肤移植+人PMSCs(1×105个/只)尾静脉注射组。观察各组移植皮片成活情况,检测术后7 d受体小鼠血液白细胞数量、腹腔液巨噬细胞活化率,采用ELISA、RT-PCR法检测受体小鼠血液、脾脏中IL-4、IL-17及IFN-γ表达量的变化。结果 A、B、C组移植皮片成活时间分别为(58.33±4.04)、(3.80±0.92)、(6.80±0.82)d,A组明显优于B、C组,C组优于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后7 d,A、B、C组小鼠血液白细胞计数分别为(6.32±0.45)×109/L、(7.45±0.52)×109/L、(6.35±0.39)×109/L,A、C组显著低于B组(P<0.05),A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组小鼠巨噬细胞活化率分别为6.87%±2.40%、7.84%±0.44%、15.98%±2.87%,C组显著高于A、B组(P<0.01)。ELISA检测示,3组血液中IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05);C组IL-17和IFN-γ含量显著低于B组(P<0.05);B组IFN-γ含量明显高于A组(P<0.05);其余各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测示,B、C组IL-4、IL-17和IFN-γmRNA相对表达量与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C组IL-4和IFN-γmRNA相对表达量明显低于B组(P<0.05),IL-17 mRNA相对表达量与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论异基因小鼠皮肤移植后尾静脉注射人PMSCs可抑制免疫排斥反应,其机制可能与减少IL-17及IFN-γ等相关细胞因子分泌有关。; 王琼刘婷张耀林陈冬梅王立斌李玉奎魏军; 关键词：免疫排斥异基因

人胎盘间质干细胞的获得、鉴定与特性的研究: 魏军王立斌刘婷马晓娜李玉奎; 关键词：胎盘

人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化被引量：1: 2014年; 背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。; 马丽君范恒马晓娜魏军李玉奎; 关键词：间质干细胞干细胞人胎盘间充质干细胞

人结直肠癌组织miR-363表达对细胞增殖与迁移活性影响的观察被引量：5: 2014年; 目的:研究microRNA-363(miR-363)在结直肠癌组织中的表达对细胞增殖和迁移活性的影响,并探讨其临床意义。方法:收集2011-02-01-2011-12-31宁夏医科大学总医院经手术切除的结直肠癌标本22例及对应癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5cm)。采用microRNA芯片技术筛选出在结直肠癌中低表达的miR-363;荧光定量PCR检测在3株恶性程度不同的结直肠癌细胞系LoVo、LS174T和SW480以及22例新鲜结直肠癌组织中miR-363的表达差异;构建miR-363慢病毒表达载体转染LoVo细胞,筛选出稳定表达miR-363及空载体的细胞株LoVo-363和LoVo-NC,荧光定量PCR检测转染后两细胞株中miR-363的表达;MTT法检测两细胞株的增殖情况;划痕实验检测两细胞株的迁移能力。结果:与正常结直肠细胞系CCD-18Co相比,miR-363在结直肠肿瘤细胞系LoVo、LS174T及SW480中表达均显著下调,在LoVo中表达水平为0.047±0.026,P<0.001;在LS174T中表达水平为0.42±0.045,P=0.013;在SW480中表达水平为0.058±0.017,P<0.001。miR-363的表达在不同性别(P=0.926)、不同年龄(P=0.785)间比较,差异均无统计学意义;而在不同病理分化程度(P=0.016)、TNM分期(P=0.018)及有无淋巴结转移(P=0.045)间比较,差异均有统计学意义。与LoVo-NC的1.00±0.131相比,LoVo-363中miR-363的表达5.32±0.329显著增高,P=0.001。MTT结果表明,第3天开始LoVo-363增殖能力显著低于LoVo-NC,第8天时差异达到最大,miR-363组为0.69±0.052,LoVo-363组为2.07±0.088,P=0.003。划痕实验表明,LoVo-363组细胞迁移能力为(35.26±12.09)%,显著低于LoVo-NC组的(51.89±10.11)%,P=0.023。结论:miR-363在结直肠癌中低表达,其能够抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,可能与结直肠癌的发生、发展及转移密切相关。; 严秀蕊王立斌陈冬梅李玉奎杨银学; 关键词：结直肠肿瘤微RNAS 基因芯片细胞增殖

