韩雪峰
- 作品数：25 被引量：74H指数：7
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- 大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制被引量：10
- 2009年
- 目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa(10-7 mol/L)分别处理间质细胞6、12、24、36、48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059(50μmol/L)和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化。结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性。GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45%(P<0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P<0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平。加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61%(与GnRHa组相比,P<0.05),睾酮水平也随之显著下降45%(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成。
- 柳海燕陶晓倩时姗姗张艳梅卢坤刚韩雪峰崔英霞戈一峰黄宇烽李晓军姚兵
- 关键词：促性腺激素释放激素激动剂ERK1/2间质细胞
- 光照应激对SD大鼠胃GnRH表达的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺素释放素(GnRH)的表达变化.方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分别取光照1d,2d,3d,4d,1wk,2wk,3wk,4wk和相应对照组的胃组织,采用免疫组化和Real-timePCR法检测GnRH在各时间段大鼠胃组织中的定位和蛋白及mRNA表达变化.结果:GnRH阳性细胞广泛分布于大鼠胃壁上皮细胞,免疫反应阳性细胞在实验组和对照组中定位没有差异.实验组的GnRH平均灰度值高于其相应的对照组,光照2-4wk时,实验组与对照组相比差异均显著(2wk:105.7±7.9vs77.4±7.2,P<0.05;3wk:97.4±7.7vs77.6±6.6,P<0.05;4wk:93.2±2.1vs77.9±4.0,P<0.05).实验组大鼠胃的GnRHmRNA水平高于对照组,与对照组相比,持续光照2-4wk时,实验组大鼠胃的GnRHmRNA增加具有显著性差异(2wk:1.01±0.10vs0.80±0.01,P<0.05;3wk:0.95±0.07vs0.81±0.01,P<0.05;4wk:0.94±0.05vs0.82±0.01P<0.05).结论:光照应激可以影响消化道中GnRH的表达,GnRH以自分泌和旁分泌的机制对消化系统产生调节作用.提示GnRH除参与消化道正常生理功能外,可能还是一种参与应激反应的激素.
- 黄祝恽时锋卢坤刚韩雪峰张艳梅蒋超姚兵
- 关键词：光照应激免疫组化实时荧光定量PCR
- 光照应激对雄性大鼠生殖相关参数的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察比较光照应激状态下不同应激时间段SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立SD大鼠的光照应激模型分为光照应激短期(2d、3d、4d、7d)和光照应激长期(14d、21d、28d),并分别取应激状态下SD大鼠睾丸、附睾称重,对附睾尾精子计数,HE染色观察睾丸结构,应用免疫组织化学和westernblot分析3β-HSD表达,比较各实验组和对照组间上述指标的变化。结果短期光照应激组(2d、3d、4d、7d)与对照组相比,大鼠体重、睾丸重量、附睾重量、精子数量没有明显变化(P>0.05),HE染色显示睾丸结构无明显变化,免疫组化和western blot显示3β-HSD表达无明显变化。长期光照应激组与对照组相比,大鼠重量、睾丸和附睾重量都有明显增加。与对照组相比,14 d实验组的附睾重量有显著性差异(P<0.05);21 d、28 d实验组的睾丸重量有显著差异(P<0.05),21 d、28 d实验组的体重、附睾重量和精子相对计数都有极显著差异(P<0.01)。HE染色显示睾丸内生精小管变粗,管腔内生精细胞增多,免疫组化和western blot显示长期应激组14 d的3β-HSD相对表达量增加20.3%,有显著性差异(P<0.05);21d和28d实验组3β-HSD的相对含量分别增加30.4%和43.3%,差异极显著(P<0.01)。结论短期光照应激不能破坏大鼠机体内稳态的调节机制,对生殖的影响并不明显;而长期处于光照应激状态下的雄性大鼠,超出机体内稳态的调节能力,对生殖的影响不仅表现在体重、睾丸、附睾和附睾尾的重量增加,而且精子相对计数及睾丸结构都发生相应变化,3β-HSD表达量也明显增加。提示光照是影响大鼠生殖功能的一个因素。
- 时姗姗柳海燕陶晓倩韩雪峰卢坤刚张艳梅姚兵
- 关键词：光照应激生殖
- 急性疼痛应激状态下SD大鼠睾丸内膜联蛋白A5的表达变化
- 2009年
- 目的观察急性疼痛应激状态下,睾丸中annexin 5表达变化。方法福尔马林注射建立急性疼痛模型,分别在注射后1 h,6h,24 h,72 h取睾丸,免疫组织化学和western blot分析annexin 5免疫定位和蛋白表达,荧光定量PCR方法检测annexin 5 mRNA水平变化。结果免疫组化显示,annexin 5在急性应激组和对照组中定位在间质细胞、支持细胞,应激组与对照组相比定位无明显的变化。Western blot分析发现疼痛应激1 h和6 h后,annexin 5的表达分别降低16.9%和12.8%,而在疼痛应激24 h和72 h后,annexin 5的表达分别升高33.7%和25%。组间比较发现,在1 h和24 h时annexin 5表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量方法检测annexin 5 mRNA水平变化,发现疼痛应激1 h和6 h annexin 5 mRNA相对含量降低,随后在24 h和72 h升高,但各组间差异均无统计学意义。结论急性疼痛应激主要影响annexin 5蛋白的表达,而不影响annexin 5的转录。Annexin 5作为睾丸应激因子之一可能介导了应激对生殖功能的抑制作用。
- 韩雪峰卢坤刚张艳梅时姗姗柳海燕陶晓倩姚兵
- 关键词：应激膜联蛋白A5
- 大鼠睾丸间质细胞中NO供体调控睾酮分泌的机制
- 2010年
