- 猪CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用研究
- 目的 研究CD163分子在PRRSV感染PAM细胞中的作用.材料和方法 本试验用生物学软件分析猪CD163分子的结构，采用RT-PCR的方法将猪CD163分子胞外区分为四个片段进行扩增，并分别克隆到PET-32a原核表达...
- 冯亚琼杜东颖王冬梅崔春晓秦运杰李娜娜杨青原夏平安张改平
- PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应被引量：3
- 2014年
- 目的：为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒（ Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ， PRRSV）的免疫抑制反应。方法：本研究将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）（100 ng/ml）和纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG（550μg/ml）分别处理猪肺泡巨噬细胞（ Pulmonary alveolar macrophages cell ，PAM），同时用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理PAM细胞后接种PRRSV，并设PAM细胞对照组。各组分别培养12、24、36、48、60、72 h后收集细胞及上清，用已经建立的绝对荧光定量PCR方法检测接毒组不同时间段的PRRSV复制水平，并用相对荧光定量PCR方法检测各组PAM细胞中IFN-α、TNF-α的mRNA转录水平。结果：PRRSV在感染PAM细胞后12～24 h期间可促进IFN-αmRNA转录水平，36～72 h期间抑制IFN-αmRNA转录水平，之后IFN-α的mRNA转录水平恢复正常；TNF-αmRNA转录水平在感染后12～72 h均略微上调。 LPS处理PAM细胞后，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平均上调。用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理猪PAM细胞后，选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平显著下调，用PRRSV感染选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ后显著抑制抗病毒因子IFN-α、TNF-αmRNA转录水平。结论：FcγRⅢ的选择性激活抑制了宿主细胞的抗病毒因子水平及在PRRSV感染过程中的天然抗病毒免疫反应。
- 李娜娜王冬梅杜东颖秦运杰夏平安杨明凡崔保安
- 关键词：IFN-Α
- Sn在PRRSV免疫复合物感染PAM细胞中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的研究猪唾液酸黏附素(Sn)受体在抗体介导PRRSV感染PAM细胞中的作用。方法用已经纯化的猪抗PRRSV Ig G与TCID50104.6/0.1 ml的PRRSV Hn-3/06株等体积混合均匀制成感染性免疫复合物,用Sn Ig G和Sn Ig G+CD163 Ig G分别封闭PAM细胞,然后用感染性免疫复合物感染封闭后的PAM细胞,并设鼠阴性Ig G封闭组作对照,48 h后收集样品。用已建立的PRRSV SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR方法检测PRRSV的m RNA水平,并运用Graph Pad Prism 5软件处理数据。结果单独Sn封闭及联合封闭Sn和CD163后,PRRSV-Ig G组病毒含量不但没有升高,反而下降,且联合封闭下降更明显。结论 Sn受体可以在一定程度上调节感染性免疫复合物对机体的作用,对其进入宿主靶细胞具有协助和促进作用。
- 崔春晓冯亚琼夏禹豪郭嘉张莹莹李娜娜夏平安张改平
- 关键词：PRRSVSN免疫复合物
- PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应
- 为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的免疫抑制反应,本研究将含有200个TCID50的PRRS...
- 李娜娜王冬梅杜东颖秦运杰夏平安杨明凡崔保安
- 施氮与灌水对冬小麦土壤水、氮运移及产量的影响
- 本研究以冬小麦品种“平安8号”为材料，通过大田试验，系统研究了3个灌水处理(W0-全生育期不灌水，W1-灌拔节水，W2-灌拔节水和灌浆水)和4个施氮水平（0、180、240和300kgN/hm2）下土壤水分含量、耗水量、...
- 李娜娜
- 关键词：冬小麦施氮灌水土壤硝态氮籽粒产量耗水特性
- 文献传递
- 脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的抗病毒免疫反应的影响被引量：3
- 2014年
- 为研究脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）诱导的抗病毒免疫反应的影响,本研究采用100TCID50的PRRSV感染猪肺巨噬细胞（porcine alveolar macrophage,PAM）,感染12h后用100ng/mL脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理感染细胞,分别培养12、24、36、48h后收集细胞及上清,同时设PRRSV组、LPS组和PAM细胞组,用河南农业大学兽医微生物研究室已建立的Real-time qPCR方法对LPS＋PRRSV组和PRRSV组中PRRSV复制水平及各组PAM细胞中IFN-α、TNF-αmRNA转录水平变化进行定量分析。结果显示,LPS＋PRRSV组与PRRSV组相比,PRRSV拷贝数12~48h均较低,IFN-αmRNA转录水平显著升高（P〈0.05）,TNF-αmRNA转录水平升高,在48h时转录水平降低。而与LPS组相比,LPS＋PRRSV组IFN-αmRNA转录水平在12h时升高,24、36、48h均降低。结果表明,PRRSV感染PAM细胞经LPS刺激后,IFN-α、TNF-αmRNA转录水平显著升高（P〈0.05）,从而抑制了PRRSV在PAM细胞内的复制。
- 王冬梅冯亚琼崔春晓李娜娜杜东颖秦运杰付朋飞夏平安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪肺泡巨噬细胞IFN-Α脂多糖
- 猪唾液素黏附素胞外区在PRRSV感染PAM细胞中的作用被引量：1
- 2015年
- 采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础。本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域（第2-17结构域）,并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达。通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原（SnE）免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体。无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150（第1结构域）、SnE和Sn150＋SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200CID50PRRSV感染PAM,分别在感染24、48h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数。结果显示,PRRSV感染24h和48h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小（P〉0.05）;而鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体组的PRRSV mRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24h和48h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍（P〈0.001）和0.74倍（P〈0.001）,Sn150＋SnE混合抗体组24h和48h时的PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍（P〈0.01）和0.76倍（P〈0.001）。结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150＋SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系。
- 秦运杰李娜娜王冬梅崔春晓冯亚琼杜东颖张莹莹杨青原杨明凡夏平安张改平
- 关键词：多克隆抗体PRRSV
- 脂多糖对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的抗病毒免疫反应的影响
- 引言猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起猪的一种高度接触性传染病,各日龄猪均可感染[1]。PRRSV主要攻击免疫细胞,如肺泡巨噬细胞、单核细胞,且在感染到其他器官之前在猪肺巨噬细胞中大量复制[2],其也可在扁...
- 王冬梅冯亚琼崔春晓李娜娜杜东颖秦运杰付朋飞夏平安
- pSn受体在PRRSV-ADE中的作用及PRRSV感染小鼠模型的探讨
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respirator...
- 李娜娜
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- 文献传递
- Ca2+/CaM及CDPK在干旱高温复合胁迫诱导玉米sHSPs表达增加中的作用
- sHSPs（小热休克蛋白）在植物的生命活动中扮演着重要角色。我们之前的研究显示：sHSP26、sHSP22、sHSP17.4、sHSP17.2在高温及高温干旱条件下显著诱导表达，在正常及干旱条件下不表达，并且证明了sHS...
- 李娜娜
- 关键词：玉米钙依赖蛋白激酶
- 文献传递
