才华 作品数:97 被引量:543 H指数:13 供职机构: 东北农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 黑龙江省高校科技创新团队建设计划项目 转基因生物新品种培育专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 化学工程 文化科学 更多>>
野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及功能分析 被引量:27 2008年 干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害,它可以使作物减产,甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源,是基因克隆的理想材料。从低温(4℃)、干旱(30%PEG)及盐胁迫(200mmolL-1NaCl)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,并以此链为模板,从已构建的盐胁迫全长cDNA文库和东北野生大豆盐胁迫EST数据库中筛选出与渗透胁迫直接相关的EST序列,根据该序列设计一对PCR引物扩增S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的全长序列,经Blast比较分析,确定所获得的SAMS基因全长序列。构建以pBI121为基础的CaMV35S启动子调控的植物表达载体;利用农杆菌介导法将其导入烟草,获得了180株转基因烟草,并进行了低温、干旱和盐胁迫处理,通过测定在不同胁迫处理下的生理指标,分析了基因的功能。野生大豆的SAMS基因在烟草中的超量表达提高了转基因烟草的抗低温、干旱和耐盐能力。 樊金萍 柏锡 李勇 纪巍 王希 才华 朱延明关键词:野生大豆 SAM合成酶 基因克隆 功能分析 东北野生大豆编码DREB转录因子基因及其克隆方法 本发明提供的是一种东北野生大豆编码DREB转录因子基因及其克隆方法。该基因包括1179bp完整的开放读码框,编码392个氨基酸,有ATG起始密码子和TAG终止密码子;通过Protein Conserve Domain程序... 朱延明 才华 柏锡 李杰文献传递 转GsbZIP33基因苜蓿的耐盐性分析 被引量:3 2014年 本研究以前期获得的耐盐转基因苜蓿(Medicago sativa)的两个株系b32和b77及其受体对照野生型苜蓿品种为材料,经200mmol·L-1 NaCl处理15d后,系统地测定了与耐盐性相关的生理生化指标,包括叶片净光合速率(Pn),抗氧化酶(SOD,CAT,POD)活性、可溶性糖含量,Na+、K+含量等。结果表明,与野生型相比,转基因苜蓿新株系b32、b77的可溶性糖含量分别增加了48.8%和39.6%;SOD活性分别升高了71%和89%;CAT活性分别升高了21%和13%;POD活性分别升高了32.9%和34.1%,Na+含量分别降低了57%和44%,K+含量分别增长了21%和13%;两个转基因株系(b32、b77)的光合速率是对照的2.4倍和2.5倍,以上指标差异均极显著(P<0.01),表明转GsbZIP33的两个株系b32和b77提高了耐盐性。 陈明明 成舒飞 王家佳 赵超越 才华 朱延明关键词:净光合速率 抗氧化酶 可溶性糖 离子含量 耐盐性 水下舰机简易定位装置 本发明提供一种水下舰机简易定位装置。解决舰艇、船舶和飞机沉水失去联系定位难题。解决该难题的技术方案要点是:将水下舰机简易定位装置固定于舰艇、船舶和飞机顶部,线绳一端连接浮球,另一端固定于舰船,舰机失联沉水后,浮球浮于水面... 刘保平 矫洪涛 李璐 才华文献传递 野生大豆DREB基因的筛选与结合功能分析 被引量:2 2009年 以野生大豆(Glycine Soja)为材料,利用酵母单杂交的方法筛选到一个能够与DRE元件(DehydrationResponsive Element)结合转录因子-GsDREB(DRE Binding protein).通过体内和体外结合试验分析,该转录因子能够与DRE元件结合,经序列分析,GsDREB氨基酸序列N-末端含有核定位信号(nuclear localization sig-nal,NLS)、在C-末端含有酸性活性区域(acidic activation region,AAR),在序列内部具有由58个氨基酸编码的、能够与DNA结合的保守区域-DREBP/AP2结构域.该蛋白可能是野生大豆DREB家族的新成员. 才华 朱延明 柏锡 王希关键词:非生物胁迫 GLYCINE SOJA 酵母单杂交 野生大豆盐碱胁迫相关GsTIFY11b的克隆与功能分析 被引量:13 2012年 以耐盐碱野生大豆(Glycine soja L.G07256)为材料,采用同源克隆方法和RT-PCR技术获得一个TIFY类基因的全长cDNA(命名为GsTIFY11b)。