刘婷婷
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：重庆大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 柑橘黄龙病侵染相关抗病基因同源序列的克隆鉴定与表达分析被引量：1
- 2012年
- [目的]从黄龙病耐病寄主植物cDNA中筛选抗病基因相关序列并对其进行表达分析研究。[方法]根据已克隆的植物抗性基因表达产物NBS-LRR保守区域设计简并引物,以耐HLB的柑橘属柚cDNA为模板扩增RGAs,并进行实时荧光定量PCR。[结果]通过RFLP分析及克隆测序共得到5个NBS类抗病基因相似序列(RGAs)片段,在GenBank上登录号为HM777043～HM777047。通过Clustalx、DNAMAN等软件分析5个RGAs及其推导的氨基酸的相似性,结果显示它们均含有典型NBS-LRR类抗性基因所具有的保守区域:P-loop、Kinase-2a、GL-PLAL,其与已克隆的烟草N、亚麻L6、拟南芥RPS2、RPS5、RPP8、RPM1等抗病基因在保守区域氨基酸水平上的相似性为19.71%～42.86%。根据得到的序列设计特异性引物,对5个RGAs在HLB侵染过程中的表达进行定量PCR,结果显示嫁接病芽接穗后的8次连续采样中5个RGA的表达受到不同程度的调控。[结论]表明5个RGAs可能与黄龙病的侵染有关。
- 刘婷婷殷幼平林亚玉贤家旭陈世伟王中康
- 关键词：定量PCR
- 中国部分地区柑桔木虱体内感染Wolbachia的检测及其系统发育分析被引量：2
- 2010年
- Wolbachia是一种广泛分布于节肢动物体内的共生细菌,该共生菌经寄主卵的细胞质传播并参与多种寄主生殖活动调控,对节肢动物的物种进化有着重要意义并可能应用于害虫的生物防治。本研究以柑桔黄龙病(Huanglongbing,HLB)的主要传播媒介——柑桔木虱Diaphorina citri为研究对象,通过Wolbachia的16S rDNA、细胞分裂基因(ftsZ)、表面蛋白基因(wsp)的特异引物对来自于中国广西北海、广西柳州、广东深圳、广东阳春、福建福州5个地区的柑桔木虱进行PCR扩增,并对扩增产物进行克隆测序,与GenBank中相关序列进行比对分析,建立了柑桔木虱共生Wolbachia的系统发育树。结果显示上述5个地区的柑桔木虱均存在Wolbachia感染,通过Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因DNA序列的系统发育分析表明,5个地区的柑桔木虱体内的Wolbachia均属于B组;基于wsp基因的系统发育分析进一步表明5个地区的亚洲柑桔木虱体内的Wolbachia属于B组的Con亚组,且不同地区柑桔木虱体内的Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因序列差异不明显。研究结果为认识柑桔黄龙病传播媒介昆虫的进化及其综合防治提供了重要的参考依据。
- 王中康田圣超贤家旭陈世伟刘婷婷殷幼平
- 关键词：WOLBACHIAFTSZWSP系统发育柑桔黄龙病
- 基于16S rDNA序列的柑桔木虱体内共生菌多样性研究被引量：8
- 2011年
- 昆虫消化道内是一个复杂的微生态系统,有大量的微生物存在。这些微生物对寄主发育、营养吸收和防御方面都起着重要的作用。本文利用基于16S rRNA基因的PCR-RFLP指纹图谱法和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)的方法对柑桔黄龙病虫-媒柑桔木虱Diaphorina citri体内细菌菌群多样性进行了研究。经PCR-RFLP分析显示31条序列与变形菌门的假单胞菌科、肠杆菌科、黄单胞菌科、伯克氏菌科、立克次氏菌科和根瘤菌科细菌具有较高同源性。柑桔木虱内共生细菌的优势菌群依次为合胞体共生菌(syncytium endosymbiont)(同源性99%,5条序列,分离频率31%)、Candidatus Carsonella ruddii和Mycetocyte内共生菌(同源性98%,5条序列,分离频率31%)以及亚洲韧皮杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)和内共生菌Wolbachia。对柑桔木虱内生细菌16S rDNA V3区序列的PCR-DGGE分析,条带相似性的UPMAGA聚类分析表明,采自九里香Murraya paniculata的柑桔木虱内生细菌大多聚为一支,而来自柑桔的聚在另一支,说明寄主差异对柑桔木虱内生细菌菌群构成的影响大于地理位置的影响。将PCR-DGGE条带测序,序列经GenBank序列比对发现柑桔木虱内生细菌主要属于变形菌门假单胞菌科、立克次氏菌科、肠杆菌科、黄单胞菌科以及厚壁菌门链球菌科和芽孢杆菌科。合胞体共生菌(条带3-4)因其稳定存在于木虱体内且不随柑桔木虱寄主和地理位置的改变而变化,可能是柑桔木虱体内的优势共生菌;内共生细菌Wolbachia也在柑桔木虱内稳定存在,表明我国柑桔木虱感染Wolbachia是普遍现象。PCR-RFLP和PCR-DGGE两种方法相结合较好地反映了柑桔木虱内生细菌菌群的多样性,而且均显示出柑桔木虱内的合胞体共生菌是主要的优势菌群。
- 殷幼平刘婷婷田圣超胡修峰吴东王中康
- 关键词：柑桔木虱共生菌RFLP分析