- 目的研究一氧化氮(NO)供体(硝普钠,SNP)对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响及其机制。方法大鼠睾丸间质细胞原代培养12 h后,用不同浓度的SNP(0,10-8,10-6,10-4mol/L)分别处理4、8、12 h,用化学发光法检测细胞上清睾酮(T)水平的变化;western blot法分析间质细胞内3β-HSD(3β-羟基类固醇脱氢酶)和annexin 5(膜联蛋白5)的变化。结果10-4mol/L的SNP处理间质细胞8 h后,睾酮水平较对照组上升23%(P<0.05);10-6mol/L的SNP处理12 h后,睾酮水平较对照组上升28%(P<0.05),10-4mol/L的SNP处理12 h,较对照组升高37%(P<0.05)。western blot结果显示,SNP的刺激对3β-HSD表达无显著影响。不同浓度SNP刺激间质细胞4 h和8 h后,annexin 5表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05);10-6mol/L的SNP刺激12 h后,annexin 5表达量达到最高水平,较对照组升高55%(P<0.05);10-4mol/L的SNP处理12 h,annexin 5表达量较对照组升高48%(P<0.05)。结论SNP在低浓度范围内促进大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮,且睾酮的分泌对SNP具有时间和剂量的依赖性;SNP刺激睾酮分泌的过程并非通过3β-HSD介导,但可能与annexin 5表达有关。
- 柳海燕陶晓倩时姗姗林钗英韩雪峰姚兵
- 关键词：一氧化氮硝普钠睾丸间质细胞
- 促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响被引量：15
- 2008年
- 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。
- 戈一峰王大勇蒋超张艳梅韩雪峰卢坤刚崔英霞黄宇烽黄祝姚兵
- 关键词：GNRH类似物荧光定量PCR大鼠睾丸间质细胞
- 急性疼痛应激对SD大鼠胃及颌下腺组织annexin5表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究在福尔马林致炎的急性疼痛应激状态下SD大鼠胃及颌下腺组织膜联蛋白5(annexin 5)表达的影响。方法单侧后足底皮下注射0.2 m l 5%福尔马林溶液,建立SD大鼠的急性疼痛应激模型,对照组注射等量的生理盐水,分别取对照组和应激组SD大鼠胃及颌下腺组织通过western b lot分析急性应激状态下大鼠胃及颌下腺组织annexin 5表达的变化。结果在急性疼痛应激状态下,1 h和72 h组胃组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和24h组annexin 5表达水平显著升高(P<0.01);1 h和24 h组颌下腺组织annexin 5表达水平与对照组相比均无显著性差异(P>0.05),而6 h和72 h组显著升高(P<0.01);结论annexin 5参与了胃及颌下腺对急性疼痛应激的反应,急性疼痛可能通过annexin 5影响胃及颌下腺的功能。
- 卢坤刚韩雪峰张艳梅姚兵
- 关键词：炎性疼痛福尔马林MRNA
- 促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD的表达影响被引量：10
- 2009年
- 目的:探讨阿拉瑞林(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达的影响.方法:建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa(分别为1×10-5,1×10-6,1×10-7mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达变化情况.结果:间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10-5mol/L时,anenxin5的表达量显著升高了69.2%(P<0.01),3β-HSD的表达量也升高了25.2%(P<0.05);当GnRHa的终浓度为1×10-6mol/L和1×10-7mol/L时,anenxin5的表达量分别升高了61.5%(P<0.05)和16.64%(P>0.05),3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7.7%(P>0.05)和2.22%(P>0.05).结论:GnRHa在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用.
- 蒋超韩雪峰张艳梅卢坤刚黄祝黄宇烽姚兵
- 关键词：促性腺素释放激素莱迪希细胞膜联蛋白A53Β-HSD
- 慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响
- 2010年
- 目的观察不同时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化。方法建立坐骨神经分支选择性损伤模型。经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变。结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化。28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05)。HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少。Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05)。结论慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能。
- 卢坤刚时姗姗韩雪峰张艳梅柳海燕陶晓倩姚兵
- 关键词：疼痛应激生殖
- 促性腺激素释放激素激动剂对In-R1-G9细胞中胰升血糖素表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRH agonist,GnRHa)对In-R1-G9细胞内胰升血糖素表达的调控作用。方法分别用终浓度为0.1 nmol/L、10 nmol/L、1000 nmol/L的GnRHa处理培养的In-R1-G9细胞2 h(对照组用生理盐水处理),通过Western blot和荧光定量PCR技术观察胰升血糖素在蛋白水平及转录水平的变化。结果与对照组相比,低浓度的GnRHa(0.1nmol/L)使胰升血糖素在蛋白水平和转录水平的表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);而高浓度的GnRHa(10 nmol/L、1000 nmol/L)能明显增强胰升血糖素的表达(P<0.05或P<0.01)。结论一定浓度的GnRHa能增强In-R1-G9细胞内胰升血糖素的表达。
- 张艳梅陶晓倩时姗姗柳海燕卢坤刚韩雪峰崔英霞戈一峰李晓军姚兵
- 关键词：胰升血糖素
