唐秋琳 作品数:27 被引量:90 H指数:5 供职机构: 四川大学华西医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 基金委创新研究群体项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 轻工技术与工程 化学工程 文化科学 更多>>
去甲基化药物逆转结肠癌细胞株sw620/L-OHP耐药性的作用及机理研究 被引量:5 2010年 目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-dC)对结肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株sw620/L-OHP耐药性的逆转作用及其作用机制。方法应用5-aza-dC作用于结肠癌细胞sw620与其L-OHP耐药细胞sw620/L-OHP,CCK-8法检测其逆转耐药作用;应用Westernblot检测5-aza-dC使用前后sw620/L-OHP细胞中BNIP3基因及耐药基因编码的P糖蛋白(P-GP)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达水平的变化;应用同位素微量示踪法检测5-aza-dC使用前后sw620/L-OHP细胞中甲基转移酶(DNMT)的活性。结果 1.4μmol/L5-aza-dC能使L-OHP对sw620/L-OHP细胞IC50由(0.335±0.043)μg/mL降到(0.069±0.023)μg/mL,逆转耐药倍数为8.26倍(P<0.001);5-aza-dC能使sw620/L-OHP细胞中P-GP、MRP蛋白表达增加(P<0.05),但增加程度与5-aza-dC剂量变化无关(P>0.05);另外5-aza-dC还能使表达低下的BNIP3蛋白重新表达,且其表达水平随5-aza-dC浓度的增加而增加(P<0.001);5-aza-dC能够降低sw620/L-OHP细胞中DNMT的活性(P<0.001)。结论 5-aza-dC通过降低DNMT活性来上调BNIP3的表达,并协同某种机制抑制P-GP、MRP的进一步表达,从而逆转sw620/L-OHP细胞耐药性。 邓茜 李志平 黄春梅 刘桢 钟仁明 李爱军 毕锋 唐秋琳关键词:BNIP3 一株产黄色素红曲霉Monascus HB-5的发酵条件及色素稳定性、安全性研究 实验室从红曲霉(Monascus HB-2)中分离到一株单产黄色素红曲霉:Monascus HB-5。其生物学特性表现为:气生菌丝发达,在平血PDA培养基上呈中间黄色,边缘白色的圆形隆起。该菌无性繁殖产生分生孢子,卵形或... 唐秋琳关键词:红曲霉 黄色素 发酵条件 文献传递 ARHI真核表达质粒对胃癌恶性表型的影响 被引量:2 2013年 目的观察外源ARHI在胃癌细胞中过表达对胃癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响。方法构建pEGFP-ARHI表达载体,并通过lipofectamineTM2000将其转入ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中作为实验组,空载质粒pEGFP-N1转入MKN-28作为空载组,未处理MKN-28细胞作为未处理组。通过荧光显微镜及Western blot检测外源ARHI的表达,采用增殖实验、损伤刮擦实验、体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测过表达ARHI胃癌细胞MKN-28的增殖能力、侵袭和迁移能力的变化。结果 ARHI在胃癌细胞系MKN-28中表达较低,成功构建重组真核表达质粒pEGFP-ARHI并成功转染MKN-28细胞后,CCK8法检测显示,相对于空载组和未处理组,转染pEGFP-ARHI的实验组细胞增殖变慢(P<0.05),Transwell小室实验显示实验组细胞侵袭能力减弱(P<0.05),细胞划痕实验表明实验组细胞迁移能力减弱(P<0.05)。结论在ARHI低表达的胃癌细胞系MKN-28中表达重组质粒pEGFP-ARHI能够抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。 李黎博 唐秋琳 李明星 冷卫兵 陈柳 袁丹丹 李荣惠 毕锋关键词:ARHI MKN-28 增殖 BNIP3基因增强人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤放射敏感性的实验研究 被引量:1 2010年 目的:探讨BNIP3基因对人宫颈癌的放射增敏效应的影响。方法:将6×10~6HeLa细胞皮下接种到裸鼠的背部,并通过尾静脉将质粒DNA注射到裸鼠体内,建立动物肿瘤模型。肿瘤体积按A×B^2×0.5计算。用免疫组化的方法来检测肿瘤组织中Bnip3蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果:免疫组化测得,pDsRed-BNIP3处理组的肿瘤细胞中Bnip3蛋白的表达明显较其他组高。这个凋亡调节因子在体内能明显地增加肿瘤细胞的凋亡数(P<0.01)。肿瘤生长曲线也显示BNIP3基因可以增强放射治疗的抗肿瘤效应。结论:重组质粒pDsRed-BNIP3在体内对宫颈癌HeLa细胞移植瘤有放射增敏效应。 黄春梅 李志平 邓茜 毕锋 唐秋琳关键词:BNIP3 宫颈癌HELA 移植瘤 放疗增敏 高校生物医学实验室安全管理与教育探索 被引量:33 2018年 生物医学实验室安全管理涉及生物安全、化学安全、设备安全等多方面,在安全教育及管理体系上须有针对性地建立规范的管理机制。以四川大学华西医院科研基地为例,从安全意识培养、安全知识教育及安全体制建立等几个方面进行探讨,以建设高效、自律、负责的实验室安全文化为目标,为生物医学实验室的安全管理人员提供参考。 