何莹
- 作品数：8 被引量：30H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白芯片检测系统在肝癌诊断中的应用评价被引量：2
- 2006年
- 李敏易忠群陈娟何莹
- 关键词：肝肿瘤肿瘤标志物蛋白芯片
- 抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用被引量：9
- 2013年
- 目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Western blot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgG1和IgG2a,最高效价为1∶1 024 000,亲和力最高可达到1.3×109L/mol;选取2-D7经Western blot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。
- 郑怡麟何莹陈安易维京胡川闽
- 关键词：降钙素原原核表达单克隆抗体
- 产生抗人NGAL特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其产生的单克隆抗体与应用
- 本发明公开了产生抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及由其产生的单克隆抗体。所述杂交瘤细胞株由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列免疫Balb/c小鼠后，小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合...
- 陈安胡川闽何莹易维京
- 文献传递
- 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白真核表达载体的构建和鉴定
- 2013年
- 目的构建人NGAL重组蛋白真核表达载体并转染HEK293T细胞进行瞬间表达。方法从人白细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增NGAL基因并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/HisA中构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/His A-NGAL,经测序鉴定正确后用脂质体转染HEK293T细胞,用Western blot和ELISA方法鉴定表达产物。结果获得长度597bp的NGAL蛋白基因并构建pcDNA3.1/His A-NGAL真核表达载体,测序正确后转染,用Western blot和ELISA方法证实HEK293T细胞可以表达NGAL重组蛋白并分泌出胞。结论成功构建人NGAL重组蛋白真核表达载体,转染HEK293T细胞表达出相应蛋白,为下一步的研究奠定了基础。
- 何莹罗阳王英翔陈安胡川闽
- 关键词：中性白细胞载脂蛋白类明胶酶类逆转录聚合酶链反应
- 超敏CRP单克隆抗体制备及其ELISA体系的初步建立被引量：3
- 2013年
- 目的获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白。用pET22b-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-22b)作为免疫原免疫Balb/c小鼠并通过杂交瘤技术制备CRP特异性单克隆抗体,鉴定并筛选能够建立双抗体夹心ELISA系统的抗体配对。以pET28a-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-28a)作为标准品,对该系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行分析和评价。结果获得5株CRP单克隆抗体,筛选得到2株单克隆抗体可用于hs-CRP的ELISA免疫检测。通过鉴定2株抗体具有良好的效价和特异性。ELISA检测系统线性范围为0～166 ng/ml,灵敏度为5.2 ng/ml,批内CV≤6.43%,批间CV≤5.93%,平均回收率为98.9%,与Orion公司hs-CRP诊断试剂检测结果有良好的可比性。结论本研究制备了高效特异的CRP单克隆抗体并建立了能够检测hs-CRP的双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够达到hs-CRP的检测要求,为进一步研发和建立具有自主知识产权的免疫检测试剂盒及其他检测方法体系奠定了良好的基础。
- 王伟何莹韩起陈安胡川闽
- 关键词：超敏C-反应蛋白单克隆抗体
- 抗人NGAL单克隆抗体的制备及其定量检测方法的建立被引量：11
- 2013年
- 目的获得抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)特异性单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法通过杂交瘤技术制备了抗人NGAL高亲和力高特异性单克隆抗体,筛选能够结合天然NGAL的单克隆抗体并建立双抗体夹心ELISA系统。以重组人NGAL为检测对象,对系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行全面分析和评价。通过对肾病患病组和对照组尿液标本检测初步研究其在临床上的分析性能。结果获得了8株能稳定分泌抗人NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选得到F2和G2两株单克隆抗体可用于双抗夹心ELISA免疫检测。本方法线性范围为0～40 ng/ml,灵敏度为4.8 ng/ml,批内变异CV≤10.04%,批间变异CV≤9.76%,平均回收率为101.9%。临床标本检测显示肾病组与对照组有显著差异(P<0.01)。结论本研究制备了高亲和力特异性单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够检测体液标本中的天然NGAL蛋白,检测结果与临床基本符合,为其临床应用和推广奠定了基础。
- 何莹郑怡麟陈安易维京胡川闽
- 关键词：NGAL单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- NGAL测定在急性肾损伤诊断中应用的研究进展被引量：5
- 2014年
- 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)存在于中性粒细胞的过氧化物酶阴性颗粒中,并在人体组织细胞中广泛分布。近年研究发现,NGAL与肾脏关系十分密切,可能参与启动肾脏发育并发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明,急性肾损伤(AKI)时NGAL表达明显增高并分泌释放入体液中。尤其是尿液中的NGAL水平与肾脏损伤的程度密切相关且很早就表现出来,NGAL被认为是新的有效的AKI早期生化标志物。
- 何莹陈安胡川闽
- 关键词：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白急性肾损伤
- 急性肾损伤生化标志物NGAL免疫学检测体系及其初步临床应用
- 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)是Kjeldsen等人1993年研究中性粒细胞中92kDa的明胶酶,即MMP-9时发现的一种新...
- 何莹
- 关键词：急性肾损伤
- 文献传递
