顾晓龙
- 作品数：32 被引量：48H指数：4
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- 体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究被引量：1
- 2014年
- 为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。
- 戴建军吴彩凤张树山顾晓龙张廷宇吴志强张德福
- 关键词：植酸酶
- 甲基化转移酶抑制剂对克隆猪胚胎早期发育的影响及克隆猪隐睾的研究
- 首例体细胞核移植克隆猪虽已诞生多年,但核移植效率仍然很低。体细胞核移植多采用体外成熟的MⅡ期卵母细胞去核后作为受体卵。但由于猪卵母细胞体外成熟体系还不够完善,所以仍需进一步优化。同时,重构胚胎的不完全重编程会导致附植前胚...
- 顾晓龙
- 关键词：克隆猪红景天多糖体细胞核移植甲基化隐睾
- 文献传递
- RG108处理对猪胎儿成纤维细胞甲基化水平及体细胞核移植胚胎发育的影响
- 本研究使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响.使用0.005,0.05,0.5和5 μM RG108四种浓度分别处理细胞2...
- 顾晓龙曾宪垠张德福张廷宇戴建军吴彩凤张树山徐利李翔韩晓李芳芳
- 关键词：甲基化核移植
- 单层细胞共培养对猪去卵丘卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响
- 2011年
- 本试验比较观察第一极体(The first polar body,PbⅠ)、Oosight imaging system观察和hocchst33342染色法对第2次减数分裂中期(Metaphase Ⅱ,MⅡ)卵母细胞判定结果的相关性分析,并探讨卵巢皮质细胞(porcine ovarian cortex cells,pOCCs)、猪输卵管上皮细胞(porcine oviductal epithelial cells,pOECs)和猪卵丘颗粒细胞(porcine cumulus cells,pCCs)等3种单层细胞体外共培养体系对猪去卵丘卵母细胞(cumulus cells denuded oocytes,Dos)体外成熟(in vitro maturation,IVM)和孤雌发育的影响。结果显示:(1)Oosight imaging system判定卵母细胞成熟的结果与hocchst33342染色法判定的结果有很强相关性(R=0.973,P<0.01,N=90);(2)pOCCs单层细胞共培养体系中猪去卵丘卵母细胞成熟率显著高于pOECs((52.5±0.30)%vs(43.8±2.18)%,P<0.05),且这2组成熟率显著高于其余各组(P<0.05);Dos在3种单层细胞共培养体系培养后,成熟卵母细胞GSH含量较非共培养组都能显著升高(P<0.05),pOCCs组GSH含量最高((7.1±0.32)pmol/卵);(3)成熟后的Dos经孤雌激活,pOCCs组和pOECs组卵裂率和囊胚率都显著高于其余2组(P<0.05)。
- 顾晓龙孟祥黔吴彩凤戴建军张廷宇谢一妮吴志强刘亮曾宪垠张德福
- 关键词：共培养体外成熟
- 克隆家畜安全性评估及其产业化研究进展
- 2013年
- 综述了克隆牛、猪和羊的研究现状、克隆动物的生长与繁殖等生物学特性以及克隆动物的再克隆等最新研究进展,为克隆家畜的产业化发展和安全性评估提供参考。
- 张德福戴建军张廷宇吴彩凤张树山顾晓龙
- 关键词：安全评估
- 玻璃化快速冷冻仪在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用被引量：3
- 2014年
- 为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,应用玻璃化快速冷冻仪(Vit-Master)进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率[(21 345±l768)℃/min]远远高于普通液氮降温速率[(11 982±1 936)℃/min];各组冻后形态完整率无显著差异;冻后存活率为:使用玻璃化快速冷冻仪的不同浓度保护剂组[A':(57.87±10.66)%、B':(76.5±10.33%)、C':(79.07±14.90)%和D':(81.94±6.98%)]均分别高于对应的不使用玻璃化快速冷冻仪组[A:(49.73±2.91)%、B:(60.63±12.45)%、C:(71.33±14.38)%和D:(78.50±7.40)%],但均无显著差异,B'和C'组均高于C和D组,但差异不显著,A和A'组均显著低于B'、C'和D'组。因此,通过使用Vit-Master冷冻装置提高冷冻速率,可以降低冷冻保护剂使用浓度并提高冻后存活率。
- 徐利戴建军张廷宇吴彩凤李维杰张树山顾晓龙李翔韩晓李芳芳
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻
- 体细胞克隆小型猪主要性能指标的测定被引量：2
- 2013年
- 通过与普通巴马小型猪的生长发育规律、繁殖性能、生理生化指标和屠宰肉质性能等的比较,了解小型克隆猪的主要性能指标,以期为克隆猪安全性评估及其产业化健康发展提供借鉴。结果表明,体细胞克隆巴马小型猪与普通猪的各项性能指标差异不显著。这种相似性在一定程度上说明了体细胞克隆猪的产业健康性和安全性。
- 张德福陈会兰顾晓龙戴建军张廷宇张树山吴彩凤吴斌
- 关键词：克隆猪性能指标安全性
- 纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响被引量：3
- 2013年
- 为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。
- 吴斌戴建军张廷宇张树山吴彩凤顾晓龙陈会兰张德福马恒东
- 关键词：精子
- 体细胞克隆猪隐睾症形成机理研究
- 引言/目的 目前认为体细胞核移植过程中供体核的不完全重编程和异常的表观遗传修饰是造成克隆效率低下和克隆动物发育缺陷的主要原因.本课题组于2010年获得的体细胞克隆猪种有两头患有隐睾症,这为反向探讨SCNT动物异常形成的原...
- 戴建军李芳芳吴彩凤张树山张德福顾晓龙
- 纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响被引量：7
- 2013年
- 在冷冻稀释液中分别添加分数为1%、5%、10%、15%、20%的纳米化红景天多糖(Nonomaterials rhodiola sachalin ensis polysaccaride,NRSP)溶液,以添加6mg/L红景天多糖(Rhodiola sachalin ensis polysaccaride,RSP)为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响。结果表明,添加体积分数为15%NRSP组的精子活力(0.69)、顶体完整率(51.42%)、质膜完整率(25.95%)均高于其他组,并显著高于空白组(P<0.05)。此外添加15%NRSP组的解冻后直线运动精子百分比(46.33%)要显著高于其他各组(P<0.05);添加6mg/L RSP组丙二醛(MDA)浓度最低(10.83±0.39)μmol/L,并且显著低于空白组(31.85±1.36)μmol/L,(P<0.05),但与15%的NRSP组(11.60±0.42)μmol/L无显著差异(P>0.05)。添加20%的RNSP组超氧化物歧化酶(SOD)活力最高(343.05±19.64)μ/mgprot,显著高于其他添加组(P<0.05)。精子活力、顶体完整率、质膜完整率之间存在显著的正相关关系(P<0.05),而精子活力和顶体完整性与MDA浓度呈显著负相关(P<0.05),与SOD活力呈显著正相关(P<0.05),质膜完整率与两者含量相关性不显著(P>0.05)。
- 韩晓戴建军张树山张廷宇吴彩凤顾晓龙李翔徐利李芳芳张德福
- 关键词：红景天多糖纳米化猪精液冷冻保存
