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中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因组cDNA克隆的构建与分析被引量：10: 2005年; 报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个连续的A,通过DNA重组技术组装成病毒基因组全长cDNA克隆.该克隆可在大肠杆菌DH5a中稳定扩增.经体外转录,RNA转录体转染BHK-21细胞,细胞发生病变,恢复病毒滴度达到107～108pFU/ml.全基因组cDNA克隆构建过程中引入的沉默突变(8 453位核苷酸由C变为T)产生Xba Ⅰ酶切位点作为遗传标记,在子代恢复病毒的基因组中稳定存在.从细胞病变的特征、BHK-21细胞的空斑形态、病毒的抗原性、病毒在细胞中的生长动力学特征以及对乳鼠的致病性等方面比较,恢复病毒和亲本病毒XJ-160没有显著区别,提示获得了具有感染性的XJ-160病毒全长cDNA克隆.该病毒感染性全基因组cDNA克隆可以作为反向遗传学系统,为进一步研究病毒复制和致病机制,以及开发相应的载体表达系统提供分子生物学工具.; 杨益良梁国栋付士红何海怀李晓宇邓娟苏乃伦王力华侯云德; 关键词：辛德毕斯病毒

RNAi抑制XJ-160病毒复制的研究被引量：4: 2005年; 目的通过建立RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制XJ160病毒复制的模型,在序列特异性、位置效应和量效关系等方面,探讨RNAi对XJ160病毒复制的影响,为进一步研究RNAi的抗病毒作用和机制奠定基础。方法按照siRNA(shortinterferencingRNA)的设计要求合成XJ160病毒特异siRNA,脂质体法转染BHK21细胞后感染XJ160病毒,通过测定病毒滴度、蛋白表达量及XJ160病毒RNA合成研究siRNA对XJ160病毒复制的抑制。结果成功建立了RNAi抑制XJ160病毒复制的模型,探讨了RNAi抑制该病毒复制作用的特点。结论外源导入的siRNA能够抑制XJ160病毒的复制,并且这种抑制作用具有明显的序列特异性、位置效应和存在量效关系等特点;siRNA是通过降解病毒RNA实现抑制病毒复制作用的。; 邓娟杨益良付士红王力华金冬雁梁国栋; 关键词：BHK-21细胞序列特异性病毒RNA 脂质体法抑制病毒

XJ-160病毒复制子型表达载体的构建被引量：6: 2003年; XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,全基因组测序已经完成。本文利用该病毒全基因序列首先构建了全基因组cDNA克隆质粒,在此基础上,利用基因重组技术将病毒结构基因序列替换为含有多个单酶切位点的序列,得到复制子表达载体质粒pRepxj160。为验证载体的功能,将报告基因绿色荧光蛋白(EGFP)和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)分别插入到载体的多克隆位点,得到两个表达质粒;经体外转录获得的转录体RNA转染BHK-21细胞后14h,可检测到报告基因的表达。结果表明我们构建的XJ-160病毒复制子型表达载体具有自主复制功能,可以表达异源基因。本研究为进一步开发具有我国自主知识产权的甲病毒载体奠定了基础。; 杨益良梁国栋付士红苏乃伦邓娟侯云德; 关键词：辛德毕斯病毒

RNA干扰技术抑制病毒复制的研究进展被引量：3: 2004年; RNA干扰是指dsRNA抑制细胞内同源基因表达的现象。dsRNA不仅参与内源基因表达调控 ,而且能够抑制宿主内病原微生物基因的表达 ,参与构筑生物体的防御机制。近年来 ,运用RNAi技术在哺乳动物中的研究不断深入 ,尤其是抑制病毒复制的研究成果令人欣喜 ,这为人类抗病毒治疗提供了新的思路。; 邓娟梁国栋; 关键词：RNA干扰 SIRNA 抗病毒治疗

RNAi抑制XJ-160病毒复制的研究: RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来新发现的一项基因沉默技术,是指双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)特异性抑制体内同源基因表达的过程.2002年RNAi被《Sci...; 邓娟; 关键词：RNAI SIRNA 抑制病毒复制抗病毒作用; 文献传递

我国首次分离到基因Ⅰ型乙型脑炎病毒被引量：84: 2004年; 目的　对新分离乙型脑炎病毒鉴定 ,了解病毒E基因区段的氨基酸序列特征及基因分型。方法　 2 0 0 1年在上海市采集蚊虫标本 ,用组织培养的方法分离到 7株病毒。进行病毒一般生物学鉴定 ,对病毒PrM和E基因区段约 2 0 0 0nt进行了扩增、克隆、测序。应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果　 7株病毒可以引起BHK 2 1细胞规律病变 ,病变时间为 6 0h。乳鼠脑内接种病毒后 72h死亡。所有新分离病毒与标准乙型脑炎病毒抗体阳性反应。用病毒PrM区段 (4 5 6～ 6 95位核苷酸 )进行的基因分型分析 ,新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒。以减毒活疫苗株SA14 14 2为标准 ,对 7株病毒的E基因区段进行分析 ,7株病毒之间核苷酸同源性在 97.7%以上 ,氨基酸同源性在 99.2 %以上 ;7株病毒与疫苗株SA14 14 2核苷酸差异在 12 .2 %左右 ,氨基酸差异在 2 .8%～ 3.2 %之间 ,共有 14个共同的氨基酸位点差异。结论　 2 0 0 1年在上海采集的蚊虫中新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒。; 王环宇付士红李晓宇宋宏闵继光邓娟杨益良Ichiro Kurane梁国栋; 关键词：乙型脑炎病毒 E基因 SA14-14-2 基因分型种系发生碱基配对

福建省新分离3株乙型脑炎病毒的分子特征鉴定被引量：17: 2005年; 目的　确定福建省新分离乙型脑炎病毒 (JEV)的基因分型及其E区段氨基酸序列特征。方法　用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增并克隆新分离JEV(0 2 4 1、0 2 4 3、0 2 10 2 )的PrM、E区段核苷酸序列 ,测序后应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果　新分离的 3株JEV属于基因Ⅲ型 ,E区段核苷酸和氨基酸与减毒活疫苗株SA 14 14 2株的同源性均在 96 %以上 ,在关键结构域有部分氨基酸差异。结论　福建省新分离的 3株病毒属于基因Ⅲ型JEV 。; 陈端王环宇付士红宋宏邓娟杨益良梁国栋; 关键词：乙型脑炎病毒 JEV E蛋白分子特征减毒活疫苗同源性

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邓娟