曲洪磊
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：青岛农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 脂质体介导抗乙脑病毒载体转染猪胎儿成纤维细胞条件的优化
- 2013年
- 本试验旨在探索脂质体Lipofectamine TM2000介导抗猪乙脑病毒(Anti-JEV)载体转染猪胎儿成纤维细胞(PFF)的最适条件,为构建Anti-JEV转基因胚胎提供供核细胞。从妊娠大白母猪获取10～15cm猪胎儿,采集背部皮肤用于组织块法培养分离PFF。结果显示,细胞培养至P7代,生长曲线正常;P5-7代细胞用于抗猪乙脑病毒载体转染,当质粒DNA量设定为0.35、0.7、1.05μg和1.4μg时,转染率分别为12.75%、36.82%、24.12%和8.85%;当脂质体量设定为0.7、1.4、2.1、2.8μL和3.5μL时,转染率分别为13.08%、21.71%、37.15%、24.21%和9.21%;当转染时间设定为2.5、4.5、6.5h和8.5h时,转染率分别为3.97%、38.48%、17.54%和12.47%。这些结果表明,2.1μL脂质体介导0.7μg质粒DNA转染4.5h转染效率最高。
- 唐元凤李方正张莉平周婧曲洪磊张文平宋学雄
- 关键词：脂质体转染
- 金黄地鼠超排后未排卵泡卵母细胞的成熟度和受精能力的观察被引量：1
- 2011年
- 为了证实金黄地鼠超排后卵巢中未排卵卵泡卵母细胞的成熟程度和受精能力,用促性腺激素PMSG和HCG进行4次超排处理,其中选择12只超排效率低下的金黄地鼠,回收输卵管和卵巢卵母细胞,观察卵母细胞的成熟程度、体外培养成熟能力及体外受精能力。结果显示,输卵管中回收超排卵数平均为22.6±7.8枚/只,从超排后卵巢中回收卵丘扩展卵数平均为23.2±3.9枚/只,卵丘未扩展卵数平均为13.4±3.7枚/只。卵丘扩展卵经0.1%透明质酸酶消化,裸卵占86.1%,带放射冠卵占11.5±2.4%。裸卵中排出极体的成熟卵占卵丘扩展卵的80.4±2.3%,无极体裸卵占5.7±0.8%。经体外培养2h,无极体裸卵的成熟率达100%,带放射冠卵的成熟率仅为6.3±9.4%,而卵丘未扩展卵未见有成熟卵。人精子穿透试验显示,卵巢回收成熟卵的受精率44.1±6.0%,同超排卵的受精率45.4±4.7%比较,无显著差异(P<0.05)。从低超排率的金黄地鼠卵巢中可获取与超排卵数相近的成熟卵母细胞,且具有可利用于去透明带金黄地鼠卵子穿透实验(HOP)及相关发育生物学研究的潜能。
- 周婧唐元凤曲洪磊何宇乾宋学雄
- 关键词：金黄地鼠超数排卵卵母细胞HOP
- 细胞色素P450芳香化酶活性调控对小鼠卵巢发育的影响
- 2010年
- 本研究旨在探索P450芳香化酶抑制剂(来曲唑)对小鼠卵巢发育的影响。将SPF级昆明系雌性小鼠随机分为对照组和2、4、6、8、10、30、50g/kg来曲唑剂量组,连续灌服3d,在停药后的第9、15和30天观测小鼠卵巢的发育情况。结果表明:①在停药后第9、30天的6和8g/kg组及第15天的4～10g/kg组的卵巢指数显著高于对照组(P<0.05),而停药后第15和30天的50g/kg组显著低于(P<0.05)对照组和2～10g/kg组;②在停药后第9和15天的4～8g/kg组及停药后第30天的6g/kg组的初级卵泡数显著高于(P<0.05)对照组和其它各试验组,而停药后第9天的30和50g/kg组、第15天的50g/kg组及第30天的10～50g/kg组都显著低于(P<0.05)对照组和其它各试验组;③在停药后第9、15和30天的4～8g/kg组的次级卵泡数都显著高于对照组(P<0.05);而停药后第9天的30和50g/kg组、第30天的50g/kg组都显著低于对照组(P<0.05);④在停药后第9天的4～8g/kg组、第15天的6和8g/kg组及第30天的2～8g/kg组的成熟卵泡数都显著高于对照组(P<0.05);而停药后第9天的10～50g/kg组、第15、30天的30和50g/kg组几乎没有成熟卵泡的形成。以上结果表明,用6g/kg来曲唑浓度可一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够促进小鼠卵巢和卵泡的发育。
- 薛青光宋学雄楚宁宁孙旺吾曹俊新曲洪磊
- 关键词：小鼠卵巢来曲唑
- 脂质体介导抗猪瘟病毒基因转染猪胎儿成纤维细胞的条件优化
- 2012年
- 本研究以组织块法分离大白猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetus fibroblasts,PFF),通过脂质体将含有抗猪瘟病毒基因及绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组质粒转入猪胎儿成纤维细胞,探讨转染猪胎儿成纤维细胞的影响因素,如DNA质量、脂质体用量及转染时间。实验发现脂质体2.5uL、质粒1.2μg、转染时间6h时转染率最高,为32.5%。过量的脂质体、质粒及过长的转染时间(>6h)会引起细胞的皱缩及死亡。本研究旨在为构建抗猪瘟病毒转基因克隆猪提供核供体。
- 曲洪磊李方正张莉平周婧宋学雄
- 关键词：脂质体
