梁焕斌 作品数:8 被引量:16 H指数:2 供职机构: 华南农业大学兽医学院 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 国家现代农业产业技术体系建设项目 广东省教育厅育苗工程项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
猪源戊型肝炎病毒ORF3基因的原核表达及抗原性分析 被引量:1 2013年 为了研究猪源戊型肝炎病毒(swHEV)ORF3部分基因的抗原性,试验通过设计引物,扩增swHEV ORF3部分基因片段,使用pMD18-T载体克隆,双酶切后插入pET-32a(+)表达载体,质粒经鉴定为阳性后,转化大肠杆菌BL21,并进行IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blot检测。结果表明:获得目的蛋白约35 ku,该蛋白具有良好的抗原性,以可溶性形式存在。 梁焕斌 梁楚敏 古洪浪 张亮权 王衡 张桂红关键词:ORF3基因 原核表达 不容忽视的潜在的人畜共患病-猪戊型肝炎 2013年 2003年,有报道称日本发现两例戊型肝炎(Hepatitis E,HE)感染病例,1例53岁患者尽管早期出现严重的肝炎症状,但很快恢复健康;另1例70岁患者出现同样的初期肝炎症状,但随后出现肝昏迷并死亡于突发性肝衰竭。病原分离得知两例患者感染的为Ⅳ型肝炎病毒;流行病学调查表明,在3个月内2人共同食用5次未熟的野猪肝。另外, 王衡 宁章勇 梁焕斌 古洪浪 张桂红关键词:戊型肝炎 人畜共患病 猪肝 感染病例 肝炎病毒 病原分离 猪戊型肝炎病毒液相蛋白芯片检测方法的建立 被引量:6 2017年 构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P<0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。 纪方晓 陈济铛 梁焕斌 朱婉君 古洪浪 王衡 王林川 张桂红关键词:猪戊型肝炎病毒 原核表达 液相蛋白芯片 广东省两株猪源戊型肝炎病毒的分离鉴定及其全基因序列分析 2013年 为进一步了解广东省近年猪戊型肝炎病毒(HEV)基因组特点及其演化情况,本研究于2010年~2011年间从广东省不同地区猪场收集的69份病猪胆汁样品中,分离得到两株猪源HEV(命名为SS19和ZS11)。采用通用引物通过PCR方法扩增病毒的全基因序列。应用DNAStar和MEGA 5基因分析软件,将分离株与24株不同基因型的HEV参考序列进行核苷酸全序列比对和遗传进化分析。结果显示,分离的两株猪源HEV SS19和ZS11的核苷酸序列相似性为95.6%,两个病毒分离株与基因Ⅳ型HEV各参考病毒株核苷酸序列最为接近,其相似性分别为83.2%~94.5%和83.6%~94.6%,并且均属于基因Ⅳ型HEV。实验结果表明,广东省HEV流行病毒株仍以基因IV型为主,病毒株之间存在一定的地域局限性。 梁焕斌 张桂红 张亮权 王衡 王德刚 梁楚敏关键词:猪戊型肝炎病毒 猪戊型肝炎病毒ORF2基因的分段原核表达及抗原表位的初步鉴定 被引量:2 2015年 为了初步鉴定猪戊型肝炎病毒(sw HEV)ORF2蛋白的抗原表位,通过设计两对引物,PCR扩增ORF2-1和ORF2-2两段基因片段,使用p MD18-T载体克隆,双酶切后构建重组质粒p ET32a-0RF2-(1,2),转化大肠杆菌BL21后进行IPTG诱导和SDS-PAGE凝胶电泳,最后用4株ORF2单抗对其进行Western Blot来初步鉴定其抗原表位。结果表明,分别获得约为36 ku和35 ku的两个目的蛋白,均以不可溶形式存在,抗原表位初步定位于ORF2-1这段蛋白中的414~523 aa。 古洪浪 梁焕斌 纪方晓 周沛 邓胜朝 曹振鹏 王衡 张桂红关键词:猪戊型肝炎病毒 ORF2基因 原核表达 抗原表位 基因Ⅳ型猪源HEV ORF3蛋白抗原表位的初步筛选 为进一步研究猪戊型肝炎病毒(HEV)开放阅读框3(ORF3)蛋白抗原表位的分布特征,本研究利用噬茵体随机肽库淘选技术,对本实验室制备并保存的一株抗HEV ORF3单克隆抗体进行4轮淘选,最终获得8种在目标区域编码不同12... 王衡 梁焕斌 记方晓 古洪浪 刘荣昌 张桂红关键词:猪戊型肝炎病毒 噬菌体展示 抗原表位 文献传递 猪戊型肝炎病毒的流行病学调查 被引量:7 2012年 利用双抗原夹心ELISA对2009—2011年间采自广东省各地区的若干猪场的484份血清样品,进行血清流行病学调查;对69份病猪胆汁样品进行分子流行病学调查,分离得到猪源戊型肝炎病毒(swine hepatitis E virus,swHEV),并基于ORF2部分基因序列进行核苷酸序列比对、相似性分析和遗传进化树分析,以期初步了解广东各地猪群戊型肝炎(hepatitis E,HE)的感染情况和流行特点。试验结果显示,全部被检查猪的swHEV抗体平均阳性率为71.9%(348/484),分离的猪源HEV毒株均属于基因Ⅳ型,阳性率为71.0%(49/69)。调查结果表明基因Ⅳ型swHEV在广东地区普遍流行。 张亮权 梁焕斌 王衡 高李泽 王德刚 尤佳 张桂红关键词:猪戊型肝炎病毒 流行病学调查 猪戊型肝炎病毒ORF3蛋白的分段表达及其抗原表位的初步筛选 戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是引起爆发性及散发性肝炎的主要原因,血清学调查表明[1],世界1/3 人口曾经感染过戊型肝炎病毒。戊型肝炎具有明显的年龄特异性,对于老年人、慢性肝炎患者及孕妇危害性尤高,孕妇感染H... 王衡 梁焕斌 古洪浪 宁章勇 张桂红关键词:猪戊型肝炎病毒 蛋白表达 抗原表位