王绍清
- 作品数：7 被引量：21H指数：4
- 供职机构：大连医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 磷酸化JNK在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中表达的研究被引量：5
- 2008年
- 目的观察磷酸化JNK(p-JNK)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-P)中的表达水平,分析其在这两个细胞株中表达的关系及意义,以进一步探讨JNK基因在肝癌淋巴道转移过程中的作用。方法以小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移株(Hca-F)和低转移株(Hca-P)为研究对象,采用Western Blot检测p-JNK在Hca-F和Hca-P两细胞株的表达。结果p-JNK在Hca-F细胞株中的表达显著高于Hca-P,二者间差异有显著性(P<0.01)。结论p-JNK可能在促进肝癌淋巴道转移中发挥作用,本研究为进一步探讨其机制和功能奠定了基础。
- 张宇虹唐建武王绍清李玲孙成荣王波王梅
- 关键词：肝癌淋巴道转移P-JNKWESTERNBLOT
- 凝溶胶蛋白表达稳定下调的小鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞株的构建被引量：2
- 2009年
- 在前期蛋白质组学和基因组学研究发现凝溶胶蛋白(Gelsolin,GSN)是一个潜在促进小鼠肝癌淋巴道转移基因基础上,本次实验设计合成3条GSN的shRNA短发夹序列(shRNA1、2、3),并成功将它们构建入pSilencer3.1质粒,重组质粒转染鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞,获得了稳定转染的pSilencer-GSN-Hca-F细胞株.结果表明:GSN空白对照组和无关序列对照组细胞中在mRNA及蛋白表达水平均相近;与空白对照组相比较,3个重组质粒在mRNA水平对GSN抑制率分别为46.8%、48.2%、20.2%,在蛋白水平对GSN的抑制率分别为73.9%、45.1%、31.2%;shRNA1重组质粒的抑制效果最明显,统计学意义显著(P<0.01).通过RNA干扰和基因转染技术成功建立了GSN表达稳定下调的鼠肝癌Hca-F细胞株,为进一步研究GSN在恶性肿瘤淋巴道转移中的作用奠定了基础.
- 王绍清唐建武孙明忠刘淑清王波
- 关键词：凝溶胶蛋白淋巴道转移肝癌基因转染
- shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK的表达及细胞迁移和侵袭被引量：5
- 2009年
- 目的:研究shRNA对小鼠肝癌细胞株Hca-F JNK基因表达的抑制作用及对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明JNK表达水平与小鼠肝癌细胞淋巴转移潜能的关系。方法:构建3条shRNA表达载体,以脂质体法稳定转染Hca-F细胞;RT-PCR和Western blotting检测shRNA对JNK基因和蛋白表达的抑制作用,筛选出RNA干扰效果最好的shRNA;Transwell实验检测Hca-F细胞穿膜细胞数观察shRNA对Hca-F细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。结果:成功构建pSilencer-shRNA表达载体并稳定转染Hca-F细胞,筛选出对JNK表达抑制效果最好的shRNA;其转染后JNK mRNA表达水平与其他组比较明显下调(P<0.01);JNK蛋白质表达水平与其他组比较明显减少(P<0.01);转染shRNA后Hca-F细胞穿膜细胞数均显著下降(P<0.05)。结论:通过建立pSilencer-shRNA表达载体并稳定转染Hca-F细胞株,获得JNK表达稳定下调的Hca-F细胞株,抑制JNK表达水平可降低小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭能力,JNK可能是决定肝癌淋巴转移潜能的重要基因之一。
- 张宇虹唐建武王绍清王志强孙成荣王梅王波
- 关键词：C-JUNSHRNA
- Gelsolin降低小鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞株的侵袭和运动能力
- 背景:癌的侵袭与转移是癌细胞与宿主细胞、细胞外基质/( extracellular matrix,ECM/)之间一系列复杂的、多步骤的、多因素相互作用的动态过程。细胞骨架是横越在真核细胞细胞核和细胞膜内侧面的一种纤维状蛋...
