王轲
- 作品数：82 被引量：216H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院作物科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 富含赖氨酸、蛋氨酸的小麦新种质创制
- 【研究背景】小麦是最重要的粮食作物之一,也是一种重要的植物蛋白来源。小麦籽粒中蛋白质含量及必需氨基酸的组成平衡程度决定小麦的营养品质,根据国际粮农组织(FAO)公布的理想蛋白氨基酸含量,目前小麦籽粒中一些必需氨基酸如赖氨...
- 李溪王素容常亚南黄佩佩韩志阳唐华丽叶兴国王轲
- 关键词：小麦赖氨酸蛋氨酸
- 一种鉴定蛋白质中半胱氨酸数量的方法及其应用
- 本发明公开了一种鉴定蛋白质中半胱氨酸数量的方法，特别是公开了一种鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基中半胱氨酸数量的方法。通过该方法可以快速、准确的鉴定小麦高分子量谷蛋白亚基和等位基因的组成，并且能够确定每个高分子量谷蛋白亚基中含...
- 晏月明王轲李小辉马武军
- 文献传递
- 新型HMW-GS基因1Dy12.1^(*t)植物双元表达载体的构建及其遗传转化被引量：1
- 2009年
- 为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性,成功构建了1Dy12.1*t的植物双元表达载体pBINHP-GluT。该载体选择使用胚乳特异性强启动子,利用已知HMW-GS基因内部均不含有的XbaⅠ和KpnⅠ内切酶位点引入1Dy12.1*t编码区,并将1Dy12.1*t的表达调控置于T-DNA区内,从而奠定了其在不同HMW-GS基因功能活性研究上的便利性。通过根癌农杆菌烟草叶盘转化研究目的基因1Dy12.1*t在植物体的表达特性,SDS-PAGE和western blotting鉴定结果表明,1Dy12.1*t在转基因烟草种子胚乳中得到高效表达,进一步证实了所克隆基因的正确性和所构建载体的有效性。
- 张艳贞王轲张静晏月明
- 关键词：HMW-GS基因双元表达载体植物体高分子量谷蛋白亚基SDS-PAGE限制性内切酶
- 短柄草种子贮藏蛋白分析及其编码基因克隆
- 短柄草作为禾本科植物新的模式植物已引起国内外分子生物学研究者的重视，其植株较小，适应性强，生育期短，籽粒产量较高;基因组小，染色体少，DNA重复序列低，获得突变体容易，突变性状容易显现;基因组序列与黑麦草、小麦、大麦等早...
- 韩晓峰王轲李宏宇叶兴国晏月明
- 关键词：短柄草模式植物种子贮藏蛋白
- 文献传递
- 农杆菌介导大麦无筛选标记转基因植株的获得被引量：2
- 2020年
- 【目的】目前,国内外大麦遗传转化主要利用Golden Promise品种,基因依赖性严重,尤其是大麦的转化效率较低,并且获得安全型转基因大麦植株对其进一步产业化非常重要。建立高效、无筛选标记大麦遗传转化体系,拓展大麦遗传转化的受体基因型,为大麦基因功能解析和大麦转基因育种及商业化种植提供技术保障。【方法】以优良大麦品种Vlamingh为受体,取开花授粉后14 d左右的幼胚为转化材料,通过对培养基成分及培养步骤优化,建立农杆菌介导的高效遗传转化体系,并利用该体系将Bar和GUS在不同T-DNA区段的双T-DNA表达载体pWMB123转化大麦,获得候选转基因植株,然后利用PCR、Bar试纸条、组织化学染色和Southern blot等检测方法,在T1代转基因植株中成功获得无筛选标记大麦转基因植株。【结果】在愈伤组织分化阶段,发现培养基中添加1.0 mg·L^-1 KT、0.5 mg·L^-16-BA和0.05 mg·L^-1 NAA明显促进愈伤组织分化。在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg·L^-1的IBA的SM1(无其他生长素)的生根效果最佳,培养基中添加2.5 mg·L^-1 CuSO4显著降低了大麦转基因植株白化现象。共转化了138个幼胚,最终获得14株大麦转基因植株,转化效率10.14%。PCR、Bar试纸条、GUS染色等检测证实,T0代转基因植株中均含有Bar,而仅有10株含有GUS,2个T-DNA的共转化效率为71.43%。选取4个同时含有Bar和GUS的转基因植株,对其自交后代进行检测,在BL8株系中筛选到2株只含GUS而不含Bar的转基因植株,无筛选标记效率为6.9%。在T1代转基因植株中对Bar和GUS进行了Southern blot鉴定,发现在多数转基因植株中Bar和GUS均为多拷贝整合,进一步证实BL8-15和BL8-19为无筛选标记的转基因植株。【结论】利用大麦品种Vlamingh为转化材料可以较高效率获得转基因植株,提高愈伤组织分化效率和转基因植株生根效率,降低转基因植株白化现象。利用�
- 龚强王轲王轲叶兴国杜丽璞
- 关键词：大麦农杆菌介导法
- 基因枪转化小麦主要影响因素细述被引量：4
