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苏云金芽胞杆菌clpP基因缺失对碱刺激敏感性的影响被引量：1: 2013年; 【目的】比较苏云金芽胞杆菌与枯草芽胞杆菌在碱性培养条件下生长情况,明确clpP基因在碱刺激条件下的作用。【方法】采用同源重组技术敲除苏云金芽胞杆菌HD73菌株clpP基因,通过在不同pH下生长曲线的测定明确了clpP基因缺失突变体对碱性环境的敏感性,测定clpP基因的缺失对芽胞形成率、芽胞萌发效率和盐胁迫的影响。【结果】苏云金芽胞杆菌在碱刺激后,当培养基pH值为8.9-9.1时可以恢复生长,而枯草芽胞杆菌在pH值为8.2-8.4时可以恢复生长,说明苏云金芽胞杆菌对碱性环境适应能力更强,这有助于作为病原菌的Bt适应昆虫中肠的碱性环境。clpP基因缺失对芽胞形成率和萌发效率没有明显的影响。在将培养基中NaOH终浓度调节至30 mmol/L NaOH时,clpP基因缺失突变体的生长较出发菌株慢。说明ClpP在苏云金芽胞杆菌对碱性环境的适应过程中具有重要作用。; 邱丽丽彭琦曲宁刘春霞李杰张杰宋福平; 关键词：苏云金芽胞杆菌

芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达被引量：1: 2014年; 【目的】利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础。【方法】采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和截短的PexsY启动子的转录活性;利用该启动子在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD73菌株中表达了cry1Ac基因,通过透射电子显微镜观察晶体形态;蛋白定量、SDS-PAGE比较蛋白产量;生物活性测定进行功能验证。【结果】PexsY启动子在芽胞晚期转录活性很高,透射电镜观察到利用该启动子表达的cry1Ac基因形成了菱形晶体,SDS-PAGE分析可以检测到133kDa的Cry1Ac蛋白,且与cry3A启动子指导表达的蛋白产量相近,少于cry8E启动子指导表达的蛋白产量;生物活性测定表明PexsY指导表达Cry1Ac蛋白对玉米螟(Ostrinia furnacalis)具有杀虫活性。【结论】在Bt无晶体突变体中,非cry基因启动子PexsY可以正常表达133kDa的Cry1Ac蛋白,并形成晶体,具有在芽胞形成晚期表达cry基因的能力,该类启动子将在Bt工程菌构建中发挥重要作用。; 郑庆云王冠男张喆曲宁彭琦张杰高继国宋福平; 关键词：苏云金芽胞杆菌

SigmaK和GerE对芽胞外壁基质结构基因exsB的转录调控被引量：1: 2013年; 【目的】明确SigmaK和GerE对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)芽胞外壁(exosporium)基质结构基因exsB的转录调控。【方法】序列比较蜡样芽胞杆菌群exsB及启动区序列,利用启动子融合lacZ技术检测exsB启动子的转录活性;通过凝胶阻滞方法检测GerE与exsB启动子的结合。【结果】在蜡样芽胞杆菌群中,exsB及其启动区具有较高的相似性,exsB启动子在芽胞形成期的晚期大量转录;sigK和gerE的突变影响了exsB启动子的转录活性,凝胶阻滞结果显示GerE蛋白与exsB启动子可以结合。【结论】本研究证明exsB在芽胞形成晚期受到SigmaK转录调控,并直接受到GerE的正调控。; 曲宁彭琦邱丽丽刘春霞陈榛张杰宋福平李杰; 关键词：苏云金芽胞杆菌

cry8E启动子指导的非晶体蛋白GabR在苏云金芽胞杆菌HD73菌株中的表达被引量：2: 2014年; 【目的】利用cry8E基因启动子指导的高效表达载体pHT315-8E21b,构建一个能够在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)中正确表达非晶体蛋白GabR的重组菌株。【方法】将苏云金芽胞杆菌中的功能基因gabR装载到cry8E基因启动子指导的高效表达载体pHT315-8E21b上,转入到HD73-无晶体突变株后获得重组菌株HD-8E-gabR。通过SDS-PAGE和凝胶阻滞等方法对GabR蛋白的表达和功能进行分析。【结果】通过SDS-PAGE及蛋白定量等方法首次证明了在Bt表达体系中cry8E基因启动子指导的高效表达载体能够表达非晶体蛋白GabR,且通过碱裂解的方法可以提高GabR蛋白在Bt系统中的溶解性。进一步凝胶阻滞试验证明GabR能与其调控启动子PgabT结合。【结论】证明了cry8E基因启动子指导的Bt表达系统具有大量表达非晶体类蛋白的能力。; 刘春霞武建博彭琦曲宁邱丽丽张杰宋福平; 关键词：苏云金芽胞杆菌

转录因子SigmaK和GerE对芽胞外壁组成基因的表达调控: 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)属于蜡样芽胞杆菌群(B.cereus group)，它是一种革兰氏阳性细菌。蜡样芽胞杆菌群在逆境环境中可以形成芽胞，成熟芽胞的最外层结构是芽胞外壁，...; 曲宁; 关键词：苏云金芽胞杆菌转录调控; 文献传递

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曲宁