金宏伟 作品数:10 被引量:24 H指数:3 供职机构: 厦门大学生命科学学院生物化学与生物技术系 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 厦门市科技计划项目 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
柱层析和MALDI-TOF质谱技术筛选食道癌血清标志多肽 被引量:3 2009年 目的探索建立柱层析和基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALD I-TOF)质谱技术筛选食道癌血清标志多肽的方法。方法选用Sephadex G-100葡聚糖作为分离介质,自制小型分离层析柱,分别采集30名健康人、30例食道良性疾病患者和30例食道癌患者血清进行多肽分离,结合MALD I-TOF质谱仪鉴定。结果通过多肽质荷比(m/z)比对技术,筛选出4种诊断食道癌疾病的潜在血清标志多肽,m/z分别为7 651.76、8 091.34、9 264.98、11 784.79。结论柱层析和质谱技术筛选食道癌血清标志多肽所建立的分析技术不仅快速简单,而且同样适合于筛选其他人类重大疾病的血清标志多肽或酶蛋白。 金宏伟 杨光 黄河清关键词:多肽 柱层析 食道癌 蛋白质组技术研究人血清功能蛋白质的新进展 被引量:1 2008年 金宏伟 曾新华 黄河清关键词:蛋白质 蛋白质组技术 标志物 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究人血清转铁蛋白稳定性及裂解产物 被引量:5 2007年 制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解产物。以乙腈溶液作为洗脱相,发现铁饱和HTF在RP-HPLC分离纯化过程中产生裂解现象。铁饱和HTF和HTF-2Fe3+经乙腈处理后均能产生不同分子量的短肽裂解产物,指出HTF结构稳定性与络合铁离子数量有关。铁组分改善了HTF分子结构的稳定性。采用比对法,研究在乙腈作用下HTF裂解成为各种各样短肽的规律,初步阐明其裂解机理。在乙腈作用下,HTF可能通过蛋白质去折叠途径,形成不同多聚态HTF或多肽裂解产物。推测目前用于临床诊断先天性糖基化紊乱(CDG)和慢性酒精滥用(CAA)疾病低准确率的起因可能是受HTF裂解产物或多聚体的干扰。 卓慧钦 金宏伟 黄河清 黄慧英 蔡宗苇关键词:血清转铁蛋白 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 反相高效液相色谱 反应温度和pH影响魟鱼肝铁蛋白释放铁速率的研究 被引量:2 2008年 小批量制备电泳纯魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin of Daryatisakajel,DALF).在不同反应温度和pH条件下,研究温度和pH对DALF释放铁速率、动力学和级数转换特性的影响.实验结果表明,随着反应温度递增(30-45℃),DALF释放铁的速率明显不同,但DALF释放铁的全过程均呈复杂途径.通过提高反应温度和增加释放铁的速率途径均无法使DALF释放铁的途径由复杂转换为简单.不同pH的反应介质直接影响DALF释放铁的速率,在弱酸介质中,DALF释放铁的速率明显高于在弱碱介质中.在pH5.0条件下,DALF以一级反应动力学的全过程途径释放铁,使释放铁的复杂途径趋于简单化.在生理pH或中性介质条件下,铁蛋白亚基之间相互作用强度起着控释DALF释放铁速率且表现出复杂动力学特性. 胡晓慧 陈旭 黄清育 金宏伟 黄河清关键词:铁蛋白 PH 动力学 海兔中枢神经系统多肽调控作用研究进展 2007年 金宏伟 陆永进 黄河清关键词:中枢神经系统 海兔 口腔神经节 多肽 后鳃亚纲 脑神经节 MALDI-TOF质谱和电子光谱技术研究人血清铁蛋白释放铁的动力学 被引量:5 2004年 采用 MALDI-TOF质谱技术研究血清混合蛋白质的组成 ,用电子光谱技术分析人血清铁蛋白 ( Serumferritin,SF)释放铁的动力学过程和规律 .结果表明 ,在人血清中 ,以 Na2 S2 O4 为电子供体时 ,SF释放铁的速率极快 ,无法采用常规分光光度法进行检测 ;以抗坏血酸为电子供体时 ,SF以一级反应动力学方式释放铁 ,认为人血清中其它蛋白质协助或参与调控铁蛋白进行快速释放铁反应 。 