孙亚蒙 作品数:10 被引量:16 H指数:3 供职机构: 东北农业大学 更多>> 发文基金: 转基因生物新品种培育专项 国家自然科学基金 国家现代农业产业技术体系建设项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
卵泡抑素基因过表达对其通路上相关基因表达的影响 被引量:4 2013年 为了探讨过表达卵泡抑素(follistatin,FST)基因对其通路上相关基因表达量的影响,本研究采用PCR方法扩增了民猪的FST基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Dsig-FST,对转染了重组质粒的成纤维细胞进行了鉴定,并采用实时荧光定量PCR检测通路上相关基因表达量的变化。结果表明,本研究成功克隆了民猪的FST基因,并在猪胎儿成纤维细胞中显著过表达,结果导致了ActRⅡB和BMP4基因显著下调(P<0.05),Smad4和Myostatin基因有下调趋势,ActRⅡA基因有上调趋势。由此可见,FST基因的表达变化对其通路上部分相关基因的表达有不同程度的抑制或促进作用。 孙亚蒙 张冬杰 张旭 汪亮 解宇 刘娣关键词:通路基因 民猪LPL基因真核表达载体的构建 2012年 为了进一步分析脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)基因的生物学功能。采用克隆测序的方法获得了民猪LPL基因的完整CDS序列,将其克隆到pMD-18T载体上,将测序验证正确的基因序列插入到pcDNA3.1(+)质粒载体中,构建了pcDNA-LPL真核表达载体。结果表明,所得序列与GenBank中登录的猪LPL基因同源性为99.30%,说明LPL基因的真核载体构建成功。该研究为在细胞水平上研究LPL的表达和功能奠定了试验基础,为进一步分析LPL基因功能提供了理论依据。 高丽峰 孙亚蒙 陈月婵 刘娣关键词:民猪 LPL基因 真核表达载体 五个品种猪脂蛋白脂酶(LPL)基因PCR-RFLP分析 被引量:3 2011年 为了进一步了解猪脂蛋白脂酶(LPL)基因的遗传变异情况,试验采用PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪、杜洛克、民猪和野猪(共346头)LPL基因的第8内含子进行遗传变异研究。结果表明:经限制性内切酶HindⅢ消化后表现为3种基因型,即BB型、AB型、AA型,在该位点上只有国外猪种表现出多态性。 高丽峰 孙亚蒙 刘娣转MC4R基因猪胎儿成纤维细胞系建立 汪亮 孙亚蒙 尹雪 李斌 刘娣关键词:MC4R 成纤维细胞 敲减FST基因对猪成纤维细胞中相关基因表达的影响 被引量:2 2014年 旨在获得敲减FST基因的猪胎儿成纤维细胞,并探讨对相关基因表达的影响。将构建成功并鉴定准确的发夹RNA真核表达载体FR1-shRNA利用脂质体转染至猪胎儿成纤维细胞中,并进行G418筛选,获得稳定转染细胞株,并利用Real-time检测了相关基因表达的变化。结果表明,在稳定转染的细胞株中,FST基因的表达受到显著抑制,结果导致了ActivinRⅡA、Myostatin和Bmp4基因的表达出现下调趋势,并且极显著地降低MyoD基因的表达。 孙亚蒙 张冬杰 汪亮 张旭 尹雪 刘娣关键词:RNA干扰 相关基因 猪卵泡抑素基因特异表达载体的构建及鉴定 2014年 采用RT-PCR方法扩增猪的FST基因完整编码区,采用双酶切和连接方法构建可在肌肉细胞中特异表达的真核载体,并转染C2C12细胞系进行验证。结果表明,猪FST基因全长1 032 bp,与网上已提交序列相似度为99.13%,成功构建可在肌肉细胞中特异表达的真核载体pEGFP-C1-α-actin-FST,转染C2C12细胞后,通过实时定量PCR检测,表明FST基因过表达可抑制MSTN基因表达。 刘娣 尹雪 张冬杰 汪亮 孙亚蒙 张晓卉关键词:实时定量PCR 过表达 民猪FST基因的克隆及其在冷诱导细胞凋亡过程中的功能初探 卵泡抑素(follistatin,FST)得名的原因是因为其对促卵泡素有很强的抑制作用,是一种单链糖蛋白,最初,对卵泡抑素的研究多集中在生殖系统中。近年来的研究表明,FST能与TGF-β超家族的多个成员相互作用,在细胞增... 孙亚蒙关键词:民猪 克隆表达 细胞凋亡 脂质体法介导EGFP基因在细胞中的表达分析 2013年 为了研究增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在上皮细胞中的表达情况,试验采用脂质体法介导真核表达质粒EGFP-C1转染PK15细胞和JEG-3细胞,分别在转染的24小时和48小时观察荧光的表达情况。结果表明:在荧光显微镜下,EGFP蛋白在PK15细胞和JEG-3细胞中均得到表达,相同条件下PK15细胞的转染效率高于JEG-3细胞,且在JEG-3细胞中EGFP均一表达,而在部分PK15细胞中EGFP表达主要聚集于细胞核区域,细胞状态对亚细胞定位存在重要的影响。 张旭 马红 孙亚蒙 汪亮 付博 李忠秋 刘娣关键词:绿色荧光蛋白 脂质体 PK15细胞 JEG-3细胞 四环素诱导的猪黑素皮质激素受体-4基因真核表达载体的构建 被引量:3 2013年 猪黑素皮质激素受体-4(melanocortin-4receptor,MC4R)基因是影响猪生长肥育的主效基因之一,为了进一步研究MC4R基因的生物学功能,制备高成活率转基因猪,通过采用条件性诱导表达载体系统,PCR方法扩增了猪MC4R基因完整编码区,四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子调控区与转录调节元件。采用双酶切和连接等方法将上述元件连接到pcD-NA3.1(+)上,构建了重组质粒pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R。经双酶切和测序鉴定,结果显示片段正向连接且片段全长测序正确。试验成功构建了四环素诱导的pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R真核表达载体,并能在时间特异性方面调控MC4R基因的表达。 解宇 汪亮 张冬杰 刘娣 孙亚蒙关键词:MC4R基因 小鼠黏着斑相关蛋白在不同组织中的表达分析 被引量:2 2013年 黏着斑相关蛋白(focal adhesion associated protein,FAAP)是近几年新发现的一种分布广泛的蛋白,该蛋白由小鼠D10Wsu52e基因编码。为探索D10Wsu52e基因在小鼠各组织中的表达情况,进一步预测该蛋白的功能,提取小鼠心脏、肾脏、脾脏、肺、背肌、腿肌、小肠、睾丸、附睾及卵巢、子宫的总RNA,利用实时荧光定量PCR技术,检测D10Wsu52e基因在各组织中的相对表达量,寻找组织表达规律及其潜在的功能。结果显示:所提取的小鼠11种组织中均有D10Wsu52e基因的表达,其相对表达量在各组织之间差异显著(P<0.05);D10Wsu52e基因在小鼠11种组织中的表达量由高到低依次为背肌、子宫、卵巢、腿肌、附睾、睾丸、肾脏、脾脏、心脏、肺、小肠,其中D10Wsu52e基因在心脏、肺、小肠中的相对表达量显著低于背肌和子宫(P<0.05)。结果表明:D10Wsu52e基因可能对调控啮齿动物多种组织器官,特别是生殖器官及骨骼肌发育具有一定的作用。 张旭 马红 刘娣 孙亚蒙 汪亮关键词:小鼠 组织表达谱