唐秋琳 黄强 黄鹏 毕锋关键词:安全管理 安全教育 肾透明细胞癌中lncRNA和miRNA差异表达及相关ceRNA调控网络的分析研究 被引量:6 2019年 本文旨在通过大样本基因组学分析技术,评估lncRNA、miRNA、mRNA及ceRNA在肾透明细胞癌中的差异表达情况及其预后价值。利用R软件对TCGA数据库中肾透明细胞癌RNA和miRNA数据进行基因差异表达分析和生存分析,并通过cytoscape软件得到差异表达的lncRNA-miRNA-mRNA之间的ceRNA调控关系网。结果发现共有1 570个lncRNA、54个miRNA和17个mRNA在肾透明细胞癌组织中存在异常表达,且其表达水平以上调为主(错误发现率<0.01;对数差异表达倍数变化绝对值> 2)。ceRNA调控网显示共89个差异表达的lncRNA和9个差异表达的miRNA之间存在相互作用关系,生存分析共鉴定出COL18A1-AS1、TCL6、LINC00475、UCA1、WT1-AS、HOTTIP、PVT1等38个有预后价值的lncRNA和2个有预后价值的miRNA(miR-21和miR-155)(P <0.05)。本研究将为肾透明细胞癌靶向治疗与预后评估提供新的理论依据。 侯婉婷 唐秋琳 毕锋关键词:肾透明细胞癌 长链非编码RNA 微小RNA 鸟苷酸交换因子P92GEF通过靶向调控RhoA抑制肿瘤细胞增殖侵袭(英文) 被引量:1 2019年 Dbl家族鸟苷交换因子(GEFs)是Rho家族蛋白发生恶性转化的主要调控单位,它通过使Rho蛋白从无活性的GDP形式转换为GTP形式的Rho蛋白而发挥作用,参与细胞骨架重排,细胞的生长和活力。P92GEF是一GEFs家族分子。本研究通过Real time PCR对P92GEF在人体48种正常组织中的表达情况进行了测定;GST-pulldown技术对P92GEF的体内GEF活性进行了检测;双荧光素酶报告基因检测技术对下游小分子进行转录因子活性检测;应用免疫荧光双染标记法完成了高表达P92GEF对正常细胞骨架形态的影响;在细胞表型实验中分别使用CCK8法、Transwell法及软琼脂克隆形成实验检测了高表达P92GEF对细胞增殖侵袭迁移及体外成瘤能力的影响。研究结果显示P92GEF有841个氨基酸,具有典型的Dbl家族分子结构域,在肺组织中表达量最高,能够促使正常成纤维细胞中的应力纤维(stress fiber)增多,P92GEF转染的NIH3T3细胞可以独立生长和形成继发性病灶,同时促使细胞增殖,侵袭及克隆形成能力增强,体外转录因子活性检测发现该基因可能与JAK/STAT通路有关。因此,P92GEF是一个典型的鸟苷交换因子家族分子,能激活Rho家族分子Rho A,具有明显的癌基因特征。 唐秋琳 郎楠 李黎博 石芳 毕锋关键词:癌基因 RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响 被引量:2 2011年 目的研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响。方法采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性。将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性。另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响。结果测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性。含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小。结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为。为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础。 周海俊 李立兰 岳彩霞 魏雯 李楠静 唐秋琳 毕锋关键词:RHOE 荧光素酶报告基因 体内成瘤 β-catenin和IQGAP1的调控环路及其在肠癌细胞增殖中的作用 被引量:3 2018年 本文主要研究β连环蛋白(β-catenin)和含IQ基序的GTP激酶活化蛋白1(IQGAP1)的相互调控,及其在肠癌细胞增殖中的功能。利用细胞转染技术改变肠癌细胞SW1116中的β-catenin或者IQGAP1表达后,通过蛋白质印迹法分别检测SW1116细胞中IQGAP1和β-catenin的表达情况。利用CCK-8细胞增殖实验检测干扰下调IQGAP1对β-catenin促进SW1116细胞增殖的影响。结果发现在SW1116细胞中干扰β-catenin可以下调IQGAP1表达,过表达β-catenin可以上调IQGAP1并加强有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路;干扰IQGAP1在SW1116细胞中反而引起β-catenin上升;同时CCK-8细胞增殖实验发现干扰IQGAP1减弱了β-catenin的促肠癌细胞增殖作用。本研究表明β-catenin与IQGAP1形成负向反馈调控环路,在调控肠癌细胞的增殖中发挥着重要功能。 徐焕基 夏洪伟 唐秋琳 毕锋关键词:Β连环蛋白 细胞增殖 Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响 2009年 目的研究细胞周期分裂蛋白Cell divisioncy cle42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用LipofectamineTM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48h后Cdc42mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。结论Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。 刘素蕊 张思源 刘明 朱亚杰 周继陶 黄娟 唐秋琳 陈向征 郎楠 毕锋关键词:结肠癌 CDC42 RHO SIRNA