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桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、组织表达及配基结合特性被引量：19: 2013年; 为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对该基因进行了原核表达。BdorOBP2开放阅读框长447bp,编码148个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点。定量PCR结果显示,桔小实蝇BdorOBP2在不同组织中均有表达,其中头部中的表达量最高,翅中表达量最低(为头部表达量的63%±6%)。构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导并获得了重组BdorOBP2并进行了亲和层析纯化。最后以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,利用荧光竞争结合实验测定了重组BdorOBP2与7种主要寄主水果气味物质的结合能力,发现其对多数酯类和醛类化合物亲合力较强,亲合力最强的气味物质为反-2-己烯醛和β-紫罗兰酮,结合常数KD分别为9.96和15.37μmol/L。本研究结果可为高效地开发和设计桔小实蝇的嗅觉引诱剂配方提供一定的理论依据和参考。; 陈玲李红亮周宇翔赵磊张林雅倪翠侠商晗武; 关键词：桔小实蝇气味结合蛋白组织表达谱原核表达

中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1的功能模式分析及亚细胞定位被引量：2: 2017年; 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)重组化学感受蛋白CSP1与不同化学信息素的结合功能、模式及其亚细胞定位,明确触角特异表达的CSP1蛋白功能。【方法】将克隆的中蜂CSP1构建至p ET-32a(+)载体并转入BL21(DE3)感受态细菌中,挑取单克隆菌落接种于LB培养基,培养过夜后按1%(V/V)进行转接,继续培养至OD600≈0.4左右时,加入IPTG至终浓度为1 mmol·L^(-1)后继续诱导5 h。将诱导好的CSP1大肠杆菌菌液离心弃上清,再加入细菌裂解液超声破碎,离心后上清用镍柱对CSP1重组蛋白进行亲和层析纯化,再经PBS透析液透析后,最终获得可溶的具有生物活性的CSP1重组蛋白。设定荧光分光光度计的激发波长为281 nm,测定竞争性荧光探针1-NPN与CSP1的相互作用,用Scatchard方程计算其解离常数,再计算获得CSP1与各种候选化学信息素的亲和力。以CSPMbra A6晶体结构(PDB代码:1n8v)为模板,通过同源建模和分子对接解析CSP1蛋白与化学信息素的结合模式,根据Mol Dock Score选出最佳对接模型进行作用机理分析,获得结合时配基周围的CSP1残基分布以及氢键产生情况,以此获得信息素与CSP1的结合模式。最后将CSP1免疫注射兔子获得多克隆抗体,并对中蜂工蜂触角进行低温固定、脱水和包埋后进行超薄切片,然后对样品切片进行免疫胶体金电镜定位,以解析CSP1在触角感器中的亚细胞分布。【结果】成功诱导获得可溶性的重组中蜂CSP1蛋白,利用荧光光谱分析1-NPN与CSP1的解离常数K1-NPN为2.1μmol·L^(-1),结合位点数n为0.99,表明结合时基本以1:1结合,线性相关系数为0.9933。在9种化学信息物质中,CSP1与两种蜜蜂蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)和9-羰基-2癸烯酸(9-ODA),和植物挥发物成分3-蒈烯均具有较强的结合能力,其中与CSP1亲和力最强的对羟基苯甲酸甲酯的[IC50]和解离常数KD分别达到10.1和7.68μmol·L^(-1)。分子�; 谭静宋欣密傅晓斌唐明珠吴帆华启云李红亮; 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白分子对接免疫细胞化学定位

中华蜜蜂工蜂头部cDNA文库的构建与分析被引量：3: 2007年; 以中华蜜蜂13个不同日龄的工蜂头部为材料,提取总RNA,经mRNA分离纯化,反转录合成双链cDNA,以pBluescript II SK(+)为载体,构建成中蜂头部cDNA文库。该文库的滴度为8×104pfu/mL,插入片段长500～3000bp,重组频率在90%以上,表明文库容量好、重组率高、插入片段较大,为规模化EST测序,并进一步研制基因芯片奠定了基础。; 李红亮杨渝晓沈立荣高其康程家安; 关键词：CDNA文库中华蜜蜂

中华蜜蜂对冬季设施草莓授粉活动规律和增效的初步研究被引量：6: 2016年; 中华蜜蜂(简称中蜂)是我国的本土蜂种,也是目前广泛应用于冬季草莓大棚的授粉蜂种。利用中蜂授粉是保证大棚草莓优质高产的必需条件,但在冬季低温环境下中蜂的授粉效率常常比较低,因此需要通过各种手段和措施提高中蜂的授粉效率。通过对冬季草莓大棚内中蜂的日常活动规律进行跟踪记录,获得中蜂在大棚内不同光照、时间段的访花规律;然后分别在食物饲喂和添加嗅觉活性剂等不同处理条件下研究中蜂对大棚草莓的授粉效率,结果显示,在不提供食物饲喂时,其访花频率和单花停留时间均显著高于提供食物,而施加嗅觉活性剂则与对照组无显著差异。; 唐明珠王珏方献平余红李红亮; 关键词：中华蜜蜂温室草莓

