吴小慧
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TIM-4基因多态性与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨T细胞免疫球蛋白域及黏蛋白域蛋白4（Tcells immunoglobulin domain and mucin domain protein-4，TIM-4）基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的单核苷酸多态性（SNP）与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对湖北地区185例哮喘患者和162例健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）、外显子9区Val365Met（G／A）的多态性进行分析，计算基因型和等位基因频率。结果（1）湖北地区汉族人群健康者TIM-4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）位G／G、G／A、A／A基因型频率分别为0．840、0．160、0，而哮喘人群其频率分别为0．859、0．141、0，其基因型和等位基因型频率与对照组相比差异均无统计学意义（P=0．603，P=0．618）；（2）本试验未检测到TIM-4外显子9区Val365Met（G／A）的多态性。结论湖北地区汉族人群TIM4基因外显子2区Lys65Lys（G／A）存在单核苷酸多态性变异，但该位点的变异与湖北地区汉族人群支气管哮喘易感性无关；TIM-4基因外显子9区VaD65Met（G／A）在湖北地区汉族人群中未发现单核苷酸多态性。
- 吴小慧李一荣陈请国陈凤花胡丽华
- 神经干细胞与乳鼠基底膜共培养后分化为毛细胞样细胞的研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞及诱导其分化为毛细胞样细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离神经干细胞,在无血清培养基中培养。取乳鼠基底膜与神经干细胞一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物myosin VIIa和calretinin。结果培养的神经干细胞胞体透亮,折光性好,Nestin鉴定阳性。诱导分化后的细胞免疫荧光和免疫组化示myosin VIIa和calretinin阳性。结论无血清条件下能培养出活性很好的神经干细胞,乳鼠基底膜能引导其朝毛细胞方向分化。
- 陈请国付勇王显红吴小慧谢静李哲文龚树生
- 关键词：神经干细胞基底膜分化
- 大鼠神经干细胞生长及增殖规律的体外研究被引量：5
- 2008年
- 目的：体外无血清条件下培养胚鼠神经干细胞，观察其生长及分化情况。方法：取孕16～18d SD系大鼠的胚胎海马组织，在含EGF、bFGF和B27的DMEM／F12培养基中培养，电子显微镜下观察其增殖分化过程，并通过免疫荧光方法鉴定分化后的细胞类型。结果：神经干细胞在无血清培养基中生长旺盛，8d左右就可以形成胞体透亮、折光性好的干细胞球，分化后的细胞显示NSE、GFAP免疫阳性。结论：无血清培养条件下神经干细胞生长良好，而在含血清的培养基中可以分化为神经元和星形胶质细胞。
- 陈请国付勇王显红吴小慧朱锐李泽文龚树生
- 关键词：胚鼠无血清培养基神经干细胞分化
- 人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4 cDNA全长真核表达载体的构建及其在16HBE细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的克隆人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因cDNA,构建其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并转染16HBE细胞。方法根据GeneBank中人TIM-4 cDNA序列(编号:NM-138379.2),设计出带有EcoRI和BamHI的上下游引物,应用RT-PCR技术,从人骨髓中扩增出TIM-4基因编码区序列,克隆到pMD18-T载体,形成pMD18-T-TIM-4重组质粒,经菌落PCR,双酶切,测序鉴定获得人TIM-4基因cDNA片段,然后将其亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光载体中,并通过菌落PCR,双酶切,测序鉴定其重组体。将测序正确的pEGFP-C2-TIM-4质粒转染人气道上皮细胞(16HBE),用实时定量PCR检测目的基因的表达。结果成功扩增出人TIM-4 cDNA全长1134 bp,经T-A克隆构建的pMD18-T-TIM-4重组质粒经菌落PCR,双酶切,测序证实载体中含有正确的TIM-4编码区片段。由此构建的真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,经菌落PCR扩增出1134 bp左右的片段,经双酶切后产生4.7 kb和1134 bp左右的2条带,DNA测序显示与GeneBank中人TIM-4 cDNA序列一致。重组质粒转染16HBE细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,经实时定量PCR分析,转染细胞TIM-4基因的表达显著增加。结论首次从人骨髓中扩增出TIM-4基因cDNA全长,构建了其真核表达载体pEGFP-C2-TIM-4,并在16HBE细胞内成功高表达,为进一步研究TIM-4的生物学功能奠定了基础。
- 吴小慧李一荣陈凤花王琳胡丽华
- 听觉系统中的钙联蛋白
- 2007年
- 钙联蛋白(calnexin)广泛存在于人和动物内耳听觉系统,在调节细胞质 Ca^(2+)浓度方面发挥重要作用,在胞质高 Ca^(2+)浓度的情况下能起到保护细胞的作用。因此,钙联蛋白的相关研究有助于进一步了解和认识其与内耳听觉系统的关系。本文就钙联蛋白在毛细胞内的分布,作为毛细胞早期标志物及其与老化鼠耳蜗退化的关系做一综述。
- 陈请国吴小慧王宝凤李欣龚树生
- 武汉地区汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白4基因多态性与变应性哮喘的相关性
- 2009年
- 变应性哮喘是一种以气道高反应性和慢性炎症为特征的气道炎症性疾病。其病因既受环境影响，又有明显的遗传倾向。有学者采用定位克隆法，在世界不同种族中发现人5q31-33是哮喘的重要基因候选区。人T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白蛋白（T cells immunoglobulin mucin，TIM）基因家族位于5q33．2，包括TIM-1、TIM-3和TIM-4。国内外有研究表明，TIM-1和TIM-3基因多态性与变应性哮喘易感性相关。TIM4是最近才发现的TIM家族成员，且证明是TIM-1的天然配体。因此，推测作为TIM-1天然配体的TIM-4可能与哮喘易感性有关。本研究检测武汉地区汉族人群TIM-4外显子2区8579G／A、外显子3区11522G／A单核苷酸多态性，以探讨其与哮喘易感性的关系。
- 吴小慧李一荣陈请国王琳胡丽华
- 关键词：细胞免疫球蛋白变应性哮喘基因多态性汉族人群黏蛋白气道高反应性
- 胚胎大鼠神经干细胞体外培养及分化为类毛细胞的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)及诱导其分化为类毛细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离NSCs,在无血清培养基中培养,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导其分化为神经元和星形胶质细胞:将NSCs球放到含鼠尾胶原包被的盖玻片6孔培养板中培养,然后将乳鼠基底膜体外培养后汲取其上清液与NSCs一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物肌球蛋白(myosin)Ⅶa和钙视网膜蛋白(calretinin)。结果培养的NSCs胞体透亮,折光性好,分化后的细胞免疫组化示神经元特异性烯醇化酶、胶原纤维酸性蛋白、myosinⅦa和calretinin阳性。结论在无血清条件下能培养出活性很好的NSCs,并且能诱导其分化为神经元、星形胶质细胞和类毛细胞。
- 陈请国龚树生付勇王显红吴小慧谢静李欣李泽文
- 关键词：胚胎干细胞毛细胞