- 王绍清
- 关键词：GELSOLIN肝肿瘤淋巴道转移
- 文献传递
- Gelsolin表达下调降低鼠源肝癌细胞的侵袭能力被引量：3
- 2009年
- 目的:研究高低淋巴道转移力细胞株Hca-F(淋巴道转移>80%)和Hca-P(淋巴道转移<30%)细胞中gelsolin的表达及其对Hca-F细胞侵袭能力的影响,阐明gelsolin在肝癌淋巴道转移过程中发挥的作用方法:应用荧光差异双向凝胶电泳技术及质谱定量和鉴定gelsolin在Hca-F细胞和Hca-P细胞中的表达;构建pSileneer-shR-NA-gelsolin表达载体,稳定转染Hca-F细胞并获得gelsolin的表达稳定下调的Hca-F细胞株,同时建立稳定转染pSilencer-无关序列Hca-F细胞株作为对照,在mRN水平和蛋白水平检测干扰后gelsolin的表达;Transwell 小室体外侵袭试验观察下调gelsolin表达后对Hca-F 细胞侵袭能力的影响结果:Gelsolin基因在Hca-F细胞中表达高于是Hca-P细胞( F/P= 1.7 );获得gelsolin稳定下调的Hca-F细胞株,RT-PCR和Wesiern Blot分析结果表明在稳定转染Hca-F细胞中,gelsolin在基因水平和蛋白水平的表达明显下调;在体外侵袭实验中,Hca-F细胞、对照组细胞、干扰组细胞穿过人工基底膜的细胞在570nm处的吸光度分别为0.2007±0.0129、0.2236±0.0446和0.1557±0.0051;表明下调gelsolin蛋白表达后,干扰组细胞穿过人工基底膜的细胞吸光度显著降低(P<0.05)。下调Hca-F细胞中gelsolin的表达后,转移的肿瘤细胞数量减少,癌细胞的侵袭能力下降结论:通过抑制gelsoin基因和蛋白的表达,可以降低鼠源肝癌细胞Hca-F侵袭能力的作用。
- 王绍清孙明忠刘淑清王波唐建武
- 关键词：GELSOLIN肝肿瘤淋巴道转移
- 胞内氯离子通道蛋白1基因沉默对小鼠肝癌细胞株增殖及侵袭能力的影响被引量：6
- 2010年
- 目的合成和筛选有效抑制细胞内氯离子通道蛋白1（CLIC1）基因的shRNA序列，构建表达质粒，并进一步研究CLIC1基因的表达被抑制后小鼠肝癌细胞株Hca-F细胞增殖及侵袭能力的变化。方法设计并合成3条理论上最佳的siRNA序列，进而将相应的双链DNA插入pGPU6／GFP／Neo质粒中，以脂质体Lipofectamine2000将DNA质粒稳定转染至小鼠Hca-F细胞中，收取细胞进行逆转录多聚酶链反应分析各组的CLIC1 mRNA表达水平，选出最佳干扰序列。应用细胞计数试剂盒检测最佳干扰序列表达质粒稳定转染的Hca-F细胞，对比观察其干扰前后增殖情况的变化；应用transwell小室检测其侵袭能力的变化。对研究数据应用统计学软件SPSS13．0进行方差分析。结果靶向CLIC1 mRNA的3个shRNA重组质粒载体经测序分析，shRNA编码序列与设计的片段完全一致。经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。稳定转染pGPU6／GFP／Neo-shRNA-3表达质粒的Hca-F细胞对其CLIC1 mRNA抑制效果明显，抑制率达42．4％。经该表达质粒的干扰后，Hca—F细胞的增殖能力明显增强，侵袭能力显著下降，空白对照组、无关序列处理组、shRNA干扰组的穿膜细胞个数分别为98．93±5．00、96．27±2．60、50．73±3．89，P值均〈0．01。结论pGPU6／GFP／Neo-shRNA-3表达质粒能高效地抑制小鼠Hca-F细胞中CLIC1 mRNA的表达，CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其侵袭的作用。
- 李荣宽唐建武张军王绍清王梅王波张宇宏
- 关键词：增殖RNA干扰氯化物通道
- shRNA稳定转染抑制氯离子通道蛋白1基因的表达对小鼠肝癌细胞的影响被引量：4
- 2010年
- 目的将shRNA稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,使得氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因表达抑制,观察肿瘤细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况以及迁移能力的变化。方法设计并合成理论上最佳的shRNA序列,进而将其插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,经测序和双酶切验证载体构建成功后以梭华-Sofast将DNA质粒稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,经Real-timeRT-PCR验证CLIC1mRNA表达下调后,应用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测干扰前后的Hca-F细胞,对比观察细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的变化,应用Transwell小室检验其迁移能力的变化。结果 pGPU6/GFP/Neo-shRNA对CLIC1mRNA抑制效果明显,抑制率达57%。经该表达质粒的干扰后,Hca-F细胞的增殖能力明显增强,停留于G2/M期的细胞明显增多,凋亡细胞显著减少,Transwell小室中穿膜细胞数量明显减少。结论 CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用,并且参与细胞周期中G2/M期的调节,同时能够促进肿瘤细胞的迁移。
- 李荣宽唐建武张军张宇虹王绍清王波王梅李妙玲陈文静金艳玲王静文魏元怡
- 关键词：细胞增殖细胞运动RNA小鼠
