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杨倩: 作品数：127 被引量：392H指数：15; 供职机构：中国人民解放军更多>>; 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry“九五”国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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乙型和丙型肝炎病毒对细胞周期素及细胞周期素依赖性蛋白激酶的调节被引量：4: 2003年; 0引言乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)发生发展之间的密切关系,早已被大量的临床医学和临床流行病学资料所证实[1].随着细胞周期(cell cycle)调节的分子生物学机制研究不断深入,特别是关于细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)的发现,使得细胞周期这一经典的概念又有了新的内容,大大促进了肿瘤形成的分子生物学研究的进展[2].; 成军刘妍洪源王建军杨倩; 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒细胞周期素

肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白基因筛选被引量：8: 2004年; 目的:筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白相互作用蛋白的基因,探讨前-前- S在HBV致病中的作用. 方法:构建前-前-S的酵母细胞表达载体,采用酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析. 结果:获得了54个与前-前-S蛋白特异性结合的阳性克隆,其中包括30种已知蛋白基因和8个未知功能基因. 结论:克隆出与乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合的肝细胞蛋白基因,为进一步研究前-前-S在HBV致病中的作用奠定了基础.; 蔺淑梅张树林成军刘敏王琳王建军杨倩黄燕萍白桂芹; 关键词：肝细胞 CDNA文库乙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因TAHCCP2的克隆被引量：5: 2003年; 目的:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因.方法:以 HCV 核心蛋白表达质粒 pcDNA3.1(-)-core 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取 mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,从转染 pcDNA3.1(-)-core 的 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:新基因命名为 TAHCCP2,编码序列全长为429个核苷酸(nt),编码产物由142个氨基酸残基(aa)组成,测序证实 TAHCCP2克隆正确.在 GenBank 中注册,注册号为 AY039043.结论:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因TAHCCP2,为进一步研究 HCV 核心蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.; 王建军成军刘妍杨倩纪冬党晓燕王春花; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因克隆逆转录多聚酶链反应分子生物学机制

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒反式调节靶基因的抑制性消减杂交和基因芯片分析结果的比较被引量：15: 2004年; 目的:筛选与克隆HBV和HCV蛋白反式调节靶基因,阐明HBV和HCV感染后慢性肝脏疾病的发病机制.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及表达谱基因芯片(cDNAmicroarray)技术筛选并克隆HBV和HCV蛋白反式调节的靶基因.以HBV和HCV蛋白的表达质粒转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.同时进行表达谱基因芯片技术分析.结果:成功构建人HBV和HCV蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,对HBV和HcV蛋白反式调节的靶基因同时进行基因表达谱芯片的分析.在SSH分析中,文库扩增后均得到200-800bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列.对于不同的肝炎病毒蛋白反式调节的靶基因类型,以及不同的分析技术研究的结果进行比较分析,发现了一系列的共同调节的靶基因,说明不同的肝炎病毒蛋白反式调节具有共同的作用途径.结论:筛选到的反式调节靶基因,包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了HBV和HCV蛋白可能存在的调控机制,有助于阐明HBV和HCV蛋白的反式调节在慢性肝脏疾病的发生发展中的作用.; 成军刘妍洪源王建军杨倩王琳; 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒抑制性消减杂交基因芯片肝脏疾病

抑制性消减杂交技术原理及应用被引量：32: 2003年; 0引言抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术.其原理是以抑制性多聚酶链反应(PCR)反应为基础的cDNA消减杂交技术.通过合成两个不同的接头,连接于测试cDNA片段的5'末端,达到选择性扩增差异性表达的cDNA片段,抑制非目的cDNA的扩增.该技术与其他消减杂交技术相比具有假阳性率低、敏感性高、效率高等优点而得到广泛应用.; 杨倩成军刘妍王建军张树林; 关键词：抑制性消减杂交技术真核生物细胞分子生物学慢性肝炎肝纤维化肝细胞癌

乙型肝炎病毒基因组中前前-S-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定被引量：26: 2003年; 为了解前前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒pCAT3 前前 S promoter能够激活CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3 basic的 10倍 ,说明pCAT3 前前 S promoter具有启动子活性 ,为在HBV基因组DNA序列中界定、研究新的前前 SORF提供了直接的实验依据。; 杨倩董菁成军刘妍洪源王建军张树林; 关键词：启动子

乙型肝炎病毒基因组中前-X-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定被引量：19: 2003年; 利用长距离精确聚合酶链反应 (LA PCR)扩增慢性乙型肝炎患者血清来源的 5个全长的HBV基因组DNA ,在分析不同克隆之间的序列变异程度时 ,发现所获得的 5个克隆在X区之前可能还存在一个开放读码框架 (ORF) ,长度 16 8bp ,编码 5 6个氨基酸残基(aa) ,并将其暂时命名为前 X(pre X)。为了解前 X编码区上游DNA序列是否具有启动子活性 ,选取翻译起始密码子ATG上游 2 2 5bp的基因片段 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 X promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用ELISA法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒 pCAT3 前 X promoter能够指导CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3的 3 5倍 ,提示pCAT3 前 X promoter中插入的DNA序列具有启动子活性 ,说明这一段基因序列中存在新的启动子区 ,为研究、界定前 X的ORF的存在提供了直接的依据。; 杨倩董菁成军刘妍洪源王建军王琳张树林; 关键词：启动子

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对RET指蛋白信号转导的影响: 2003年; 0 引言RET 指蛋白(RET finger protein,RFP)属于 B 盒式结构的锌指蛋白(zinc finger protein)家族成员,具有三分体结构特点,结构域包括一个环指结构、一个 B-盒式结构、一个卷曲结构位点.当 RET 指蛋白的三分体结构与酪氨酸激酶发生融合时,就会变成癌基因.RFP蛋白在精子形成(spermatogenesis)过程的特定时期以及人和小鼠的各种成年组织中有表达活性.许多具有 B 盒式结构的蛋白都形成同二聚体,但这种三分体中的各个成分的单独情况下的具体作用目前还不十分清楚.初步研究结果表明,乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)基因组编码蛋白对于 RET 的基因表达水平具有显著的上调作用,显示 RET 的基因表达在 HBV、HCV感染引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)的发病机制中具有重要的作用.; 成军刘妍杨倩王建军洪源王琳; 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒信号转导免疫球蛋白肿瘤

丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式调节基因2不同剪切体调节靶基因的比较: 目的利用基因表达谱芯片技术筛选、比较丙型肝炎病毒NS5A反式调节基因2不同剪切体对 HepG2细胞基因表达的调控作用及差异性。方法利用分子生物学技术和生物信息学技术相结合,克隆人NS5ATP2的不同剪切体蛋白的编码基因,...; 成军杨倩刘妍王建军纪冬; 文献传递

乙型肝炎病毒基因组新基因的研究及意义: 乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝部分双链DNA病毒,基因组长度只有3.2kb,结构基因与调节基因序列之间重叠,甚至结构基因序列之间重叠,因此HBV DNA序列的利用率之高实属罕见.1979年首次报道HBV DNA的全基因...; 成军董菁杨倩; 关键词：乙型肝炎病毒流行株全基因序列血清型; 文献传递

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