刘丕钢
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：哈尔滨工业大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 哈茨木霉几丁质酶cDNA基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：10
- 2005年
- 为研究哈茨木霉 (Trichodermaharzianum)的生物防治机制并获得与生物防治相关基因 ,通过构建哈茨木霉菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析 ,成功获得了哈茨木霉几丁质酶v(ChiV)基因的全长cDNA序列。该基因的编码框长度为 1194bp ,编码 397个氨基酸 ,理论分子量为 4 4kD。将该基因构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上 ,转化到酿酒酵母H15 8菌株中 ,通过Northern杂交检验后 ,确定该基因在酿酒酵母转录水平上表达。在 β_半乳糖诱导下 ,转化子在培养 6 0h时产生的酶活活性最高 ,几丁质酶V最适活性温度为 37℃ ,在pH 6和pH 8时活性较高。
- 刘丕钢杨谦
- 关键词：哈茨木霉几丁质酶
- 哈茨木霉UBc基因的克隆及表达
- 2008年
- 筛选哈茨木霉的cDNA文库,克隆到泛素结合酶基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析,该序列的长度为951 bp,包含一个455 bp的完整开放阅读框,编码157个氨基酸,其理论分子量为17.64ku.在氨基酸水平上,具有较高的保守性.以克隆载体pBK5313为模板,设计含有XhoI和BamH I酶切位点的引物,成功地获得包含完整阅读框的目的基因;将目的基因连接到表达载体pET28上,构建出含有泛素结合酶基因的重组子pET28-UBc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,成功地获得了大量的大肠杆菌转化子.通过对大肠杆菌转化子菌落PCR检验、质粒双酶切鉴定及测序分析,证实了成功转化.通过IPTG诱导,优化了泛素结合酶原核表达的条件,最佳诱导时间为4 h,诱导剂浓度对蛋白表达量影响不大.本研究为进一步研究哈茨木霉的生物防治作用机制,诠释蛋白质代谢途径提供基本技术支持.
- 刘丕钢杨谦赵云飞
- 关键词：哈茨木霉原核表达
- 热激蛋白的研究进展
- 目前,热激蛋白(heatshockprotein)的研究逐渐成为生命科学的热点话题.本文综述了热激蛋白的分类、功能、热激蛋白与热耐受、应用及研究现状,并对热激蛋白未来研究进行展望.
- 杨力明杨谦刘丕钢金香李呼伦
- 关键词：热激蛋白热激反应热耐受
- 文献传递网络资源链接
- 哈茨木霉cDNA文库构建及表达序列标签分析被引量：5
- 2005年
- 为了从分子水平上研究哈茨木霉的生物防治作用机制,构建了哈茨木霉菌丝体时期的cDNA文库并随机挑选部分克隆进行了测序分析.所构建的文库滴度为1.2×106pfu/m l,重组率为93%,插入片断平均长度>1.2 kb.对随机挑选的305条ESTs测序分析,其中67条EST为已知基因,58条为已知EST,其余的180条为新EST.在已知基因中,有9条ESTs与生物防治相关.从对文库的初步检验结果看,文库具有良好的质量,符合大规模测序的标准.通过ESTs研究是获得功能基因的有效手段.
- 刘丕钢杨谦
- 关键词：哈茨木霉CDNA文库生物防治
- 哈茨木霉Chiv基因的原核表达及优化
- 2008年
- 通过筛选哈茨木霉的DNA文库,克隆到Chiv基因的cDNA全长序列.以连接有哈茨木霉Chiv基因的质粒pBK902为模板,设计含有EcoRI和XhoI酶切位点引物,采用PCR方法扩增得到具有完整开放阅读框的目的基因;将目的基因连接到表达载体pET28上并转化大肠杆菌BL21菌株中,成功地获得了大量的阳性转化子.质粒通过EcoRI和XhoI酶切鉴定及测序鉴定,证明Chiv基因成功地转化到大肠杆菌中.重组大肠杆菌经IPTG诱导表达及SDS-PAGE检测后,发现特异的蛋白表达条带,其分子量为50 kDa左右.通过对诱导剂量与诱导时间等因素的优化,结果显示几丁质酶的最佳诱导时间为13 h,最佳诱导剂浓度为1 mM,为几丁质酶的工业化生产奠定基础.
- 刘丕钢杨谦王奇慧
- 关键词：哈茨木霉原核表达
- 重组腺病毒六邻体蛋白高效诱导表达条件的优化
- 优化腺病毒六邻体蛋白在重组菌M15/pQE31-Hexon菌株中诱导表达的最适条件.方法:采用单因素变量法,对重组菌M15/pQE31-Hexon菌株诱导表达过程中的4个基本影响因素,即重组菌M15/pQE31-Hexo...
- 杨力明杨谦刘丕钢曲章义李呼伦
- 关键词：基因表达
- 文献传递网络资源链接
- 生态价值的历史维度
- 该文以地球生态系统的生态价值发生学为参照系,考察历史上各种生态价值观的合理性和局限性.在仅以人与自然的生态'关系'或生态'性质'为标志的生态价值定义模式基础上,从人人微言轻其组成部分的地球生态系统'历史生成'的维度,揭示...
- 刘丕钢
- 关键词：生态学生态价值观生态伦理学生态哲学
- 文献传递
- 哈茨木霉超氧化物歧化酶基因克隆与特性分析被引量：1
- 2007年
- 构建了哈茨木霉菌丝的cDNA文库,并获得了3298条ESTs序列,对哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了哈茨木霉超氧化物歧化酶cDNA序列。cDNA序列全长751 bp,开放阅读框465bp,编码154个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为15.7kD。BlastP同源性分析表明该基因与麦角真菌(Claviceps purpurea)相似性最高为86%;与解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)相似性最低为72%。三级结构预测表明,其活性中心可能与His47,His49,His64,His72,His81,His121,D84位点有关,并构成其活性中心骨架。
- 杨力明杨谦刘丕钢王菁华李森
- 关键词：哈茨木霉超氧化物歧化酶基因克隆特性分析
- 哈茨木霉表达序列标签分析及几丁质酶基因的克隆与表达
- 为了从分子水平上研究哈茨木霉的生物防治作用机制，获得与生物防治相关的目的基因，本研究以哈茨木霉菌丝体为实验材料，构建出含有1．2×10<’6>个克隆的高质量哈茨木霉菌丝体时期的cDNA文库。通过对文库的质量检验，克隆的平...
- 刘丕钢
- 关键词：哈茨木霉表达序列标签几丁质酶基因生物防治基因克隆基因表达
- 文献传递
