高舜晔
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学理学化学工程更多>>
- 氨基酸突变对细胞色素P45 0BM-3羟基化吲哚能力的影响被引量：4
- 2008年
- 利用饱和定点突变技术对细胞色素P450 BM-3(A74G/F87V/L188Q)(PT)的168和435氨基酸位点分别进行随机突变,根据其羟基化吲哚生成的靛蓝在670nm处具有特殊吸收峰进行高通量筛选,获得了三个高于亲本酶(PT)的突变酶D168H、D168L和E435T。通过考察突变酶反应动力学参数、电子耦合率、热稳定性、最适pH以及区域专一性的变化情况,发现相对亲本酶而言所有的突变酶对底物吲哚的亲和力和催化效率都得到了不同程度的提高,其中突变酶D168H的kcat值比亲本酶提高了3倍多;突变酶D168H的电子耦合率比亲本酶大约降低了2倍,而突变酶D168L和E435T的电子耦合率却有轻微的提高;所有突变酶均在pH8.2附近表现出最大羟基化吲哚生产靛蓝的能力;突变酶D168H对吲哚的区域选择性得到了提高,主产物靛蓝从亲本酶的72%提高到了93%。另外,热稳定性实验表明:尽管突变酶D168H和D168L的热稳定性较亲本酶有所降低,但活力的大幅度提高并未对酶的热稳定性造成大的伤害。以上所有的结果为了解细胞色素P450 BM-3结构与功能关系提供了有用的信息,同时为进一步定向进化P450BM-3提高其功能特性提供了进化模板。
- 李红梅梅乐和高舜晔
- 关键词：细胞色素P450靛蓝
- P450BM-3突变酶生物转化苯乙烯的初步研究
- 通过定向进化得到能够环氧化生物催化苯乙烯的p450突变酶,该突变酶的催化产物环氧苯乙烷能在全细胞催化的条件下继续部分生物转化生成苯乙二醇．实验发现,该突变酶对苯乙烯催化的立体选择性不强,R:S接近于60:40;当底物浓度...
- 高舜晔李红梅贾昕梅乐和姚善泾
- 关键词：苯乙烯生物转化
- 文献传递
- 细胞色素P450BM3突变体催化羟基化的研究
- P450BM-3是从巨大芽孢杆菌中发现的具有脂肪酸羟基化活性的酶，它具有快速催化链长为C12-C22的饱和脂肪酸的单加氧酶活性，在生命活动、药物合成以及其它生物催化与转化过程中有重要的研究意义，但很多的研究表明，该酶存在...
- 高舜晔
- 关键词：P450生物催化苯乙烯细胞色素
- 文献传递
- P450BM－3突变酶生物转化苯乙烯的初步研究
- 通过定向进化得到能够环氧化生物催化苯乙烯的P450 突变酶，该突变酶的催化产物环氧苯乙烷能在全细胞催化的条件下继续部分生物转化生成苯乙二醇。实验发现,该突变酶对苯乙烯催化的立体选择性不强，R：S 接近于60：40;当底物...
- 高舜晔李红梅贾昕梅乐和
- 关键词：苯乙烯生物转化
- 文献传递
