刘晓肖
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 细菌果胶裂解酶基因在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质分析
- 果胶质广泛存在于高等植物,是植物细胞间质和初生细胞壁的重要组分,作为高分子聚合物,骨架为α-1,4糖苷键连接的聚半乳糖醛酸,部分甲酯化,在富含聚L-鼠李糖区域有木聚糖和阿拉伯半乳聚糖侧链,结构复杂。果胶质的存在使得人们在...
- 刘晓肖
- 关键词：果胶裂解酶毕赤酵母异源表达信号肽
- 文献传递
- 毕赤酵母新启动子GCW14在细胞表面展示CALB中的应用被引量：6
- 2013年
- 以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子P_(GCW14)与诱导型启动子P_(AOXI)、组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)4种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较这4个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示,P_(GCW14)的启动子活性与P_(AOX1)相当,最高菌体酶活力分别在发酵48 h和168h时达到694.8 U/g(Dry cell weight)和684.3 U/g(Dry cell weight),以P_(GCW14)为启动子的重组菌产酶周期大大缩短;组成型启动子P_(GAP)和P_(TEF1)的最高菌体酶活分别在发酵24 h和168 h达到266.7 U/g(Dry cell weight)和449.2 U/g(Dry cell weight),可见P_(GCW14)的启动子活力性要高于P_(GAP)和P_(TEF1)。此外,以P_(GCW14)为启动子,利用壁蛋白Gcw14p自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。
- 张轩薇叶燕锐刘晓肖鲁柳柳林影
- 关键词：巴斯德毕赤酵母启动子酵母表面展示
- 类芽孢杆菌碱性果胶裂解酶Pel在毕赤酵母中的高效表达被引量：6
- 2015年
- 本研究全基因合成了来源于类芽孢杆菌的碱性果胶酶基因pel,克隆至p HKA载体上,成功实现其在毕赤酵母GS115中的分泌表达;并对信号肽和启动子进行优化,使得摇瓶发酵诱导168 h果胶裂解酶酶活达到432.36 U/m L。初步测定了果胶裂解酶Pel的基本酶学性质,其最适反应温度和p H分别为60℃、10.0;在50℃下处理300 min裂解酶活力保留90%以上,而在60℃下处理210 min,酶活力剩余约50%;在p H 9~12的50 m M各缓冲液中处理酶液16 h,酶活力仍然保留90%以上,该酶耐碱性强,但在偏酸性缓冲液中处理该酶,酶活力有所下降;同时研究了二价金属离子对果胶裂解酶活性力的影响,Ca^(2+)对Pel发挥裂解作用是必需的,Fe^(2+)、Mg^(2+)、Ni^(2+)对Pel均有激活作用,而金属离子螯合物EDTA的存在则使酶活力完全丧失;该酶在碱性条件下较好的稳定性决定了其潜在的工业应用前景。
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- 关键词：毕赤酵母果胶裂解酶异源表达信号肽
