陈筱薇
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省博士启动基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 对不同表达系统的猪圆环病毒2型Rep蛋白的电泳特性分析被引量：1
- 2010年
- 利用特异性引物从圆环病毒2型(PCV2)毒株克隆出Rep基因,并将其插入到原核表达载体pET28 a和杆状病毒转移载体pFastbacHT(B)上,利用大肠杆菌BL21(DE3)株原核系统以及Bac-to-Bac杆状病毒系统表达Rep蛋白.Western-blotting表明,原核和真核表达系统均能表达出圆环病毒2型Rep蛋白,电泳分析表明,不同系统表达得到的Rep蛋白有不同的电泳特性,揭示Rep蛋白存在翻译后修饰.
- 张停婷程晓亮林文耀陈筱薇张桂红廖明樊惠英
- 关键词：圆环病毒2型REP蛋白真核表达杆状病毒表达系统
- 利用SUMO系统高效表达可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白被引量：11
- 2012年
- 利用pCold-SUMO可溶性原核表达载体,构建表达猪圆环病毒2型缺失核定位信号肽的Cap基因的重组表达载体pCold-SUMO-dCap,并将其转入Arctic-Express表达菌株中15℃低温诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析,结果表明SUMO-dCap融合蛋白获得了高效表达,可溶性SUMO-dCap融合蛋白约占总融合蛋白的50%;用NI-NTA树脂纯化可溶性的融合蛋白,然后利用SUMO蛋白酶特异性去除SUMO标签,从而得到不含任何标签的dCap蛋白,进一步的Western-blot分析表明,表达的dCap蛋白具有良好的反应原性.
- 陈春丽郭宇飞陈筱薇叶昱王强廖明樊惠英
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白原核表达
- 双表达H9N2禽流感病毒HA基因的假型重组杆状病毒系统的构建
- 2011年
- 以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-G,得到重组质粒pFastBac-G-H9-HA.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-G-H9-HA.利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Dual-H9-HA.间接免疫荧光实验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达HA蛋白.免疫电镜观察结果表明,HA蛋白可以在该重组杆状病毒表面展示.
- 林文耀樊惠英程晓亮陈筱薇叶煜廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因
- 杆状病毒双表达载体流感疫苗诱导H9N2亚型禽流感病毒致死性攻击的BALB/c小鼠获得完全保护
- H9N2亚型禽流感病毒在禽类中广泛流行,虽然它的致病性比较温和,却能引起鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鹅、野鸡、鹧鸪和鸽等禽类发病,甚至传染给包括人在内的哺乳动物。因此,迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防H9N2亚型禽流感。以杆...
- 林文耀樊惠英程晓亮叶昱陈筱薇廖明
- 关键词：HA基因
- 表面展示鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建
- 2012年
- 以鸡传染性支气管炎病毒M41毒株基因序列为模板,利用PCR方法扩增膜定位信号缺失的S1基因(dS1),将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将S1及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTMDual,得到重组质粒pFastBac-gp64-dS1.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-gp64-dS1,提取重组Bacmid质粒,以PCR验证其正确性.将阳性重组Bacmid质粒利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-dS1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以Sf9昆虫细胞膜表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白.
- 陈筱薇樊惠英林文耀程晓亮叶昱陈春丽廖明
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒M41S1蛋白重组杆状病毒
- 杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中的应用
- 本研究旨在应用杆状病毒表达系统为载体，构建了H9N2亚型禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：一方面可以在杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，另一方面杆状病毒基因组中所携带的HA基因也通过转导的作用，使其在动物细...
- 林文耀张杰程晓亮叶昱陈筱薇樊惠英廖明
- 关键词：禽流感疫苗研制杆状病毒HA蛋白
- 浅谈鹅病的综合防治
- 2007年
- 目前制约养鹅业发展的主要病害有小鹅瘟和鹅的鸭瘟等。这些疫病严重影响了鹅的健康和养鹅业的生产效益,对规模化饲养鹅的影响尤为严重。由于养鹅户所在的环境各不相同，养殖的规模大小不一，加上鹅只还存在着个体体质和免疫能力上的差异，有时单靠其中的一种或几种方法很难达到理想的防治效果。因此，要预防各类疾病的发生，就必须坚持“预防为主、
- 曹宗喜潘全会陈筱薇张桂红
- 关键词：鹅病养鹅业免疫能力小鹅瘟规模化
- 表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组假型杆状病毒对SPF鸡的免疫原性分析被引量：3
- 2013年
- 本研究旨在对本实验室所构建的表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)的免疫保护效果进行探讨。以2×109 pfu剂量的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)腿部肌肉注射7日龄SPF雏鸡,21日龄加强免疫1次。血清抗体检测表明,灭活疫苗组诱导的IBV特异性ELISA抗体水平最高,极显著高于其它试验组(P<0.01),其次是Prime-boost组(先免疫Ac-V-S1后免疫poly156S1亚单位疫苗)和Ac-V-S1组;但在细胞免疫水平方面,Ac-V-S1免疫组表现出较强的优势,免疫应答反应极显著的高于其它免疫组(P<0.01),然后是Prime-boost组和杆状病毒野毒对照组。二免后2周用IBV M41强毒进行攻毒保护试验。结果表明,Ac-V-S1、Ac-V-EGFP、poly156S1亚单位疫苗组的保护率分别为55%(6/11)、27%(3/11)、37%(4/11),而采用Prime-boost免疫组的保护率为64%(7/11),略低于免疫保护率为73%的常规灭活疫苗(8/11)。结果显示:重组杆状病毒Ac-V-S1具有较好的免疫效果,而且在细胞免疫方面具有较强优势,可以弥补重组杆状病毒在体液免疫水平的不足,而Prime-boost免疫策略能更进一步提高重组杆状病毒免疫效果,为将重组杆状病毒发展为经济有效的IBV基因工程疫苗奠定基础。
- 樊惠英罗琼陈筱薇叶昱辛朝安廖明
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组杆状病毒S1基因
- 表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建
- 2011年
- 利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子,gp64及dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-V,得到重组质粒pFastBac-dCap-V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞,获得的重组穿梭质粒Bacmid-dCap-V,经脂质体转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-dCap-V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达dCap蛋白.
- 程晓亮林文耀叶煜陈筱薇严常燕廖明樊惠英
- 关键词：猪圆环病毒2型
