王昌博
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 智力低下相关蛋白(FXR1P)与CMAS相互作用的生物学效应研究(英文)被引量：2
- 2013年
- 脆性X综合征(FXS)是一种遗传性智力低下疾病,其发病率仅次于21三体综合征.脆性X智力低下蛋白(FMRP)是FXS的关键性致病因子,该蛋白由脆性X智力低下基因1(FMR1)编码所得.FMR1在神经肌肉和睾丸组织中广泛表达.脆性X相关蛋白1(FXR1P)则是由FMR1的同源基因脆性X相关基因1(FXR1)编码所得,并且与蛋白质和RNAs之间存在着相互作用.许多疾病都涉及到FXR1表达的改变.为了了解FXR1P与CMAS(胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶)相互作用所产生的的生物学效应,我们构建了FXR1的过表达载体,并观察其在PC12细胞(大鼠鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)和VSMC(血管平滑肌细胞)中的表达以及继而对于细胞形态和CMAS活性相关的许多细胞指标的效应.我们证实,FXR1基因的过表达可以提高PC12细胞中CMAS的活性,并对于该类细胞的生长提供一定程度的保护作用.PC12细胞是一种较为常见的用于研究神经系统疾病的细胞系.结论:我们推测FXR1P是一个组织特异调节因子,可以改变PC12细胞而非VSMC细胞中神经节苷酯(GM1)的浓度.
- 马云秦凌雪董晓李斌元王昌博许璨王三虎何淑雅
- 关键词：GM1生物学效应PC12细胞VSMC
- BTF红色荧光蛋白表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达和定位研究
- 2014年
- 目的构建Bcl-2相关转录因子1（BTF）与红色荧光蛋白（RFP）融合表达载体并在大鼠血管平滑肌VSMC细胞中表达，为进一步研究BTF的相互作用蛋白及作用机制奠定实验基础。方法以人体外周血白细胞cDNA为模板，PCR扩增Btf基因，插入红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1中．构建重组表达载体pDsRed-N1-Btf，转染大鼠血管平滑肌VSMC细胞，通过激光共聚胶显微镜观察其在转染细胞中的表达及定位。结果DNA测序、酶切鉴定的结果显示，红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1-Btf构建成功，且序列正确。转染后经激光共聚胶显微镜观察到VSMC细胞中有红色荧光。且BTF主要定位于细胞质中。结论成功构建了pDsRed-N1-Btf表达载体，并主要定位于VSMC的胞质中，为后期研究BTF的相互作用蛋白及其与相互作用蛋白之间的作用机制奠定了良好的基础。
- 马云王昌博杨满君秦凌雪李斌元何淑雅
- 关键词：红色荧光蛋白融合蛋白
- FXR1真核表达载体的构建与表达及其对神经节苷脂浓度的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:构建脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体并检测其对神经节苷脂(GM1)浓度的影响。方法:以pYESTrp3-FXR1为模板,利用PCR扩增FXR1基因,PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得的阳性克隆进一步酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,采用Western blot检测FXR1的表达情况,同时采用ELISA试剂盒检测细胞内GM1的浓度。结果:PCR扩增产物为1.9 Kb的片段,与FXR1基因大小相符,阳性克隆经双酶切后获得两条分别为5.4 Kb和1.9 Kb的片段,测序结果与GeneBank中序列相同。构建成功的重组质粒pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,细胞中FXR1的表达增加,同时有效提高了细胞内GM1的浓度(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-FXR1,FXR1的表达增加可以提高SH-SY5Y细胞中的GM1浓度,这些为后续深入研究FXR1基因在神经组织发育中的调控功能及其在脆性X综合征(FXS)中的作用机制奠定了基础。
- 马云王昌博李斌元秦凌雪付亮董晓何淑雅
- 关键词：真核表达神经节苷脂
