吴晓俐 作品数:9 被引量:13 H指数:2 供职机构: 上海医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
测定尿激酶含量夹心法 ELISA 的建立 被引量:1 1992年 采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml. 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:尿激酶 夹心法 ELISA 单克隆抗体 亲和层析纯化HepG_2细胞分泌的PAI-1 被引量:2 1994年 本文报道用抗PAI-1单克隆抗体(McAb)亲和层析建立了纯化PAI-1的简便方法。经免疫亲和层析,SephacrylS200凝胶过滤,从HepG2细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的PAI-1,回收率为84%,PAI-1比活性6.1×104IU/mg。糖基化PAI-1分子量为50kD,比活性5.8×104IU/mg。非糖基化PAI-1分子量43kD,占总PAI-130%,仍具有PAI-1活性。用ConA-Sepharose亲和层析进一步纯化得到SDS-PAGE纯的糖基化PAI-1。 丁皓 吴晓俐 孙幼华 周兴华 朱运松 宋后燕关键词:PAI-1 纤溶酶原 基因工程链激酶的中试研究 被引量:3 1996年 链激酶是急性心肌梗塞溶栓治疗的特效药物。我们利用基因工程方法在大肠杆菌中高效表达重组链激酶,用10L发酵罐对工程菌进行高密度、高表达发酵,通过简便的复性和纯化流程,一次能够获得纯度达98%以上、比活性9~10万IU/mg的r-SK,可分装300~400个剂量静脉注射用r-SK冻干粉制剂。形成了中试规模的批量生产能力。 任军 黄阳滨 汤其群 吴晓俐 涂宣林 顾银良 朱运松 宋后燕关键词:基因工程 链激酶 中试 心肌梗塞 溶栓疗法 抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定 被引量:3 1992年 用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M^(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1~135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M^(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:尿激酶 单克隆抗体 抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定 被引量:1 1994年 以人IgG为抗原,采用杂交瘤技术获得6株不同性质的抗人IgG单克隆抗体(McAb)(AI2、AI3、AI4、AI5、AI6、和AI)。AI2McAb具有抗IgG1亚类的特异性,可识别IgGγ链和F(ab')2片段,作用位点可能在人IgG1铰链区。AI3AI、McAb分别为IgG3、IgG4亚类限制性McAb,可能作用于IgGCH1区。AI4McAb可识别χ和λ型IgG四个亚类以及F(ab')2片段,不识别游离χ、λ链。AI5McAb特异地抗IgG1结合型χ,作用于IgG独特型位点。AI6McAb只抗λ型IgG,可能作用于IgGCL区。6种抗人IgGMcAb除了AI5外,均能用于人血清中IgG的检测。 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:单克隆抗体 免疫球蛋白G 抗人PAI-1单克隆抗体制备、鉴定和应用 1994年 以重组PAI-(rPAI-1)为抗原,通过杂交瘤技术获得6株阳性杂交瘤细胞(AP1、AP2、AP3、AP4、AP5和AP6),并用SPA亲和层析纯化了抗PAI-1单克隆抗体(McAb)。所有McAb均能识别rPAI和天然PAI-1,腹水滴度均为106 以上。6种McAb对PAI-1亲和常数在3.45×107 —1.05×109 mol/L之间。AP2、AP3 McAb能完全抑制PAI-1活性,AP4、AP和AP6只能部分抑制PAI-1活性,AP1则不抑制PAI-1活性。6种McAb中只有AP1、AP4和AP5能识别PAI-1/t-PA复合物。利用AP1、AP3、和AP4 McAb制备免疫亲和柱一步纯化HepG2 细胞分泌的PAI-1,纯度大于98%,回收率92%,纯化倍数51倍。利用抗PAI-1 McAb建立了夹心法ELISA,测定了人血浆PAI-1水平,正常人血浆PAI-1平均含量(±D)为24.7±7.75ng/ml。 丁皓 吴晓俐 周兴华 朱运松 宋后燕关键词:纤溶酶原 单克隆抗体 丁酸钠对杂交瘤细胞增殖及抗体分泌的影响 被引量:2 1991年 用含不同浓度丁酸钠完全培养液和无血清培养液培养分泌抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)单克隆抗体的杂交瘤细胞。当丁酸钠浓度为0.25~0.5 mmol/L时,对杂交瘤细胞分泌抗体能力具有刺激作用,提高抗体效价2~4倍,对细胞生长无抑制作用。表明丁酸钠可作为一种添加剂用以提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。 丁皓 吴晓俐 陈幼妹 朱运松 宋后燕关键词:丁酸钠 抗体分泌 杂交瘤 细胞 人纤维蛋白降解产物D-双聚体和E片段的纯化和鉴定 1993年 D-双聚体和E片段均为交联型纤维蛋白的降解产物。根据它们的等电点的不同,建立了等电聚焦法纯化D-双聚体和E片段的方法。纯化的D-双聚体分子量约3.32×10^(-22)kg,含γ-γ双聚体片段(分子量1.36×10^(-22)kg)、β链片段(分子量7.30×10^(-23)kg)和α链片段(分子量2.49×10^(-23)kg)。Western Blot结果表明它可被抗D-双聚体单克隆抗体(McAb)识别。纯化的D-双聚体用ELISA检测,证实不含有E片段。纯化的E片段分子量约7.47×10^(-23)kg,还原后形成α链片段(分子量约1.03×10^(-23)kg)、β链片段(分子量6.14×10^(-24)kg)和γ链片段(分子量1.49×10^(-23)kg)3条肽链,可与抗E片段McAb进行免疫学反应。 丁皓 吴晓俐 朱运松 宋后燕关键词:纤维蛋白 降解产物 基因工程链激酶(r-SK)纯化及其单克隆抗体制备和鉴定 被引量:2 1994年 采用Rotofor等电聚聚焦和分子筛技术纯化大肠杆菌表达的重组链激酶(r-SK),其纯度为97%,比活性1×10^6IU/mg,回收率41%,分析所纯化的r-SK N端氨基酸顺序证实其1-15个氨基酸顺序与SK基因的核苷酸顺充所示3联密码子一致。以纯化r-SK为抗原,通过杂交瘤技术构建了分泌抗r-SK单克隆抗体杂交瘤细胞。该McAb属IgG1亚型。 丁皓 朱运松 吴晓俐 周兴华 宋后燕关键词:链激酶 等电聚焦 单克隆抗体