小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2013年; 目的：构建携带小鼠CD200基因的重组腺病毒载体,并鉴定其在小鼠胰腺内皮细胞（mile sven 1,MS1）中mCD200基因的表达情况。方法：mCD200基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒pYr-adshuttle-4,获得重组质粒pYr-ads-4-mCD200。从该重组质粒上利用LR（attL×attR）特异性同源重组的方法,将mCD200表达框构建至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST上,获得的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd-4-mCD200,并用酶切和PCR等鉴定。采用TCID 50（tissue cell infectious dosage 50,TCID50）法测定重组腺病毒滴度。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,并感染小鼠内皮细胞MS1,通过荧光显微镜、real-time PCR检测MS1中小鼠CD200基因的表达。结果：PCR鉴定重组腺病毒证实重组腺病毒rAd-4-mCD200构建成功;扩增后检测病毒滴度约为109~1010pfu/ml;荧光显微镜及real-time PCR检测发现该重组腺病毒能在MS1细胞中高效的表达。结论：构建的重组腺病毒rAd-4-mCD200在MS1细胞中成功表达mCD200基因,为下一步开展关于CD200基因免疫抑制调节等相关研究奠定了基础。; 王琼陈冬梅王立斌魏军李玉奎; 关键词：腺病毒载体 CD200 免疫调节

miR-1在人结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及迁移的影响被引量：1: 2015年; 目的研究microRNA-1(miR-1)在结直肠癌中的表达并观察其对结直肠癌细胞增殖及迁移活性的影响。方法荧光定量PCR检测4株恶性程度不同的结直肠癌细胞系HCT116、Lo Vo、LS174T、SW480以及22例新鲜的结直肠癌组织中miR-1的表达差异;构建miR-1慢病毒表达载体转染HCT116细胞,筛选出稳定表达miR-1及空载体的细胞株HCT116-1和HCT116-NC,荧光定量PCR检测转染后两细胞株中miR-1的表达;MTT法及平板克隆形成实验检测细胞的增殖情况;划痕实验检测细胞的迁移能力。结果与正常结直肠细胞系CCD-18Co相比,miR-1在结直肠癌细胞系HCT116、Lo Vo、LS174T及SW480中表达均显著下调(P<0.05)。与正常结直肠组织相比,miR-1在结直肠癌组织中表达均显著下调(P<0.05)。与HCT116-NC相比,HCT116-1中miR-1的表达显著增高(P<0.05)。MTT结果表明,增殖第2~6天HCT116-1 MTT值低于HCT116-NC(P<0.05)。平板克隆形成实验表明,与HCT116-NC相比,HCT116-1细胞形成的克隆数减少且克隆本身较HCT116-NC小(P<0.05)。划痕实验表明HCT116-1组细胞迁移能力低于HCT116-NC组(P<0.05)。结论 miR-1在结直肠癌中低表达,上调miR-1的表达可有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,推测miR-1可能与结直肠癌的发生、发展以及转移密切相关。; 严秀蕊李玉奎梁雪云杨银学; 关键词：MIR-1 结直肠癌细胞增殖迁移

结直肠癌组织中miRNA的差异表达研究被引量：3: 2014年; 目的:寻找并鉴定在结直肠癌及癌旁正常组织中差异表达的miRNA,为进一步阐明其在结直肠癌发生、发展机制中的作用奠定实验基础。方法:收集10例新鲜的结直肠癌及癌旁正常组织,抽提总RNA,利用miRNA芯片技术寻找结直肠癌及癌旁正常组织中差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术进行验证。结果:与结直肠癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中上调2.3倍以上的miRNA有32个,下调2倍以上的miRNA有10个;real-time PCR结果与miRNA芯片结果较吻合。结论:筛选得到结直肠癌miRNA差异表达谱,其可能与结直肠癌的发生、发展相关。; 严秀蕊王立斌李玉奎杨银学; 关键词：MIRNA芯片结直肠癌 MICRORNAS

一种基于胶原制备组织工程表皮的方法: 本发明公开了一种基于胶原制备组织工程表皮的方法，采用人表皮干细胞作为种子细胞，以经过牛胎盘I型胶原构建的3D无细胞基质作为支架，利用添加MMPs抑制剂的CELLnTEC培养系统，气液界面分离法构建为一种有活性的全层组织工...; 魏军杨银学陈冬梅梁雪云刘淑丹杨婷婷李玉奎刘晓明; 文献传递

体外分步诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞被引量：1: 2011年; 目的建立体外诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系。方法分离纯化人母体来源胎盘间充质细胞,体外扩增后进行分步诱导分化,收获的胰岛素分泌细胞分别行免疫细胞化学和ELISA检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价其体外功能。结果分离纯化的人母体来源胎盘间充质细胞经培养及六步诱导分化后最终可形成胰岛素分泌细胞。免疫细胞化学检测诱导后细胞GLP-1、PDX-1和C-Peptide染色为阳性,ELISA结果显示该诱导细胞培养上清中胰岛素有较高的表达。诱导后的胰岛素分泌细胞在低糖和高糖刺激下的胰岛素释放量分别为(20.42±1.58)μIU/mL和(65.1±7.43)μI-U/mL(P<0.01)。结论通过建立体外人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系,获得具有一定胰岛素分泌能力的细胞,为胰岛移植的细胞来源提供了更有效的新途径。; 刘婷王立斌马晓娜朱永朝马丽君范恒李玉奎魏军; 关键词：胰岛素分泌细胞

李玉奎

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