进化树分析表明,与其他物种相比,GsTIFY11b与拟南芥的AtTIFY11a基因相似性最高,达到56%;序列分析表明GsTIFY11b蛋白除具有TIFY保守结构域外,还具有一个N端保守结构域和一个C端保守的Jas结构域;实时荧光定量PCR结果显示该基因受盐和碱胁迫诱导表达;将GsTIFY11b转化拟南芥来验证其耐盐碱功能,获得两个转基因纯合体株系,盐碱胁迫分析结果表明,GsTIFY11b的超量表达没能提高拟南芥对盐碱胁迫的耐性,并且与野生型相比,转基因植株在种子萌发期和苗期表现出对盐胁迫更加敏感。盐胁迫信号通路相关marker基因在转基因拟南芥中的表达特性分析表明,GsTIFY11b可以调控RD29B、KIN1、DREB等基因的转录。在洋葱表皮细胞中瞬时表达GsTIFY11b-GFP融合蛋白的结果表明,GsTIFY11b定位于细胞核中。上述结果表明,该基因在细胞核中起着转录调节子的作用,可能是通过调控盐胁迫信号通路中关键基因的表达来改变植物对盐胁迫的耐受性。 朱丹 柏锡 朱延明 才华 李勇 纪巍 陈超 安琳 朱毅关键词:野生大豆 盐碱胁迫 大豆基因组GmSRK及其同源基因的生物信息学分析 2014年 以野生大豆GsSRK氨基酸序列为检索序列,在Phytozome数据库中查找大豆基因组中其同源基因GmSRK。利用Phytozome数据库以及MEGA5.0,ClustalX等软件挖掘大豆基因组GmSRK同源基因,最终确定同源性较高的2个基因Glyma12g21640和Glyma08g06550。对GmSRK、Glyma12g21640和Glyma08g06550这3个基因进行基因结构,染色体定位,蛋白理化性质、一级、二级结构分析,结果表明三者均含有6个内含子,7个外显子;定位于3条不同染色体上;都具有B-lectin,S_locus_glycop,PAN_AP以及S_TKc四个结构域,属于G-type外源凝集素类受体蛋白激酶。进化树分析发现GmSRK与Glyma12g21640亲缘关系最近且与四季豆、苜蓿中同源蛋白聚为一支,Glyma08g06550与拟南芥RLKs亲缘关系较近。 钱雪 孙晓丽 端木慧子 成舒飞 才华 纪巍 赵超越 朱延明关键词:大豆 类受体蛋白激酶 生物信息学 农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化技术流程及操作要点 被引量:7 2011年 大豆遗传转化效率低,是大豆转基因育种亟待解决的重要问题。以大豆子叶节为外植体采用农杆菌介导法,系统地研究了大豆子叶节遗传转化各技术环节的操作要点,包括工程菌液制备、无菌苗获得及外植体制备、农杆菌的侵染及共培养、不定芽诱导、不定芽伸长、根诱导、驯化与移栽、抗性植株的获得及转基因植株的检测等,建立了一套较稳定、高效的大豆子叶节遗传转化体系。并利用该体系,将野生大豆耐盐碱相关基因A1对大豆品种绥农28、合丰50、合丰55、东农50进行遗传转化,系统地探讨了大豆基因型、影响T-DNA的转移效率的各环节、筛选剂浓度及不同基因型转化效率等几个重要因素。 赵晓雯 吴芳芳 狄少康 柏锡 纪巍 李勇 才华 朱延明关键词:大豆 农杆菌介导 子叶节 两种紫花苜蓿苗期耐盐生理特性的初步研究及其耐盐性比较 被引量:50 2013年 为研究2种紫花苜蓿:肇东苜蓿和农菁1号苜蓿的耐盐程度及其在盐胁迫处理下的生理反应规律,在1/2Hogland营养液水培条件下,用0,50,100,200,300,400mmol/L NaCl溶液模拟盐胁迫处理2种紫花苜蓿幼苗,观察记录各处理的盐害情况,分别测定胁迫前和胁迫3,6,9,12,15,21d的丙二醛(MDA)、叶绿素(Chl)和脯氨酸(Pro)含量,分析了不同胁迫程度和胁迫时间下相关生理指标的变化情况,并采用隶属函数法对二者的耐盐性进行了综合评价。结果表明,低浓度盐胁迫对其生长无显著影响,2种苜蓿具有较强的耐盐性,能够抵抗一段时间较高浓度(200mmol/L)的盐胁迫。随着浓度的增加,MDA含量逐渐升高,但随胁迫时间的延长,在200,300mmol/L处理下,2种苜蓿的MDA含量表现出先增加,后下降,然后又上升的动态变化趋势。随着胁迫浓度的增加和时间的延长,二者受到的盐害逐渐增大,Chl含量逐渐降低,Pro含量大量累积,但二者的Pro累积程度与它们的耐盐表现并不完全一致。综合评价结果表明,在100,200mmol/L NaCl胁迫下,农菁1号苜蓿比肇东苜蓿更耐盐;而300,400mmol/L NaCl处理时,肇东苜蓿的耐盐性大于农菁1号苜蓿。 刘晶 才华 刘莹 朱延明 纪巍 柏锡关键词:肇东苜蓿 耐盐性 综合评价 拟南芥基因芯片数据中非生物胁迫相关基因的挖掘 被引量:1 2009年 利用方差分析法从拟南芥芯片表达谱数据库挖掘非生物胁迫相关基因,并对这些基因进行GO注释分析,从而揭示非生物胁迫的生物学意义,发现非生物胁迫主要影响植物基因表达过程的转录调节和信号转导过程的磷酸化。同时对这些基因的上游启动子区域序列进行分析,挖掘非生物胁迫反应调控过程和适应过程的转录因子,发现植物非生物胁迫过程主要受bHLH-ZIP类和ZN-FINGER类C2H2型转录因子的调节。 束永俊 李勇 柏锡 才华 纪巍 朱延明关键词:非生物胁迫 基因芯片 基因挖掘 转录因子