李小凤
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞因子对小鼠肌细胞免疫调节相关分子表达的影响
- 金玉怀于花李小凤
- 丙型肝炎病毒重组腺病毒疫苗rAd/E2及rAd/△E2的实验研究
- 目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染是一个全球性健康问题,迄今全球约有1.7-2.0亿HCV感染者,目前仍无有效的防治方法。因此,开发有效的预防和治疗性HCV疫苗,就成了一个亟待解决的问题...
- 李小凤
- 关键词：丙型肝炎病毒同源重组腺病毒疫苗
- 文献传递
- 重组丙型肝炎病毒腺病毒载体疫苗rAd/E2的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建含丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E2基因的复制缺陷型重组腺病毒载体疫苗,并进行鉴定。方法以含HCV(1a亚型)E2基因的质粒pEGFP-HCV/E1E2为模板,PCR扩增E2基因,扩增产物与pGEM-T载体连接,测序正确后双酶切亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E2,Pme I酶切线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd/E2,PacⅠ酶切线性化后,脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒rAd/E2,在HEK293细胞内扩增,利用报告基因GFP的表达监测病毒包装及感染效率,PCR、RT-PCR和Western blot对重组腺病毒进行鉴定,并测定各代病毒的滴度。结果测序结果证明HCV E2基因序列正确;重组腺病毒质粒pAd/E2经酶切证明重组成功;PCR、RT-PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒rAd/E2构建正确;第4代重组腺病毒的滴度为7.5×108 pfu/ml。结论已成功构建了重组HCV腺病毒rAd/E2,为丙型肝炎疫苗的研制提供了新的途径。
- 李小凤于花蓝佳明张永红谢立新刘云宁尹玉蕾金玉怀
- 关键词：丙型肝炎病毒E2基因腺病毒载体
