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重组人胰岛素原基因高效表达和纯化的研究被引量：5: 2014年; 克隆人胰岛素原基因,通过密码子优化和融合蛋白化学水解位点和纯化标签优化,构建人胰岛素原高效原核表达系统,为重组人胰岛素原的高效表达纯化制备奠定基础。根据大肠杆菌密码子偏好性优化设计人胰岛素原基因,通过PCR技术获得重组基因,构建原核表达载体pET-32a-proinsulin,转化大肠杆菌表达株E.coli BL21,筛选人胰岛素原高效表达菌株,建立诱导表达和纯化融合蛋白技术方法。克隆获得优化的人胰岛素原重组基因,构建原核高效表达载体,获得优化的诱导表达方法和纯化的人胰岛素原。该研究为建立胰岛素高效制备的优化条件奠定基础。; 黄秀梅叶子坚李鹤宾; 关键词：人胰岛素原蛋白表达基因重组

体外原代培养牡蛎鳃细胞对锌离子的耐受性研究: 2017年; 本文以福建牡蛎为实验材料,探索体外原代细胞培养方法,测试体外培养细胞对锌离子的耐受特性。结果表明,以pH7.25、渗透压摩尔浓度为1000mosm、10%透析胎牛血清的L-15优化培养基,能顺利的在体外培养牡蛎鳃细胞且细胞活力在80%以上;原代牡蛎腮细胞对锌离子暴露的耐受特征与牡蛎对锌离子的耐受特征高度相似,24、48、72、96小时的半致死浓度分别为239.47、72.60、12.13和8.19mg·L^(-1),表明体外培养的牡蛎鳃原代细胞维持了原有的锌耐受特性。; 许莉孔雪罗联忠叶子坚; 关键词：原代细胞培养锌离子

嗜热栖热菌重组锰超氧化物歧化酶的性质被引量：2: 2012年; 嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)wl的超氧化物歧化酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,采用Ni-NTA agarose亲和层析获得重组超氧化物歧化酶,比活力达565 U/mg.重组酶的相对分子质量为110.9 kDa,亚基相对分子质量为28.3 kDa,该酶为同聚四聚体蛋白.重组酶对氯仿-乙醇和SDS敏感,对H2O2不敏感,并且它的紫外最大吸收波长位于279 nm,判断其属于锰超氧化物歧化酶类型.1.0 mmol/dm3Mn2+对重组酶有激活作用,同浓度的其他金属离子Mg2+、Ca2+、Ba2+、Co2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶活力都有抑制作用,其中以Co2+的作用最强,抑制了约64%的酶活性.重组酶在70℃下处理1 h,保持原有活力的60%,即使在90℃下处理1 h,仍保持原有活力的35%.在pH值为4.0～11.0的缓冲液中25℃下处理1 h,保持65%以上的原始活力.由此可见,重组锰超氧化物歧化酶具有高的热稳定性和宽pH稳定性,在工业上具有巨大的应用潜力.; 李鹤宾席守民杨五彪叶子坚; 关键词：海洋生物学锰超氧化物歧化酶热稳定

类人胰岛素原多拷贝重复基因原核表达载体的构建与表达: 2014年; 根据大肠杆菌密码子偏好性,优化人胰岛素原基因序列,同时用2个赖氨酸取代C链。重叠PCR扩增法克隆优化的类人胰岛素原基因,PCR扩增引物中引入胰蛋白酶酶切位点和核酸限制性内切酶识别位点。经酶切、拼接获得类人胰岛素原多拷贝基因,并构建人胰岛素原基因多拷贝原核表达载体,转化感受态大肠杆菌诱导表达融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳,考马斯亮兰染色和融合蛋白染色条带光密度分析表明,含有4拷贝的类人胰岛素原重复基因序列原核表达载体的诱导表达类人胰岛素原效率最高,是单拷贝类人胰岛素基因原核表达载体表达效率的3倍左右。表达产物经质谱鉴定,确定为优化设计的类人胰岛素原,表明构建的多拷贝类人胰岛素原基因表达载体可应用于后续人胰岛素原的高效表达生产研究。; 罗联忠陈仲巍叶子坚; 关键词：原核表达

基因工程综合实训教学改革与创新被引量：5: 2012年; 为培养学生的岗位职业能力,实现与岗位零对接,基因工程综合实训以工作任务为线索确定教学内容,以产品生产流程为载体设计教学过程,以职业能力为依据改革教学方法,以发展性评价为手段,强化技能形成。实践证明,"基因工程综合实训"教学改革,有利于培养学生的动手能力和实践创新能力,有利于促进以职业能力培养为核心的教育。; 黄秀梅王雅英叶子坚; 关键词：基因工程综合实训产学研结合教学改革

脐带血间质干细胞生物学特性研究: 2012年; 本文旨在探讨从人脐带静脉血是否可分离出基质干细胞,如果可以,确定它们的特性,方法是采用不支持造血干细胞生长的培养基培养脐血单个核细胞,对其生物学特性进行研究。1资料与方法1.112份脐血采至厦门市中山医院,每份30～60ml。1.2基质细胞的分离与培养经新生儿父母同意。; 王英赵亚清高洪泉缪智辉叶子坚; 关键词：细胞生物学特性脐血单个核细胞脐带血基质干细胞新生儿父母

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叶子坚