- 2014年
- 基因枪转化是目前小麦遗传转化的主要技术之一,高效的基因枪转化系统对于转基因小麦新品种培育、候选基因功能鉴定和功能基因组学研究具有重要意义。本文综述了影响基因枪转化小麦效率的主要因素,包括基因型、外植体、植物生长调节剂、轰击参数、筛选体系等,以期为进一步改进小麦基因枪转化技术,提高基因枪转化小麦的效率提供参考。
- 肖乐乐杜丽璞王轲李小辉徐惠君晏月明叶兴国
- 关键词：小麦基因枪影响因素
- 小麦突变体AS208中Glu-B1位点缺失对籽粒中蛋白体形成和储藏蛋白合成与加工相关基因表达的影响被引量：2
- 2017年
- 高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)是小麦籽粒贮藏蛋白的重要成分,其组成、表达和含量决定面团弹性和加工品质。本研究以Glu-B1位点上1Bx20和1By20双亚基沉默的小麦无性系变异体AS208为材料,以AS208的来源亲本轮选987作为对照,对AS208中Glu-B1位点的沉默机制和1Bx20、1By20亚基沉默对种子中蛋白体融合以及合成加工相关基因表达的影响进行了研究。Southern blot分析发现AS208比轮选987少2条特异带,染色体原位杂交(FISH)结果显示轮选987中有6条染色体出现杂交信号,而在AS208中有4条染色体出现杂交信号,表明AS208基因组中缺失Glu-B1位点。透射电镜观察发现,与轮选987相比,AS208的籽粒蛋白体形成过程,以及蛋白体大小和形状基本一致。qRT-PCR检测发现,在12个与籽粒蛋白质合成与加工相关基因中,有7个的表达模式两品种相似,有8个的表达量在AS208中高于在轮选987中,特别是Bip、PDI-1和PDI-5基因(高1.5~2.0倍)。本研究结果表明,小麦Glu-B1位点的基因对种子中蛋白体的形成没有明显影响,但一定程度上刺激了多数蛋白质合成和加工相关基因的表达,保证了种子内蛋白含量、蛋白体外形和大小基本不变,表现负反馈调节效应。
- 刘会云王婉晴李欣王轲王龙杜丽璞晏月明叶兴国
- 关键词：小麦高分子量谷蛋白亚基蛋白体分子伴侣
- 以抗除草剂Bar基因稳定转化谷子技术研究被引量：7
- 2018年
- 农杆菌介导的谷子遗传转化效率一直是制约谷子功能基因研究及转基因育种效率的主要因素。本研究以冀谷11谷子幼穗为外植体,选取0.5~1.0cm的幼穗,切成0.5cm左右的小段,置改良后的MS培养基上诱导15~20d形成胚性愈伤组织3120块。愈伤组织侵染转化前用侵染液悬浮浸泡,并经45°C热激预处理3min,可以有效提高26.1%的瞬时遗传转化效率。将转化后的愈伤组织经草丁膦(PPT)筛选后获得513块抗性愈伤组织,抗性愈伤组织获得率为16.4%。抗性愈伤组织经分化、壮苗培养后获得7株抗性植株,经PCR和Southern杂交检测得到6株T_0代转基因阳性株,对T_3代转化植株叶片进行PPT抗性分析,并结合Bar蛋白抗体试纸条鉴定,表明Bar基因已稳定整合到谷子基因组中。本研究建立了农杆菌介导转化谷子优良品种的遗传转化体系,对提高谷子转基因育种效率和谷子模式研究系统的建立有重要意义。
- 陈倩楠王轲汤沙杜丽璞智慧贾冠清赵宝华叶兴国刁现民
- 关键词：谷子根癌农杆菌热激抗除草剂
- 小麦花药培养后代和杂交后代中高分子量麦谷蛋白亚基变异分析被引量：3
- 2010年
- 通过对Alondra、Orofen等5个小麦品种进行花药培养,同时以新春9号、京771、CB037等9个高分子量麦谷蛋白亚基组成不同的小麦品种相互间配制24个正、反交组合,分析小麦加倍单倍体无性系和品种间杂交后代中高分子量麦谷蛋白亚基变异,探讨利用花药培养和杂交手段改良HMW-GS组成的可能性。SDS-PAGE电泳分析发现,小麦加倍单倍体无性系中HMW-GS发生了频繁变异,Alondra加倍单倍体中变异率最高(61.8%),Verry加倍单倍体次之(16.7%),均出现了原始材料中所不具备的亚基类型;HMW-GS在部分F1杂种中呈现不完全共显性、亚基表达沉默和正、反交亚基表达不一致现象,宁春4号/CB037、京771/宁春4号2个组合中出现了双亲所不含有的亚基;通过连续自交和对新出现亚基的跟踪选择,获得了表达新亚基的高代株系。研究结果对于改良小麦加工品质,加深了解小麦HMW-GS编码基因的遗传特性、结构特性等具有一定理论意义和实践价值。
- 韩晓峰叶兴国刘晓蕾魏亦勤杜丽璞王轲佘茂云樊明晏月明
- 关键词：小麦高分子量麦谷蛋白亚基花药培养无性系变异SDS-PAGE
- 广谱抗病的转TaWRK2A基因小麦的培育方法及其相关生物材料
- 本发明公开了抗病转TaWRK2A基因小麦的培育方法及其相关生物材料。本发明提供了TaWRK2A蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。实验表明，TaWRK2A是抗纹枯病和抗茎基腐病的重要基因。TaWRK2A基...
- 张增艳郭飞龙吴天赐王轲祝秀亮魏学宁
- 文献传递
