陈芳红
- 作品数：12 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证
- 2014年
- 目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。
- 李崭李涛陈芳红刘雄周育森王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌
- KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
- 2013年
- 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
- 刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧
- 关键词：细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶Β内酰胺类抗生素
- 蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用
- 本发明公开了蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。本发明提供如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2...
- 王慧李涛王琴韩燃李崭陈芳红
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 z0986-z1444双缺失突变株构建被引量：1
- 2017年
- 目的采用Red重组方法敲除肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 z0986和z1444基因,构建双缺失突变株。方法首先构建z0986、z1444打靶片段;其次以电击法转化感受态细胞,之后通过PCR鉴定所得菌株;最终所得阳性单克隆测定生长曲线。结果 z1444单基因缺失突变株(Δz1444/933)及z0986-z1444双基因缺失突变株(Δz0986/Δz1444/933)构建成功,其生长曲线与野生型EHEC O157∶H7差异均无统计学意义。结论 z0986与z1444基因缺失对EHEC的生长无影响。构建Δz1444/933及Δz0986/Δz1444/933为深入研究z1444基因的功能及作用机制奠定了基础。
- 苏莉王建新陈芳红李崭黄洁李涛王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌RED重组系统
- 泛素连接酶NleG家族分子功能的初步研究
- 泛素化(Ubiquitylation)作为一种蛋白的翻译后修饰,同磷酸化和乙酰化一样,调控众多生物进程,启动细胞快速应答周围环境的改变。泛素化最初是在真核细胞中发现的,真核宿主细胞具有典型的泛素化系统:泛素化是一个连续的...
- 陈芳红
- 关键词：EHECEPECE3泛素连接酶IL-8
- 文献传递
- B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。
- 罗森陈芳红李涛王慧
- 关键词：肉毒毒素原核表达
- 肠出血性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统ATP水解酶escN基因突变株的构建
- 2015年
- 目的:利用λ噬菌体的Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的Ⅲ型分泌系统ATP水解酶Esc N,构建大肠杆菌esc N基因缺失突变株。方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别酶切连接于p UC19-kan质粒上,PCR获得中间嵌合卡那霉素抗性基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒p KD46和p CP20介导的重组技术敲除esc N基因,并去除抗性标记;PCR及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的esc N基因,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:构建了Ⅲ型分泌系统缺陷菌株,为进一步研究Ⅲ型分泌系统因子在肠出血性大肠杆菌致病过程中的作用奠定了基础。
- 陈芳红李涛王慧
- 关键词：RED重组系统
- 蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途
- 本发明公开了蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途。本发明提供了蒽贝素或蒽贝素类化合物的如下新用途：(1)对β-内酰胺酶的酶活具有抑制作用，特别是对新德里金属β内酰胺酶-1广泛的抗生物水解活性具有突出的抑制作用；(2...
- 王慧李涛陈芳红刘坤
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌效应因子z2151的E3泛素连接酶活性鉴定
- 2016年
- 目的利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体p ET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性。结果亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白,其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链,即有E3泛素连接酶活性;而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性。结论原核表达质粒p ET22b-z2151构建成功,目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力,并且针对不同的E2酶亲和力不同,这些都为后续功能机制研究奠定了基础。
- 陈芳红李涛李崭孙超尘王慧
- 关键词：基因工程泛素连接酶
- 蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用
- 本发明公开了蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。本发明提供如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2...
- 王慧李涛王琴韩燃李崭陈芳红
- 文献传递