中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克隆、原核表达和配基结合特性分析被引量：8: 2016年; 【目的】气味结合蛋白在中华蜜蜂Apis cerana cerana嗅觉系统中起到重要作用,本实验拟研究中华蜜蜂一个新的信息素结合蛋白OBP10及其与蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物的结合特性。【方法】本实验通过RT-PCR扩增获得OBP10基因全长(Gen Bank登录号:KP717060.1),以p ET-30a构建原核表达载体,并以Ni2+琼脂糖柱进行重组蛋白表达和分离纯化,在N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)作为荧光报告子下利用荧光光谱法体外研究重组Acer OBP10与多种候选化学配基的结合特征。【结果】经多序列联配分析,发现Acer OBP10的多个同源基因均为信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)。配基结合特性分析显示,Acer OBP10对14种候选配基中的蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)竞争力最大,相对荧光可降至6.06%,解离常数11.04μmol/L;进一步表明Acer OBP10属于一个新的中蜂PBPs。此外,Acer OBP10也能和包括工蜂信息素(香叶醇和橙花醇)、报警信息素(2-庚酮和乙酸异戊酯)等蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物之一的β-紫罗兰酮结合,表明Acer OBP10可能是一种以信息素结合为主的多功能结合蛋白。【结论】Acer OBP10是中蜂一个新的信息素结合蛋白,与此前我们鉴定的蜂王信息素结合蛋白Acer ASP1相比,Acer OBP10对蜜蜂信息素的结合谱更为广泛,这些结果将对进一步研究中华蜜蜂信息素识别和传递提供理论基础,对于深入了解中华蜜蜂嗅觉影响生理功能的行为机制具有重要意义。; 吴帆黄君君谭静唐明珠李红亮; 关键词：中华蜜蜂信息素结合蛋白信息素

一种昆虫活体气味实时采集装置: 本实用新型涉及一种昆虫活体气味实时采集装置，包括收集管，吸附管。收集管由铁架台支起，吸附管由蝴蝶夹固定位置，使用时脉冲气体发生器在收集管一侧。收集管另一侧与吸附管连接，吸附管与二个连续的锥形瓶相连接，另一端与气泵连接。所...; 郑立波唐明珠李红亮; 文献传递

一种基于植物花粉DNA提取和荧光定量的天然枇杷蜜检测和判定方法: 本发明公开了一种基于植物花粉DNA提取和荧光定量的天然枇杷蜜检测和判定方法，属于生物技术领域。方法包括，步骤1：根据枇杷18S RNA的ITS序列，设计并获得了特异寡核苷酸引物和TaqMan探针；步骤2：利用改进的CTA...; 李红亮张籍吴帆

茶尺蠖普通气味结合蛋白EoblGOBP2与茶树挥发物的结合功能研究被引量：10: 2014年; 茶尺蠖是茶园中一种重要的鳞翅目害虫,主要以幼虫取食危害茶树叶片,给茶叶生产带来了严重威胁。茶尺蠖在寻找配偶、产卵地以及觅食活动中其嗅觉系统发挥了非常重要的作用。本研究以茶尺蠖Ectropis obliqua Prout嗅觉系统中的一个普通气味结合蛋白——EoblGOBP2为研究对象,在克隆得到的EoblGOBP2基因基础上,通过对EoblGOBP2进行原核表达、分离纯化后,利用1-NPN的荧光竞争结合法研究了体外重组EoblGOBP2与茶树挥发物的结合生理功能。Scatchard方程显示EoblGOBP2与1-NPN的解离常数KD为2.310μmol·L-1。在荧光竞争结合实验中,7种待测配基均能使1-NPN的相对荧光强度降低到50%以下,表明与EoblGOBP2均有较强的结合能力,而其中邻苯二甲酸二丁酯结合能力最强,KD值达到4.353μmol·L-1。本研究7种配基均为茶树叶片挥发物,表明EoblGOBP2在茶尺蠖嗅觉系统对茶树挥发物的信息识别结合功能中发挥了重要作用。; 赵磊崔宏春张林雅陈玲余继忠李红亮; 关键词：茶尺蠖原核表达纯化

番茄红素与牛血清白蛋白的相互作用被引量：3: 2012年; 采用荧光光谱法研究了番茄红素(Lycopene)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用关系。研究表明,番茄红素能使BSA在340nm(λem)处产生荧光猝灭,猝灭机理为静态猝灭。pH=7.4,温度为293K时,猝灭时表观结合常数KA为5.33×104L.mol-1,结合位点数n为0.6461,同时荧光猝灭最大速率常数Kq=2.76×1012L.mol-1.s-1。二者呈自发结合且主要作用力为氢键和范德华力,结合距离r与能量转移效率E分别为5.6nm和0.098,偏酸性或碱性的条件使番茄红素与BSA的结合常数增加。; 白梅竹李红亮张林雅; 关键词：番茄红素牛血清白蛋白荧光光谱法

中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析: 【目的】研究中华蜜蜂Apis cerana cerana体外重组普通气味结合蛋白AcerASP2与不同气味信息的结合功能和模式。【方法】通过诱导条件的优化和纯化,在获得的重组AcerASP2蛋白基础上,研究竞争性荧光探针...; 李红亮韩宝瑜商晗武; 关键词：中华蜜蜂普通气味结合蛋白分子对接; 文献传递

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李红亮

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