颜利 黄河清 金宏伟 陈平 杨天赐 王群力关键词:动力学 人胎盘膜铁蛋白同类型双亚基功能、铁核结构和释放铁动力学研究 被引量:2 2011年 以人胎盘组织为实验材料,小批量制备电泳纯人胎盘膜铁蛋白(HPMF),对其结构与功能进行研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术揭示,HPMF蛋白壳由分子量分别为15 kDa(MF15)和20 kDa(MF20)的亚基组成,其中MF15蛋白含量约为MF20的3倍。经肽质量指纹图谱(PMF)技术鉴定,发现PHMF的MF15和MF20亚基与人铁蛋白(HF)L亚基均具有较高的同源性,提出HPMF由单类型但分子量不同的双亚基组成的新观点。在选用基质辅助电离激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术直接分析HPMF亚基稳定性过程中,获得5个质荷比(m/z)值为5071.25,9962.51,15131.55(MF15),19936.40(MF20)和20147.61的特征质谱峰,其对应的亚基分子式分别为[MF15]3+,[MF20]2+,[MF15]+,[MF20]+和[MF20+Fe]+。ICP-MS分析发现,HPMF铁核中的铁和无机磷酸盐(Pi)含量仅为85Fe3+/HPMF和15Pi/HPMF,其中Fe3+/Pi比值约为5.72,明显低于绝大多数哺乳动物铁蛋白,但却高于细菌铁蛋白(BF)。在释放铁动力学方面,HPMF以一级反应动力学途径释放完整铁核中的铁量,其释放时间约需750 min,其释放铁的速率慢于马脾铁蛋白(HSF)和猪胰铁蛋白(PPF)(约60 min)。根据HPMF完全不同于大部分哺乳动物、植物和细菌铁蛋白的新颖结构与功能,提出HPMF在母体和胎儿之间中起着释放、储存和转运铁的复合生理功能的铁转运模型。 罗联忠 金宏伟 蔡宗苇 黄河清魟鱼肝铁蛋白释放铁的动力学研究 被引量:5 2004年 选用鱼肝为研究材料,在混合蛋白质体系下,研究鱼铁蛋白(LiverferritinofDasyatisakajei,DALF)释放铁的动力学过程和规律.实验结果表明,在混合蛋白质体系中,以抗坏血酸为电子供体的条件下,DALF以简单的1级反应动力学方式进行释放铁的反应;而采用Na2S2O4为电子供体时,DALF却以两相行为进行释放铁的反应,两相转折点时间约在22min.在体外,不同等电点的DALF释放铁的速率有些差别.因此,作者认为铁蛋白释放铁的过程均受到蛋白壳自身柔性调节速率的影响. 王群力 黄河清 孔波 陈平 颜利 金宏伟关键词:铁蛋白 体外 动力学研究 反应动力学 电子供体 动力学过程 质谱技术在筛选肺癌血清差异多肽与蛋白质的应用 被引量:1 2006年 采用凝胶排阻层析(SEC)与MALD I-TOF质谱非在线联用技术研究男性血清中多肽与蛋白质的组成与分布.实验结果表明,分离介质Sephadex G-75比Sephadex G-50和Sephadex G-100更加适合血清多肽与蛋白质的预分离.男性血清经Sephadex G-75层析柱预分离和MALD I-TOF质谱分析后,可获得56个多肽与蛋白质的分子离子峰.差异比对实验表明,在正常人与患有肺癌疾病的男性血清中,正常男性血清存在着7种不同质荷比(m/z)的差异多肽与蛋白质,其m/z的比值分别为4 808,6 867,6 912,7 036,27 990,28 120,50 687;反之,在肺癌患者血清中发现差异的m/z值为6 139,6 544,8 417,8 480,11 109.这些差异多肽与蛋白质为临床诊断正常人和患有肺癌疾病患者的标记物提供一条途径. 陈东仕 金宏伟 黄慧英 翁鹭娜 黄河清关键词:SEPHADEX MALDI-TOF质谱 血清 肺癌 MALDI-TOF质谱技术研究人血清转铁蛋白分子结构、稳定性及新功能 转铁蛋白(transferrin,TF)是一类含有铁组分和糖链的金属蛋白质(80 kDa)。TF的主要生理功能是输送铁给细胞,或作为生物体液的抗菌因子。TF有两个同源末端(C-和N-端),每个末端又分为两个结构域,结构域... 金宏伟关键词:分子结构 稳定性 生理功能 抗肿瘤药物载体 文献传递